Name: Co-Kultur-System mit einer Scheibe Organotypische Gehirn-und 3D-Sphäroid von Karzinomzellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-10-09T22:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: Lernen Sie ein Co-Kultur-System mit organotypischen Hirnschnitten und Karzinomzellen zur Visualisierung glialer Interaktionen während der Metastasenbildung. Diese Methode ermöglicht Echtzeitbeobachtungen für Krebsforschung.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Die Autoren danken Chalid Ghadban für seine hervorragende technische Hilfe, Andreas Wodarz und Stephan Heermann für ihre technischen Beratung über die konfokale und Zeitraffer-Mikroskopie. Es gibt keinen Interessenkonflikt für einen der Autoren. Diese Arbeit wird von der Deutschen Forschungsgemeinschaft (DFG) in Project 2 von Forschergruppe 942 (FOR942 BI 703/3-1) gefördert, von den Dres.. Bayer-Stiftung (Baden Württembergischer Krebspreis, Deutschland) und durch das Forschungsprogramm der Medizinischen Fakultät der Georg-August-Universität Göttingen, Deutschland.

Dieses neue Modell ist eine Adaption eines bereits veröffentlichten organotypischen hippocampalen Hirnschnitt Ansatz 9-12. Änderungen und Ergänzungen wurden eingeführt, um die Gewebe-Wechselwirkungen Krebszellen Gehirn zu optimieren und um die Reproduzierbarkeit zu gewährleisten. Die Studie wurde überprüft und von der lokalen Ethikkommission genehmigt. Die Tiere wurden sorgfältig nach den Richtlinien für die Tierpflege an der Universitätsmedizin Göttingen behandelt. Die organotypischen Hirnschnitt Co-Kultur kann in zwei Schritte unterteilt werden. Schritt eins ist die Herstellung der organotypischen Hirnschnitt. Schritt zwei besteht aus der Tumorzelle Vorbereitung und Ablagerung in der Co-Kultur-Modell. 1. Organotypische Hirnschnitt <ol><li> Vorbereitung der Dissektion Medium, bestehend aus Minimum Essential Medium (MEM), mit 0,2 mM Glutamin, 100 U / ml Penicillin, 100 mg / ml Streptomycin und 4,5 mg / ml Glucose. </li><li> Enthaupten die Mäuse aus jeder Maus-Stamm zwischen postnatalen Tagsechs und acht (P6-8). </li><li> Entfernen Sie das Gehirn schnell aus dem Schädel unter aseptischen Bedingungen und überträgt es auf eiskalte Dissektion Medium. </li><li> Entfernen Sie die Frontstange und das Kleinhirn von der Ganzhirnschnitt. </li><li> Fix und stabilisieren das Gehirn auf einer Bühne mit Kryo Leim und 5% Agarose. </li><li> Schneiden Sie die Gehirnschnitte horizontal zu einer Dicke von 350 um mit einem Vibratom. </li><li> Sammeln Sie vier Minuten vor sechs ganze Hirnschnitten von einem einzigen Gehirn der Maus, je nach Art und Alter. </li><li> Vorbereitung des Kulturmediums, bestehend aus 50% MEM, 25% Hanks &#39;ausgewogener Salzlösung (HBSS), 25% normalem Pferdeserum (NHS), 0,2 mM Glutamin, 100 U / ml Penicillin, 100 mg / ml Streptomycin (Sigma, München, Deutschland) und 4,5 mg / ml Glucose. </li><li> Setzen Sie jede organotypischen Hirnschnitt auf einem 0,4 um Polycarbonat Transwell Membraneinsatz in einem Sechs-Well-Platte mit 1 ml Kulturmedium in der unteren auch. </li><li> Kultur organotypischen Hirnschnitten über Nacht in einem humidified Atmosphäre mit 5% CO 2 bei 37 ° C Inkubator. </li></ol> 2. Die Scheibe Cokultur Modell <ol><li> Embed 10 5 von GFP-transfizierten Tumor oder anderen Zellen (zB MCF-7-GFP-Zellen) in 20 ul Gel-Matrix, bestehend aus 15% RPMI-Medium und 85% ECM-Gel. </li><li> Platzieren Sie den MCF-7-Gelmatrix Mischung in einem sterilen metallischen Abstandshalter (3,8 mm Durchmesser) unmittelbar neben dem kortikalen Bereich der organotypischen Hirnschnitt und Inkubation für 2 Stunden. </li><li> Entfernen Sie die Abstandshalter und ermöglichen die 3D-Tumor Sphäroid mit der organotypischen 24-96 h Kokultur. </li><li> Ändern Sie jeden zweiten Tag das Kulturmedium. </li></ol> 3. Immunfluoreszenz-Färbung von Astrozyten und Mikroglia im Gehirn Organotypische Scheibe Cokultur <ol><li> Befestigen Sie den organotypischen Hirnschnitt Co-Kultur mit 4% Paraformaldehyd für 8 h bei 4 ° C </li><li> 5 min waschen die Scheibe Kokultur mit PBST (PBS mit 0,5% Triton X-100). </li><li> Blockieren Sie die sBeispiele mit normalem Ziegenserum in PBST (1:20) bei Raumtemperatur für 1 Stunde. </li><li> Färben die Astrozyten durch Inkubation der Kokultur mit Hirnschnitt anti-saure Gliafaserprotein monoklonalen Antikörper (GFAP, 1:200 in PBST) für 36 h bei 4 ° C, gefolgt von Ziege-Anti-Maus-TRITC (1:100 in PBST)-Färbung 1 h bei Raumtemperatur. </li><li> Dreimal mit PBST für 5 min Waschen der Proben. </li><li> Färben die Mikroglia-Zellen mit ILB 4-Alexa Fluor 647 (1:100 in PBST) für 1 h bei Raumtemperatur. </li><li> Gegenfärbung der Hirnschnitt Co-Kultur mit DAPI (1:1000) für 3 min bei Raumtemperatur. </li><li> Berg-und Deckglas den Hirnschnitt Co-Kultur mit DAKO-Leuchtstoffmontagemedium. </li><li> Bewertung der Grad der Tumorinvasion der Basis der folgenden Bewertungssystem: 0 = keine der Zellen; + &lt;1/3, + + = 1/3 - 2/3, + + + ≥ 2/3 der Zellen eingedrungen (erster messen Sie die Länge der Kontaktbereich zwischen Tumor-Stecker und in Scheiben schneiden, dann messen Sie die fraction Kontakt nachweisbar durch die eindringenden Zellen). </li></ol> 4. Live-Imaging von der Interaktion zwischen Glia-und Tumorzellen <ol><li> Führen Sie das Experiment unter einem umgekehrten Leica DMI 6000B Mikroskop bei 10-facher Vergrößerung und einem Objektiv Leica DFC 350 FX CCD-Kamera. </li></ol>

<ol><li>Langley, R. R., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+seed+and+soil+hypothesis+revisited--the+role+of+tumor-stroma+interactions+in+metastasis+to+different+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">The seed and soil hypothesis revisited--the role of tumor-stroma interactions in metastasis to different organs.</a> Int. J. Cancer. 128, 2527-2535 (2011).</li>
<li>Joyce, J. A., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironmental+regulation+of+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Microenvironmental regulation of metastasis.</a> Nat. Rev. Cancer. 9, 239-252 (2009).</li>
<li>Mantovani, A., Allavena, P., Sica, A., Balkwill, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer-related+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cancer-related inflammation.</a> Nature. 454, 436-444 (2008).</li>
<li>Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+organ+microenvironment+in+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Cancer+Biol%22%5BJournal%5D)">The role of the organ microenvironment in brain metastasis.</a> Semin. Cancer Biol. 21, 107-112 (2011).</li>
<li>Rath, B. H., Fair, J. M., Jamal, M., Camphausen, K., Tofilon, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytes+enhance+the+invasion+potential+of+glioblastoma+stem-like+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Astrocytes enhance the invasion potential of glioblastoma stem-like cells.</a> PloS one. 8, e54752(2013).</li>
<li>Steeg, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+metastasis%3A+mechanistic+insights+and+clinical+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Tumor metastasis: mechanistic insights and clinical challenges.</a> Nat. Med. 12, 895-904 (2006).</li>
<li>Eichler, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+of+brain+metastases-translation+to+new+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">The biology of brain metastases-translation to new therapies.</a> Nat. Rev. Clin. Oncol. 8, 344-356 (2011).</li>
<li>Winkler, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+glioma+cell+invasion+in+vivo+reveals+mechanisms+of+dissemination+and+peritumoral+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Imaging glioma cell invasion in vivo reveals mechanisms of dissemination and peritumoral angiogenesis.</a> Glia. 57, 1306-1315 (2009).</li>
<li>Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+organotypic+cultures+of+nervous+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method for organotypic cultures of nervous tissue.</a> J. Neurosci. Methods. 37, 173-182 (1991).</li>
<li>Kreutz, S., Koch, M., Ghadban, C., Korf, H. W., Dehghani, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cannabinoids+and+neuronal+damage%3A+differential+effects+of+THC%2C+AEA+and+2-AG+on+activated+microglial+cells+and+degenerating+neurons+in+excitotoxically+lesioned+rat+organotypic+hippocampal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Cannabinoids and neuronal damage: differential effects of THC, AEA and 2-AG on activated microglial cells and degenerating neurons in excitotoxically lesioned rat organotypic hippocampal slice cultures.</a> Exp. Neurol. 203, 246-257 (2007).</li>
<li>De Simoni, A., Yu, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+organotypic+hippocampal+slice+cultures%3A+interface+method%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Preparation of organotypic hippocampal slice cultures: interface method.</a> Nat. Protoc. 1, 1439-1445 (2006).</li>
<li>Fuller, L., Dailey, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+rodent+hippocampal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22CSH+Protoc%22%5BJournal%5D)">Preparation of rodent hippocampal slice cultures.</a> CSH Protoc. 2007, pdb prot4848(2007).</li>
<li>Lorger, M., Felding-Habermann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capturing+changes+in+the+brain+microenvironment+during+initial+steps+of+breast+cancer+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Capturing changes in the brain microenvironment during initial steps of breast cancer brain metastasis.</a> Am. J. Pathol. 176, 2958-2971 (2010).</li>
<li>Brana, C., Biggs, T. E., Mann, D. A., Sundstrom, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+macrophage+hippocampal+slice+co-culture+system%3A+application+to+the+study+of+HIV-induced+brain+damage%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">A macrophage hippocampal slice co-culture system: application to the study of HIV-induced brain damage.</a> J. Neurosci. Methods. 90, 7-11 (1999).</li>
<li>Kim, J. A., Yamada, M. K., Nishiyama, N., Matsuki, N., Ikegaya, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mossy+fiber+pathfinding+in+multilayer+organotypic+cultures+of+rat+hippocampal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Mol.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Mossy fiber pathfinding in multilayer organotypic cultures of rat hippocampal slices.</a> Cell. Mol. Neurobiol. 23, 115-119 (2003).</li>
<li>Matsumura, H., Ohnishi, T., Kanemura, Y., Maruno, M., Yoshimine, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+glioma+cell+invasion+by+confocal+laser+scanning+microscopy+in+a+novel+brain+slice+model%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Biophys.+Res.+Commun%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of glioma cell invasion by confocal laser scanning microscopy in a novel brain slice model.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 269, 513-520 (2000).</li>
<li>Charles, N. A., Holland, E. C., Gilbertson, R., Glass, R., Kettenmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+brain+tumor+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">The brain tumor microenvironment.</a> Glia. , (2011).</li>
<li>Mizutani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fractalkine+receptor+but+not+CCR2+is+present+on+microglia+from+embryonic+development+throughout+adulthood%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">The fractalkine receptor but not CCR2 is present on microglia from embryonic development throughout adulthood.</a> J. Immunol. 188, 29-36 (2012).</li>
<li>Kettenmann, H., Hanisch, U. K., Noda, M., Verkhratsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Physiology of microglia.</a> Physiol. Rev. 91, 461-553 (2011).</li>
<li>Markovic, D. S., Glass, R., Synowitz, M., Rooijen, N., Kettenmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+stimulate+the+invasiveness+of+glioma+cells+by+increasing+the+activity+of+metalloprotease-2%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuropathol.+Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Microglia stimulate the invasiveness of glioma cells by increasing the activity of metalloprotease-2.</a> J. Neuropathol. Exp. Neurol. 64, 754-762 (2005).</li>
<li>Baumert, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pathology-based+substrate+for+target+definition+in+radiosurgery+of+brain+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Radiat.+Oncol.+Biol.+Phys%22%5BJournal%5D)">A pathology-based substrate for target definition in radiosurgery of brain metastases.</a> Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 66, 187-194 (2006).</li>
<li>Palmieri, D., Chambers, A. F., Felding-Habermann, B., Huang, S., Steeg, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+of+metastasis+to+a+sanctuary+site%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">The biology of metastasis to a sanctuary site.</a> Clin. Cancer Res. 13, 1656-1662 (2007).</li>
<li>Pukrop, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+promote+colonization+of+brain+tissue+by+breast+cancer+cells+in+a+Wnt-dependent+way%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Microglia promote colonization of brain tissue by breast cancer cells in a Wnt-dependent way.</a> Glia. 58, 1477-1489 (2010).</li>
<li>Bos, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+that+mediate+breast+cancer+metastasis+to+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genes that mediate breast cancer metastasis to the brain.</a> Nature. 459, 1005-1009 (2009).</li>
</ol>

Wir haben nichts zu offenbaren.

Zurück histologische Untersuchungen der zerebralen Metastasierung zeigten schnelle und drastische Veränderungen der ansässigen Gliazellen, vor allem von Astrozyten und Mikroglia 13. Um diese Veränderungen und Wechselwirkungen mit den Karzinomzellen zu studieren, ist diese neue Co-Kultur-System gut geeignet. Weitere Forschungsfelder haben bereits langjährige Erfahrung mit organotypischen hippokampalen Hirnschnitten. Ein Vorteil ist, dass die organotypischen hippocampalen Hirnschnittkulturen sind lebensfähig und effektiv Wochen für Tag erhalten, so dass es für Langzeitexperimente geeignet. Da Stoppini Die Einführung der organotypischen hippocampalen Schnitt-System 1991 ist es weit verbreitet, beispielsweise in der Forschung von degenerativen Erkrankungen. Somit stellt diese innovativen Co-Kultur-System eine Modifikation einer etablierten Ansatz mit einer Reihe von Anwendungen in der Tumorbiologie 9,11. Die Modifikation bot uns ein reproduzierbares Modell, um den Grad der Tumorinvasion af bewertenterwards und Kulturen durch das Interface-Verfahren gewachsen sind ideal für Experimente, die eine dreidimensionale Struktur erfordern. Verschiedene Techniken sind verwendet worden, um organotypischen hippocampalen Schnitten Kokultur mit anderen Zellen. Dazu gehören ein indirektes System zwischen Makrophagen-Zellen und der organotypischen Hirnschnitt 14 und eine direkte Co-Kultur von zwei verschiedenen Scheiben aus der Region des Hippocampus 15. Gliom-Aggregate sind auch mit Hirnschnitten 16 kokultiviert worden. Diese Modelle können verwendet werden, um zelluläre und molekulare Ereignisse in den Gehirnschnitten zu analysieren, aber nicht direkt, physiologische Kontakt zwischen Tumorzellen, Mikroglia und das Hirnparenchym ermöglichen. Darüber hinaus ermöglicht dieses Verfahren die Beobachtung der Mikroglia ohne Kontamination von Knochenmark abgeleiteten peripheren Monozyten / Makrophagen. Die Verwendung von CCR2 und CX3CR1 transgenen Mausmodell ist ein kritischer Verbesserung aufgrund der Tatsache, dass es schwierig ist, den Bewohner von Mikroglia eindringenden Monozyten zu unterscheidenauf der Grundlage ihrer ähnlichen Eigenschaften 17,18,19. Obwohl intrazerebrale Injektion von Krebszellen erlaubt die Untersuchung der Tumorprogression, nicht sagen kann wesentlich, ob die umgeben Makrophagen-ähnlichen Zellen von Gehirn-residenten Mikroglia Population oder aus dem Knochenmark stammenden peripheren Monozyten / Makrophagen 17. Das Team von Kettenmann führte eine organotypischen Hirnschnittmodell, das Impfen von Gliom-Zellen in Gehirnschnitten mit einem Mikromanipulator 20 beteiligt. Allerdings unterscheiden sich primäre maligne Gliome in vieler Hinsicht von metastasierten Karzinome. Erstens sind mesenchymalen Ursprungs malignen Gliomen, nicht außerhalb des Nervensystems metastasieren, und wandern / einzufallen als Einzelzellen ohne Grenze zwischen Tumor und Hirngewebe. Im Gegensatz dazu ist infiltrative Wachstum eine typische pathologische Merkmal, und solche Karzinome in der Regel wandern / einzufallen als Kohorten. Zweitens versuchen Karzinome oft epithelialen Strukturen im Gehirn wieder aufzubauen, während Gliazellenversuchen, den Tumor aus dem Hirngewebe von einer (pseudo-) Kapsel trennen. Unter Berücksichtigung der biologischen und morphologischen Eigenschaften, malignes Gliom und Metastasierung von Karzinomen sind nicht wirklich vergleichbar. Aus diesen Gründen, modifiziert und eine Co-Kultur-System, wo wir nicht spritzen, sondern eine Co-Kultur-Karzinom-Zell Stecker neben dem Hirnschnitt entwickelten wir. Darüber hinaus beobachteten wir Mikroglia und Astrozyten Akkumulation an der Grenze des Tumors Stecker, was bedeutet, dass Mikroglia geben Sie die Tumor-Stecker und könnte leicht durch Hellfeldmikroskopie erkannt und anschließend durch konfokale Mikroskopie bestätigt werden. Die Krebszellen dringen in das Gehirn in Scheiben schneiden, die vergleichbar mit der realen Situation in vivo und einer Beobachtung von Baumert und Kollegen, die in 63% der Fälle eine Autopsie Infiltration Zone gefunden mit Hirnmetastasen 21 gemacht ist. Aufgrund der fehlenden Durchblutung, gibt es nur Makrophagen / Mikroglia in dieser Kultur. Darüber hinaus kann aufgrund der mIssing T-Zellen und daher fehlt allo-Reaktivität, menschliche Karzinomzellen könnte sogar Kokultur mit Gehirnschnitten von immunkompetenten Mäusen oder Ratten (NMRI, B6 oder Wistar) verwendet werden. Dies könnte als Alternative zum Nacktmausmodell zu dienen. Da vier vor fünf Scheiben kann von jeder Maus erhalten werden, deutlich reduziert die Anzahl der Tiere erforderlich ist, im Vergleich zu den bestehenden Pritzer. Hinzu kommt, dass die Tiere über einen längeren Zeitraum von Metastasen zu leiden und sie nicht operativen Verfahren 22 wiederholt durchlaufen. Mit dieser Cokultur-System haben wir die Aktivierung der Mikroglia durch Krebszellen und die Fähigkeit zur Förderung der Invasion von Krebszellen nachgewiesen. Außerdem ist dies das erste Mal, nach unserer Kenntnis wurden Mikroglia gefunden, sich aktiv zu transportieren Karzinomzellen 23. Trotz all dieser Vorteile weist das Kokultursystem zwar auch Einschränkungen. Es ist noch ein in vitroModell fehlt die Schritte der Metastasierung vor der Kolonisation. Wegen der fehlenden Perfusion, ist es nicht möglich, die Extravasation studieren. Somit ist die alternative Möglichkeit, um die Extravasation zu studieren, um entweder die in vivo-Injektion-Modell oder die modifizierten Boyden-Kammer-System mit der extrazellulären Matrix, HUVEC und Astrozyten, um die Blut-Hirn-Schranke 22,24 imitieren. Die Hirnschnitt Kokultur Verfahren ist noch ein zuverlässiges und reproduzierbares Modell mit vielen Vorteilen und ein Potential für eine breite Vielfalt von Anwendungen, wie beispielsweise Analyse der Besiedlung, insbesondere mit einem Fokus auf der Rolle der residenten Zellen. Die Kombination mit anderen etablierten Techniken (wie Immunhistochemie, konfokaler Mikroskopie und Zeitraffer-Mikroskopie) unterstützt die Untersuchung der direkten Zell-Zell-Interaktionen. Es ist eine einfache Alternative und Ergänzung anderer Techniken und bietet Zugang zu der Untersuchung der Signale und Effekte, wie von der Mikroumgebung metastasierendem auferlegt.

<table><tbody><tr><td>Hank&#039; s balanced salt solution (HBSS)</td><td>Gibco, Darmstadt,Deutschland</td><td>24020</td><td></td></tr><tr><td>Minimum essential medium (MEM)</td><td>Gibco, Darmstadt , Deutschland</td><td>32360</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640</td><td>PAA Laboratories Inc., C&ouml; lbe, Deutschland</td><td>E15-840</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&#039; s phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)</td><td>Pan Biotech, Aidenbach, Deutschland</td><td>P04-36500</td><td></td></tr><tr><td>Normales Pferdeserum (NHS)</td><td>Invitrogen, Karlsruhe, Deutschland</td><td>16050-122</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Kälberserum (FCS)</td><td>Invitrogen, Karlsruhe, Deutschland</td><td>10091148</td><td></td></tr><tr><td>Glukose</td><td>B. Braum, Melsungen, Deutschland</td><td></td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin-Penicillin-Streptomycin-Lösung</td><td>Sigma, Steinheim, Deutschland</td><td>G1146</td><td></td></tr><tr><td>Vibratome</td><td>Leica, Wetzlar, Deutschland</td><td>Leica VT1200S</td><td></td></tr><tr><td>Mikrotom</td><td>Leica, Wetzlar, Deutschland</td><td>Leica SM 2000R</td><td></td></tr><tr><td>Polycarbonat-Membran</td><td>BD Falcon, Heidelberg, Deutschland</td><td>353090</td><td>Transwell-Membraneinsatz (0,4 &mu; m Porengröße)</td></tr><tr><td>ECM Gel</td><td>Trevigen, R& D, Wiesbaden-Nordenstadt, Deutschland</td><td>3432-005-01</td><td>Basalmembranextrakt</td></tr><tr><td>Metallischer Abstandhalter</td><td>Kig GmbG, Kirkel, Deutschland</td><td>DIN 433</td><td></td></tr><tr><td>Konfokalmikroskop</td><td>Zeiss, G&ouml; ttingen, Deutschland</td><td>LSM 510</td><td></td></tr><tr><td>Zeitraffermikroskop und Kamera</td><td>Leica, Wetzlar, Deutschland</td><td>DMI 6000B Mikroskop und eine DFC 350 FX CCD-Kamera</td><td></td></tr><tr><td>Anatomiemikroskop</td><td>Zeiss, G&ouml; ttingen, Deutschland</td><td>Stemi SV11</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd</td><td>Merck, Darmstadt, Deutschland</td><td>1.04005.1000</td><td></td></tr><tr><td>Maus monoklonaler Anti-Gliafibrilläres saures Protein (GFAP) Antikörper</td><td>Sigma, Steinheim, Deutschland</td><td>G3893</td><td></td></tr><tr><td>Ziege Anti-Maus IgG, F(ab&#039;)2- TRITC</td><td>Santa Cruz, Heidelberg, Deutschland</td><td>SC3796</td><td></td></tr><tr><td>Isolektin GS-IB4 aus Griffonia simplicifolia, Alexa Fluor 647 Konjugat</td><td>Invitrogen, Karlsruhe, Deutschland</td><td>132450</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4&#039;,6&#039;-diamidino-2-phenylindoldihyfrochlorid)</td><td>Sigma, Steinheim, Deutschland</td><td>D8417</td><td></td></tr><tr><td>Fluoreszierendes Einbettmedium</td><td>DAKO, Glostrup, Dänemark</td><td>Nr. S3023</td><td></td></tr></tbody></table>

co-kultur-system mit einer scheibe organotypische gehirn-und 3d-sphäroid von karzinomzellen

Coculture System with an Organotypic Brain Slice and 3D Spheroid of Carcinoma Cells

Patienten mit zerebralen Metastasierung von Karzinomen haben eine schlechte Prognose. Allerdings hat das Verfahren bei der metastatischen Website kaum untersucht worden, insbesondere die Rolle der Wohn (Stroma-Zellen). Studien in der Primärkarzinome zeigen den Einfluss der Mikroumgebung auf Metastasen, auch auf die Prognose 1,2. Vor allem die Tumor-assoziierten Makrophagen (TAM) Unterstützung Migration, Invasion und Proliferation 3. Interessanterweise sind die Hauptzielstellen von Metastasen besitzen gewebespezifischen Makrophagen, wie Kupffer-Zellen der Leber oder Mikroglia im ZNS. Darüber hinaus sind die Metastasen besitzen auch andere gewebespezifischen Zellen, wie Astrozyten. Kürzlich wurden Astrozyten gezeigt, um die Proliferation und Persistenz von Krebszellen 4,5 fördern. Daher Funktionen dieser Gewebe-spezifischen Zelltypen scheinen sehr wichtig im Prozess der Hirnmetastasen 6,7 sein. Trotz dieser Beobachtungenaber bis jetzt gibt es keine geeigneten in vivo / in vitro-Modell zur Verfügung, um Glia-Reaktionen während der Hirnmetastasenbildung, insbesondere durch Hellfeldmikroskopie direkt sichtbar zu machen. Aktuelle Live-Bildgebung in vivo von Karzinomzellen zeigten ihre Hirn Kolonisation Verhalten 8. Jedoch ist dieses Verfahren sehr aufwendig, kostenintensiv und technisch komplex. Darüber hinaus sind diese Arten von Tierversuchen auf den Kleinserien beschränkt und kommen mit einem erheblichen Stress für die Tiere (durch Implantation der Glasplatte, Injektion von Tumorzellen, sich wiederholende Anästhesie-und langfristige Fixierung). Weiterhin wird in vivo Bildgebung bislang auf die Visualisierung der Karzinomzellen beschränkt, während Wechselwirkungen mit residenten Zellen noch nicht dargestellt worden. Schließlich sind Untersuchungen der menschlichen Karzinomzellen in immunkompetenten Tieren unmöglich 8. Aus diesen Gründen haben wir ein Co-Kultur-System consiStachel eines organotypischen Hirnschnitt Maus und epithelialen Zellen in Matrigel (3D-Zell Kugel) eingebettet. Die 3D-Karzinomzellkugeln wurden direkt neben der Hirnschnittkante, um die Invasion des benachbarten Hirngewebe zu untersuchen platziert. Dies ermöglicht es uns, morphologische Veränderungen und Wechselwirkungen zwischen den Gliazellen und Karzinomzellen durch Fluoreszenz und sogar von hellen Feldmikroskopie sichtbar zu machen. Nach der Co-Experiment kann das Hirngewebe oder die 3D-Zellkügelchen gesammelt und für die weitere molekulare Analysen (z. B. qRT-PCR, IHC oder Immunoblot) sowie für Untersuchungen durch konfokale Mikroskopie verwendet werden. Dieses Verfahren kann angewendet werden, um die Ereignisse in einem lebenden Gehirn Gewebe Tagen ohne schädliche Wirkungen auf die Hirnschnitten überwachen. Das Modell ermöglicht auch selektive Unterdrückung und Ersatz von residenten Zellen von Zellen aus einem Spendergewebe, um die unterschiedlichen Auswirkungen einer bestimmten Genotyp zu bestimmen. Schließlich ist die Co-Kultur-Modell eine praktikable AlternativeIn-vivo-Ansätze bei der Prüfung gezielte pharmakologische Manipulationen.

Erstens, alle verwendeten Karzinomzellen (human: MCF-7-und Maus: 410,4) drangen in die Maus organotypischen Hirnschnitt. Die Invasion war daher artenunabhängig (1A), die eine breite Palette von Anwendungen in einer Art unabhängig angibt. Zusätzlich Mikroglia und Astrozyten an der Grenzfläche angesammelt, wie zuvor in vivo und in Patientenproben 13 beschrieben. Zeitraffer-Bildgebung über einen längeren Zeitraum nicht nur ergeben, die Lebensfähigkeit der Scheibe, sondern bot auch eine gute Plattform, um die zellulären Wechselwirkungen zu beobachten. Mit Zeitraffer-Experimente wurden die Mikroglia-Zellen aufgenommen, um die 3D-Zellbereich eingeben, während wiederum fallen Krebszellen auch die Hirnschnitt (Abb. 1B1-B2). Darüber hinaus haben wir bereits die Fähigkeit der Mikrogliazellen auf Karzinomzellen transportieren von einem immer noch rätselhaften Mechanismus, um dadurch im Karzinom Invasion zu unterstützen gezeigt haben. Mit Immunfluoreszenzmarkierungstechniken, die wirbeschriebenen Co-Lokalisation von Tumorzellen und Stromazellen (zB Mikroglia und Astrozyten), die beide in dem Hirngewebe und in die Tumorzelle Stecker (Fig. 1C-D), was auf eine enge Wechselwirkung zwischen den Zellen während der Invasionsprozess. Vergleichbare Ergebnisse wurden erzielt, wenn Maus Hirnschnitten wurden entweder mit menschlichen (Abbildungen 1C1-C3) oder Maus (Abbildungen 1D1-D3)-Karzinom-Zellen kokultiviert - zeigt die breite Palette von Anwendungen für das Studium Zellen von verschiedenen Arten, Genotypen und Sorten. <img alt="Figur 1" src="/files/ftp_upload/50881/50881fig1.jpg" fo:content-width="4.75in" fo:src="/files/ftp_upload/50881/50881fig1highres.jpg" /> Fig. 1 ist. Hirnschnitt Kokultur-Modell mit einem 3D-Sphäroid von Maus und Mensch Karzinomzellen. A) Quantifizierung der Invasion von Krebszellen in organotypischen Hirnschnitt ganze Kokulturen mit einer Maus BrustkrebsZelllinie 410,4 oder eine menschliche Brustkrebs-Zelllinie MCF-7. Die Daten stellen den Prozentsatz der Grad der Zellinvasion in Hirnschnitten in jeder Gruppe mit n ≥ 38. Es gab keinen signifikanten Unterschied zwischen den beiden Gruppen (Kruskal-Wallis-Test). B) Zeitraffer-Bilder der organotypischen Hirnschnitt ganze Kokulturen mit MCF-7-GFP-Zellen und repräsentative Bilder von Tag 2 (B1) und Tag 5 (B2) waren gezeigt. CD) konfokale Mikroskopie-Bilder zeigten Kohorten von Karzinomen, Astrozyten und Mikroglia. Doppelfärbung von Astrozyten (anti-GFAP-TRITC, rot) und Mikroglia (ILB4-Alexa Fluor 647, violett) des gesamten Co-Kultur mit der 350 um dicken organotypischen Hirnschnitt und dem GFP-transfizierten Tumorzell Stecker (grün): 3D- MCF-7-GFP-(C1-C3) und 3D-410.4-GFP (D1-D3). Weiße Striche zeigte den Rand des Hirnschnitt und dem Tumorinvasionsfront. Maßstabsbalken repräsentieren 50 um. Mikroglia, Astrozyten einnd Tumoren Kolokalisationen (C1 und D1), Astrozyten-Tumoren Kolokalisationen (C2 und D2) und Mikroglia-Tumor-Kolokalisationen (C3 und D3) in der Scheibe Co-Kultur. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50881/50881fig1highres.jpg" target="_blank">Klicken Sie hier für eine größere Ansicht</a>

Die organotypischen Hirnschnitt Co-Kultur mit Karzinomzellen ermöglicht die Visualisierung morphologische Veränderungen durch Fluoreszenz sowie Hellfeld-(Video)-Mikroskopie während des Prozesses der Karzinomzellinvasion von Hirngewebe. Dieses Modellsystem ermöglicht auch für die Zellaustausch und die Wiederauffüllung Ansätze und bietet eine Vielzahl von Manipulationen und Analysen.

Co-Kultur-System mit einer Scheibe Organotypische Gehirn-und 3D-Sphäroid von Karzinomzellen

Patients with cerebral metastasis of carcinomas have a poor prognosis. However, the process at the metastatic site has barely been investigated, in ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, gliale Wechselwirkungen direkt während der Bildung von Hirnmetastasen sichtbar zu machen. Dazu werden zunächst organotypische Hirnschnitte von Mäusen präpariert. Anschließend werden die organotypischen Hirnschnitte mit Karzinomzellen co-kultiviert.Dann werden Stromazellen mit spezifischen Markern fluoreszenzgefärbt. Schließlich wird das Ausmaß der Tumorinvasion mit einem Fluoreszenzmikroskop bewertet. Letztendlich können Ergebnisse erzielt werden, die die Interaktion und Kolokalisation von Glia-Krebszellen durch Immunfluoreszenzmarkierung und Zeitraffer- oder konfokale Mikroskopie zeigen.Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber bestehenden Methoden wie der intrazerebralen Injektion von Karzinomzellen besteht darin, dass diese Methode eine einfache Alternative darstellt und eine gute Plattform bietet, um zelluläre Wechselwirkungen während der Tumorprogression zu beobachten. Die Implikationen dieser Technik sind 10 für die Entdeckung eines neuen und selektiven Therapien für die Krebsbehandlung. Da die Traumazellen eine wichtige Rolle bei der Metastasierung spielen und auch potenzielle Ziele für die Krebstherapie sind, wird Eugenia die Technik demonstrieren, die einem Postdoc meines Labors überreicht. Vor dem chirurgischen Eingriff bereiten Sie das Dissektionsmedium vor, das aus einem minimalen essentiellen Medium besteht, das mit 0,2 Millimolar Glutamin, 100 Milligramm pro Milliliter Streptomycin und 4,5 Milligramm pro Milliliter Glukose ergänzt wird, nachdem Sie Mäuse zwischen dem sechsten Tag nach der Geburt und dem sechsten Tag von einem beliebigen Mausstamm geköpft haben. Acht.Entfernen Sie unter aseptischen Bedingungen schnell das Gehirn aus dem Schädel und übertragen Sie es in das Präpariermedium. Entfernen Sie den Frontalpol und das Kleinhirn aus dem Gehirn. Verwenden Sie dann Kryokleber und 5%agros, um das verbleibende Hirngewebe, bestehend aus dem Großhirn, zu fixieren und zu stabilisieren.Auf einem Tisch mit einer horizontalen Vibram-Scheibe werden in 350 Mikrometer dicken Schnitten, je nach Art und Alter der Maus, vier bis sechs ganze Gehirnschnitte von einem einzigen Gehirn gesammelt. Nach der Vorbereitung des Nährmediums gemäß dem Textprotokoll wird jeweils ein Milliliter in die untere Vertiefung einer Trans-Well-Platte mit sechs Vertiefungen gegeben. Legen Sie dann jede organotypische Gehirnscheibe auf eine 0,4-Mikron-Transwell-Membran aus Polycarbonat und setzen Sie sie in die Vertiefungen der Platte ein.Inkubieren Sie die Scheiben über Nacht in einer befeuchteten Atmosphäre mit 5 % Kohlendioxid und 37 Grad Celsius. Am nächsten Tag betten Sie 10 bis fünfte GFP-transfizierte Tumor- oder andere Zellen in 20 Mikroliter Gelmatrix ein, die aus 15% RPMI-Medium und 85% ECM-Gel besteht. Geben Sie die MCF-Sieben-Gel-Matrix-Mischung in sterile metallische Abstandshalter direkt neben den kortikalen Regionen der organotypischen Hirnschnitte und inkubieren Sie nach der Inkubation zwei Stunden lang, entfernen Sie die Abstandshalter und lassen Sie den 3D-Tumor PHE 24 bis 96 Stunden lang mit den Hirnschnitten inkubieren.Tauschen Sie das Nährmedium bei Bedarf alle zwei Tage aus. Führen Sie Live-Bildgebung mittels Zeitraffermikroskopie mit 10-facher Vergrößerung durch, um die Co-Kulturen der Gehirnscheibe zu färben. Fixieren Sie sie acht Stunden lang bei vier Grad Celsius mit 4 %-Paraformaldehyd, bevor Sie die Proben fünf Minuten lang in PBST waschen.Um die Proben zu blockieren, verwenden Sie dann normales Ziegenserum in PBST bei Raumtemperatur für eine Stunde. Als nächstes färben Sie die Astrozyten, indem Sie die Co-Kulturen 36 Stunden lang bei vier Grad Celsius mit saurem Anti-Glia-Fibrillärprotein oder monoklonalem GFAP-Antikörper inkubieren, gefolgt von einer einstündigen Anti-Maus-Färbung mit Ziegenkrebs bei Raumtemperatur. Nachdem die Proben dreimal für jeweils fünf Minuten mit PBST gewaschen wurden, färbten Sie die Mikrogliazellen eine Stunde lang bei Raumtemperatur mit I LB vier LOR 647, bevor Sie drei Minuten lang bei Raumtemperatur mit DPI gegengefärbt wurden.Nachdem Sie die Co-Kultur-Proben mit einem fluoreszierenden Eindeckmedium eingefasst haben, werden die Proben mit einem Fluoreszenzmikroskop mit 25-facher Vergrößerung abgebildet. Bewerten Sie schließlich den Grad der Tumorinvasion anhand des folgenden Bewertungssystems. Dabei wird zunächst die Länge des Kontaktabschnitts zwischen Tumorpfropfen und -scheibe gemessen, dann der Anteil des Kontakts, der von den eindringenden Zellen wahrgenommen werden kann.Wie hier gezeigt, drangen alle getesteten Karzinomzelllinien in organotypische Hirnschnitte von Mäusen ein, was darauf hindeutet, dass der Invasionsprozess artunabhängig war. Dieser Film zeigt eine Zeitrafferaufnahme von direkten Interaktionen zwischen Gliatumorzellen. Es wurde beobachtet, dass Stromazellen in den Tumor eindringen, der den Zellpfropfen enthält, und mit den Krebszellen interagieren.Die Zeitraffer-Bildgebung über einen längeren Zeitraum bestätigte die Lebensfähigkeit der Hirnschnitte und ermöglichte die Visualisierung von Mikrogliazellen, die in die dreidimensionale Kugel eintreten, sowie von Krebszellen, die in die Hirnschnitte eindringen. Darüber hinaus transportieren Mikroglia, wie wir bereits gezeigt haben, Karzinomzellen durch einen noch rätselhaften Mechanismus und unterstützen die Karzinominvasion durch Immunfluoreszenzmarkierung. Wir konnten die Kolokalisation von Tumor- und Stromazellen sowohl im Hirngewebe als auch in Tumorzellpfropfen nachweisen, was auf eine enge Interaktion zwischen diesen Zellen während des Invasionsprozesses hindeutet.Wie hier zu sehen ist, wurden vergleichbare Ergebnisse erzielt, wenn Gehirnschnitte von Mäusen entweder mit menschlichen oder Urinkarzinomzellen kokultiviert wurden, was das breite Anwendungsspektrum für die Untersuchung von Zellen verschiedener Spezies, Genotypen und Stämme unterstützt. Diese Technik ebnete den Weg für Forscher auf dem Gebiet der Krebsmetastasen, um den Einfluss der Mikroumgebung während der Tumorbesiedlung an entfernten Stellen zu untersuchen. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie GL-Krebszellreaktionen während der Bildung von Zell-Hirn-Metastasen in einem direkten physiologisch Kontaktsystem visualisieren können.

coculture-system-with-an-organotypic-brain-slice-3d-spheroid

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Dieses Video zeigt die Entwicklung eines 3D-Co-Kultursystems. Hirnschnitte von Mäusen werden auf eine Membran gelegt, auf der fluoreszenzmarkierte menschliche Hirntumorzellen wachsen können. Sobald das System fertig ist, wird es für die Bildgebung gefärbt.

Etablierung eines Hirntumors in einem organotypischen Scheiben-Co-Kulturmodell

Das Video zeigt die Erzeugung und Pflege von organotypischen Schnittkulturen aus Glioblastomgewebe. Das isolierte Gewebe wird in eine Agarose-Matrix eingebettet und mit Hilfe eines Vibratoms werden Dünnschliffe erhalten. Diese Abschnitte werden dann auf permeable Membraneinsätze innerhalb einer Mikroplatte gelegt und zur Langzeitpflege in einem Scheibenkultur-Erhaltungsmedium kultiviert.

Erzeugung und Pflege von Schnittkulturen aus humanem Glioblastomgewebe

Dieses Video beschreibt die Herstellung und Kultivierung von Hirntumor-Organoiden aus Einzelzellsuspension. Durch die Verwendung einer lamininreichen extrazellulären Matrix als Gerüst und Nährmedium für Nährstoffe werden die Zellen in die Lage versetzt, sich innerhalb des Organoids zu vermehren und selbst zu organisieren. Folglich werden ex vivo Organoide erzeugt, die die zelluläre Vielfalt und die Mikroumgebung von Hirntumoren nachahmen.

Erzeugung einer Organoidkultur aus einer Suspension von Hirntumorzellen

Die Invasion des umgebenden normalen Gewebes ist ein definierendes Merkmal von bösartigen Tumoren. Wir stellen hier einen einfachen, halbautomatischen Mikroplatten-Assay der Invasion in eine natürliche 3D-Biomatrix zur Verfügung, der mit einer Reihe von Modellen fortgeschrittener menschlicher Krebsarten veranschaulicht wurde.

Dreidimensionale (3D) Tumor Spheroid Invasionsassay

Viele Arten von menschlichen Hirntumoren sind auf bestimmte Regionen innerhalb des Gehirns beschränkt und in Kultur schwer zu züchten. Dieses Protokoll befasst sich mit der Rolle der Tumormikroumgebung und untersucht neue medikamentöse Behandlungen durch die Analyse fluoreszierender primärer Hirntumorzellen, die in einem organotypischen Maushirnschnitt wachsen.

Ein Hirntumor / Organotypischen Co-Kultursystem für die Untersuchung Tumor-Microenvironment und gezielte Arzneimitteltherapie

Aktuelle Ex-vivo- Modelle von Glioblastom (GBM) sind nicht für eine physiologisch relevante Untersuchung der menschlichen Tumorinvasion optimiert. Hier stellen wir ein Protokoll zur Erzeugung und Pflege von organotypischen Scheibenkulturen aus frischem menschlichem GBM-Gewebe vor. Es wird eine Beschreibung der Zeitraffer-Mikroskopie und der quantitativen Zellmigrationsanalyse-Techniken gegeben.

Ein menschliches Glioblastom Organotypisches Scheibenkulturmodell zur Untersuchung der Tumorzellmigration und patientenspezifischen Wirkungen von antiinvasiven Arzneimitteln

Organotypischen hippocampal Slice Kulturen (OHSC) sind eine in-vitro- Modell, die die in-Vivo -Situation sehr gut simuliert. Hier beschreiben wir eine Vibratome-basierte verbessert schneiden-Protokoll, um qualitativ hochwertige Scheiben für den Einsatz bei der Beurteilung der neuroprotektive Potenzial der neuartigen Substanzen oder das biologische Verhalten der Tumorzellen zu erhalten.

Organotypischen Hippocampal Slice Kulturen als Modell zur Studie Neuroprotektion und Invasivität der Tumorzellen

Hier beschreiben wir einen einfach zu bedienenden Invasionstest für Glioblastom. Dieser Test eignet sich für glioblastom-Stammzellen. Ein Fidschi-Makro zur einfachen Quantifizierung von Invasion, Migration und Proliferation wird ebenfalls beschrieben.

Ein 3D Spheroid Modell für Glioblastom

Es fehlen umfassende In-vitro-Modelle , die die relevante menschliche Krankheit getreu rekapitulieren. Die aktuelle Studie präsentiert die dreidimensionale (3D) Tumorsphäroidbildung und -kultur, ein zuverlässiges In-vitro-Werkzeug zur Untersuchung der Tumor-Stroma-Interaktion beim menschlichen hepatozellulären Karzinom.

Ein dreidimensionales Sphäroidmodell zur Untersuchung der Tumor-Stroma-Wechselwirkung bei hepatozellulären Karzinomen

Kükenembryonen werden zur Untersuchung von humanen Glioblastom-Hirntumoren (GBM) in ovo - und in ex vivo-Hirnschnitt-Kokulturen verwendet. Das Verhalten von GBM-Zellen kann durch Zeitraffermikroskopie in ex vivo Kokulturen aufgezeichnet werden, und beide Präparate können am experimentellen Endpunkt durch detaillierte konfokale 3D-Analyse analysiert werden.

Verwendung des Gehirns von Kükenembryonen als Modell für in vivo und ex vivo Analysen des Verhaltens menschlicher Glioblastomzellen

Es besteht ein dringender Bedarf an 3D-Krebsmodellen, die heterozelluläre Wechselwirkungen erfassen, um Krebsmetastasen zu untersuchen. Unsere Studie stellt die Erzeugung von heteromultizellulären Stroma-Epithel-Epithelen in einer gerüstfreien und gerüstfreien Umgebung vor, die zur Untersuchung der Invasion und der zellulären räumlichen Verteilungen verwendet werden kann.

Heteromultizelluläre Stromazellen in gerüstfreien 3D-Kulturen von Epithelkarzinomzellen treiben die Invasion voran

Lernen Sie ein Co-Kultur-System mit organotypischen Hirnschnitten und Karzinomzellen zur Visualisierung glialer Interaktionen während der Metastasenbildung. Diese Methode ermöglicht Echtzeitbeobachtungen für Krebsforschung.

Co-Kultur-System mit einer Scheibe Organotypische Gehirn-und 3D-Sphäroid von Karzinomzellen

Weitere Videos entdecken