Name: DNBS / TNBS Colitis-Modelle: Einblicke in chronisch entzündlichen Darmerkrankungen und Effekte von Nahrungsfett (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-27T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: Erfahren Sie die DNBS-Methode zur Induktion von Kolitis bei Mäusen und Ratten für chronisch entzündliche Darmerkrankungen. Diese kostengünstige Technik ermöglicht histologische Analysen und Untersuchungen zu Darmverletzungen.

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Diese Arbeit wurde durch Betriebskostenzuschüsse zur KJ aus den Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada (NSERC) und der Morbus Crohn und Colitis Foundation of Canada (CCFC) unterstützt. VM wird von einem CFRI Fellowship und GB ein Absolvent Stipendium von der kanadischen Institutes für Gesundheitsforschung (CIHR) unterstützt. BAV ist ein Kinder mit Darm-und Leber-Erkrankungen Foundation (KIND) Lehrstuhl für Pädiatrische IBD Forschung und dem Canada Research Chair in Pädiatrische Gastroenterologie und KJ ist Senior Scientist Kliniker von Kind und die Kinder-und Familienforschungsinstitut (CFRI) Arzt-Wissenschaftler Award-Programm unterstützt , University of British Columbia.

Verfahren, die Tier Themen folgen Tierpflege Richtlinien der Institutional Animal Care und Verwenden Committee (IACUC) an der Universität von British Columbia skizziert. In diesem Protokoll genannten Verfahren wird sowohl für Ratten und Mäuse beschrieben werden, während die repräsentative Ergebnisse von Sprague-Dawley-Ratten dargestellt. 1. Vorbereitung der DNBS und Intrarectale Verwaltung <ol><li> Für die rektale Applikation von DNBS bei Ratten, frisch vorbereiten 15-30 mg DNBS/250 ul 50% Ethanol. Bei Mäusen, bereiten 2-6 mg DNBS/100 ul 50% Ethanol. Hinweis: Optimieren Sie die genaue DNBS Konzentration bei jeder Anlage verabreicht werden. Männliche Sprague-Dawley-Ratten und C57BL / 6 Mäuse sind für die Induktion von Kolitis DNBS bevorzugt, jedoch können auch andere Maus-und Rattenstämme verwendet werden. Mäuse und Ratten nur mit 50% Ethanol behandelt kann als Kontrollgruppen jedoch die Auswirkungen von Ethanol sind mild oder nicht vorhanden, kann man omi werdent die Einbeziehung dieser Gruppe für eine Studie 12. </li><li> Bringen Sie eine 1 ml Spritze zu einer 19 G-Nadel, die eine Polyethylen-Katheter (PE-90 - Ratten oder PE-50 - Mäuse), bis zu seinem Ende befestigt. </li><li> Leicht zu betäuben die Ratte oder Maus ruht auf einem Heizkissen (zB durch die Verabreichung von 1,5% Isofluran via Nasenkegel sollten die Tiere immer noch blinken und Schluckreflexe und zeigen regelmäßige Atmung). Bewerben Tränen Gel auf die Augen, die Augen zu vermeiden Austrocknen. </li><li> Druck mit den Fingerspitzen leicht anzuwenden, um das hintere Ende des Tieres zu jeder Hocker, der im distalen Kolon vorhanden sein können, zu entfernen. </li><li> Schieben Sie den Katheter intrarektal, mit dem Katheter erreicht ca. 8 cm proximal des Anus für Ratten oder 3-4 cm für Mäuse. Spritzen Sie eine kleine Menge der Lösung, während Einführen des Katheters zu schmieren, die einen leichteren Einführen. Hinweis: Wenn ein Widerstand beim Einführen des Katheters fühlte, nicht weiterhin legen, da dies zu Perforation derdie Darmwand. Entfernen Sie den Katheter und versuchen, vorsichtig wieder einsetzen, wieder Schmieren der Doppelpunkt als Sie fortfahren. </li><li> Langsam injizieren 250 (Ratten) bzw. 100 (Mäuse) ul DNBS oder ein gleiches Volumen oder 50% Ethanol für die Kontrollen. Nach dem Einspritzen der DNBS, positionieren Sie den Tierkopf-down für 90 Sekunden, um den Verlust des DNBS vermeiden. </li><li> Nach DNBS Verwaltung, die Tiere füttern 8% Saccharose-Wasser in 0,2% Kochsalzlösung, um eine Dehydratation in der ersten Woche zu verhindern. </li><li> Beachten Sie sorgfältig die Tiere mit täglichen Überwachung zur Gewichtsreduktion und Anzeichen von Austrocknung oder Leiden für die Dauer des Experiments. Hinweis: Gewichtsverlust können schnell nähern sich den Empfehlungen der CCAC maximal zulässige Gewichtsverlust. Da dies meist aus Dehydrierung stammt, Gewichtsverlust sollte als Indikator für die Verwaltung von Ringer-Laktat-Lösung, um eine Dehydratation zu begrenzen, verwendet werden. Bitte achten Sie darauf, mit der Möglichkeit zu Fragen der Gesundheit Tierarzt gegebenenfalls zu beraten. </li></ol> 2. Collecting Gewebe und histologische Beurteilung der Schäden in DNBS Herausgefordert Mäuse <ol><li> Bei der gewünschten Zeitpunkt nach der Herausforderung mit DNBS, einschläfern Tiere durch eine Überdosierung mit Isofluran in einem Narkosekammer ausreichend mit Sauerstoff ergänzt. Beobachten Sie das Tier, bis kein Steigen oder Fallen der Brust ist zu sehen, und es gibt keine spürbare Herzschlag. Zu bestätigen, das Tier wurde vollständig durch das Fehlen einer Reaktion auf Zehenklemm oder Berühren der Hornhaut und anschließend durch Genickbruch getötet. </li><li> Öffnen Sie die Bauchhöhle und entfernen Sie den gesamten Dickdarm. Öffnen des Darms Längs; makroskopischen Schleimhautgeschwüren sollte etwa 5-6 cm proximal von dem distalen Ende des Dickdarms von Ratten (2-3 cm in Mäusen) beobachtet werden. Hinweis: Nach dem Entfernen des Dickdarms, bewerten makroskopischen Schäden Partituren, falls gewünscht. Sammeln Segmente von Dick aus entsprechenden anatomischen Lage von Kontrolltieren. Hinweis: Die Punktwertung der einzelnen Gewebe für makroskopische Schaden Partituren sollteauf die Identität der Behandlungsgruppen geblendet werden. Ergebnis Gewebeschnitte mit folgenden oder ähnlichen Kriterien: Schwere und Umfang der Geschwürbildung (0-10) mit Noten für Abwesenheit oder Anwesenheit von Durchfall (0 oder 1), Verwachsungen (0, 1, oder 2) und maximale Darmwandstärke summiert in Millimetern 11. </li><li> Sammeln 0,5 cm Abschnitte proximal zu dem Ort der maximalen makroskopischen Schäden. Schnellfrost ein 0,5 cm Abschnitt in flüssigem Stickstoff zu einem späteren Zeitpunkt zu beurteilen Myeloperoxidase (MPO)-Aktivität (ein Maß für die neutrophile Infiltration) und legen den anderen Abschnitt in 10% neutral gepuffertem Formalin für die histologische Analyse. Hinweis: schockgefroren Gewebe für Myeloperoxidase-Assay bei -80 ° C für bis zu 1 Monat gelagert werden. </li><li> Lassen Sie die für die histologische Analyse in Schritt 2.3 entnommenen Gewebe in Formalin über Nacht beheben, und dann waschen mit 70% Ethanol. Gewebe in Paraffin einbetten und auf die gewünschte Dicke (3-5 um), Fleck mit Hemotoxylin und Eosin (HE) für die histologische Scoring geschnitten. </li&gt; <li> Haben zwei Beobachter Gäste mindestens drei Gewebeschnitte von jedem Tier unter einem Lichtmikroskop auf die histologischen Schäden Partituren für jede Gruppe bestimmen. Hinweis: Die Punktwertung der einzelnen Gewebe zur histologischen Schäden Partituren sollte auf die Identität der Behandlungsgruppen geblendet werden. Ergebnis Gewebeschnitte mit folgenden oder ähnlichen Kriterien: Umfang der Entzündungszellen infiltrieren (0 = nicht vorhanden, 3 = transmurale), Verlust der Schleimhaut-Architektur (0 = nicht vorhanden, 3 = schwer), der Anwesenheit oder Abwesenheit von Kryptenabszesse (0-1) und Becherzellverlust (0-3). Bestimmen Sie histologischen Schäden Punktzahl als die Summe dieser Werte 11. </li></ol> 3. Darstellende Myeloperoxidase (MPO)-Assay auf DNBS Herausgefordert Darmgewebe <ol><li> Assay MPO-Aktivität in den in Schritt 2.3 erhaltenen 0,5 cm Colonsegmente. Homogenisieren Gewebe MPO Homogenisierungspuffer (0,5% Hexadecyltrimethylammoniumbromid-ammonium-bromid in 50 mM Kaliumphosphatpuffer (pH 6,0)), um 50 mg Kolon segme gebennt / ml Homogenisationspuffer Federung. </li><li> Aliquot der homogenisierten Lösung in Portionen von 1 ml und zentrifugiert bei 4 ° C für 2 min bei 10.000 x g. </li><li> Mischungs 100 ul jedes Aliquot mit 2,9 ml 50 mM Phosphatpuffer (pH 6,0), enthaltend 0,167 mg / ml o-dianisidinedihydrochloride und 0,0005% Wasserstoffperoxid in einer Küvette. </li><li> Messung der Geschwindigkeit der Absorption unter Verwendung eines Spektrophotometers bei 460 nm auf. Hinweis: MPO-Aktivität wird als die Menge an Enzym abbau 1 &amp;mgr; mol / min H 2 O 2 zu H 2 O bei Raumtemperatur festgelegt und wird in Einheiten pro mg Gewebe ausgedrückt. </li></ol>

<ol><li>Perše, M., Cerar, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPer%C5%A1e%2C+M+%22Dextran+sodium+sulphate+colitis+mouse+model%3A+traps+and+tricks%22">Dextran sodium sulphate colitis mouse model: traps and tricks</a>. Biotechnol, J. . B. iomed , (2012).</li>
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<li>Cuzzocrea, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calpain+inhibitor+I+reduces+colon+injury+caused+by+dinitrobenzene+sulphonic+acid+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Calpain inhibitor I reduces colon injury caused by dinitrobenzene sulphonic acid in the rat.</a> Gut. 48 (4), 478-488 (2001).</li>
<li>Cuzzocrea, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melatonin+reduces+dinitrobenzene+sulfonic+acid-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pineal+Res%22%5BJournal%5D)">Melatonin reduces dinitrobenzene sulfonic acid-induced colitis.</a> J. Pineal Res. 30 (1), 1-12 (2001).</li>
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<li>Innis, S. M., de La Presa Owens, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+fatty+acid+composition+in+pregnancy+alters+neurite+membrane+fatty+acids+and+dopamine+in+newborn+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nutr%22%5BJournal%5D)">Dietary fatty acid composition in pregnancy alters neurite membrane fatty acids and dopamine in newborn rat brain.</a> J. Nutr. 131 (1), 118-122 (2001).</li>
<li>Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mundra+H.%2CInnis+S.M.+Intestinal+responsiveness+to+experimental+colitis+in+young+rats+is+altered+by+maternal+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Gastrointest.+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mundra H.,Innis S.M. Intestinal responsiveness to experimental colitis in young rats is altered by maternal diet.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 289, 13-20 (2005).</li>
<li>Sanovic, S., Lamb, D. P., Blennerhassett, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Damage+to+the+enteric+nervous+system+in+experimentalcolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Damage to the enteric nervous system in experimentalcolitis.</a> Am. J. Pathol. 155 (4), 1051-107 (1999).</li>
<li>Vilaseca, J., Salas, A., Guarner, F., Rodriguez, R., Martinez, M., Malagelada, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+fish+oil+reduces+progression+of+chronic+inflammatory+lesions+in+a+rat+model+of+granulomatous+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Dietary fish oil reduces progression of chronic inflammatory lesions in a rat model of granulomatous colitis.</a> Gut. 31, 539-544 (1990).</li>
<li>N-3 fatty acid-rich diet prevents early response of interleukin-6 elevation in trinitrobenzene sulfonic acid-induced enteritis. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Int.+J.+Mol.+Med%22">Int. J. Mol. Med</a>. Andoh, A., Tsujikawa, T., Ishizuka, I., Araki, Y., Sasaki, M., Koyama, S., Fujiyama, Y. 12, 721-725 (2003).</li>
<li>Barros, K. V., Xavier, R. A., Abreu, G. G., Martinez, C. A., Ribeiro, M. L., Gambero, A., Carvalho, P. O., Nascimento, C. M., Silveira, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soybean+and+fish+oil+mixture+increases+IL-10%2C+protects+against+DNA+damage+and+decreases+colonic+inflammation+in+rats+with+dextran+sulfate+sodium+%28DSS%29+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Lipids+Health+Dis%22%5BJournal%5D)">Soybean and fish oil mixture increases IL-10, protects against DNA damage and decreases colonic inflammation in rats with dextran sulfate sodium (DSS) colitis.</a> Lipids Health Dis. 9, 68 (2010).</li>
<li>Hekmatdoost, A., Wu, X., Morampudi, V., Innis, S. M., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+oils+modify+the+host+immune+response+and+colonic+tissue+damage+following+Citrobacter+rodentium+infection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Gastrointest.+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Dietary oils modify the host immune response and colonic tissue damage following Citrobacter rodentium infection in mice.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 304 (10), 917-928 (2013).</li>
<li>Innis, S. M., Dai, C., Wu, X., Buchan, A. M., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perinatal+lipid+nutrition+alters+early+intestinal+development+and+programs+the+response+to+experimental+colitis+in+young+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Gastrointest.+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Perinatal lipid nutrition alters early intestinal development and programs the response to experimental colitis in young adult rats.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 299 (6), 1376-1385 (1152).</li>
</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessen konkurrieren.

Die in diesem Protokoll beschrieben DNBS Modell ist ein wertvolles, kostengünstig und reproduzierbar Colitis-Modell, das verwendet werden kann, um verschiedene Aspekte der IBD zu untersuchen. Wenn intrarektal an Ratten oder Mäusen verabreicht, DNBS induziert einen wesentlichen Grad der Entzündung und Gewebeverletzung im Dickdarm, Menschen Morbus Crohn ähneln in Bezug auf die verschiedenen histologischen Merkmale einschließlich transmurale Infiltration von polymorphkernigen Zellen und vorherrschende NF-kB-abhängigen Th1-...

Entzündliche Darmerkrankungen (IBD) ist durch eine chronische rezidivierende Entzündung im Magen-Darm-Trakt (GI) gekennzeichnet, was zu Symptome von Durchfall, Gewichtsverlust, und Bauchschmerzen. Colitis ulcerosa (UC) und Morbus Crohn (CD) sind die beiden Hauptformen von IBD und kann von dem Ort der Entzündung im Gastrointestinaltrakt zu unterscheiden. In UC-Patienten, die Entzündung umfasst in der Regel das Rektum und erstreckt sich lückenlos bis der Doppelpunkt für einen variablen Umfang, die nur die oberflächlichen Schleimhaut. Im Gegensatz dazu kann CD jeden Teil des GI-Trakt beeinflussen, obwohl es betrifft vor allem das Ileum und Blinddarm. CD häufig manifestiert sich als transmurale Entzündung häufig mit Granulome verbunden und führt zu Strikturen (fibrostenotischen) und / oder das Eindringen (Fistel) Krankheit. Obwohl die Ätiologie der IBD bleibt schwer zu fassen, ist es gut möglich, dass IBD ist multifaktoriell, an denen Wechselwirkungen zwischen den Hosts Immunsystems, genetische Anfälligkeit und verantwortungsses für Umwelt-und mikrobielle Faktoren. Bisher wurden verschiedene Modelle von IBD vorgeschlagen worden, die verschiedene klinische, histologische und Immunantworten Charakteristik UC und CD anzuzeigen. Die am häufigsten verwendeten Modelle sind mit genetisch veränderten Mäusen (IL-2, IL-10, SAMP / Yit), Infektionen induziert Modelle (Citrobacter rodentium, Salmonella typhimurium), Adoptivtransfermodelle (CD45 + RB High, CD62L +-Zelltransfer in SCID-Mäuse) und chemisch induzierte Colitis Modelle (Dextran-Natriumsulfat (DSS), Trinitrobenzolsulfonsäure (TNBS) und Dinitrobenzolsulfonsäurelösung (DNBS)). Aufgrund ihrer geringen Kosten und schnelles Einsetzen der Krankheit werden chemische Modelle als von unschätzbarem Wert für die Untersuchung der verschiedenen Aspekte der IBD. Jeder der chemischen ulcerosa Modelle aufgelistet hat Vorteile sowie Einschränkungen in einigen Aspekten ihrer klinischen, histologischen und immunologischen Bedeutung für IBD. DSS ist eines der eingesetzten coli zu induzieren häufigsten chemischen Methodentis bei Nagern ein. Die Verabreichung von 3-10% DSS (MW: 42 kDa) für 7-10 Tage im Trinkwasser von Mäusen können Symptome und Anzeichen einer Kolitis einschließlich Gewichtsverlust, Durchfall mit Blut, Darmverkürzung, Schleimhautgeschwüren und neutrophile Infiltration zu induzieren. Dieses Modell ist besonders nützlich für Wirkstoff-Screening-Studien, sowie die Erforschung der Mechanismen der epithelialen Regeneration, die Auswirkungen der angeborenen Immunität auf Schleimhaut-Homöostase und die Rolle von Entzündungen bei der Förderung der Darm Dysplasie und Adenokarzinom Entwicklung. Es gibt jedoch einige Nachteile, die DSS-Modell, einschließlich einer Variation der Konzentration des DSS erforderlich ulcerosa in verschiedenen Tiereinrichtungen zu induzieren, sowie inkonsistent Wasseraufnahme durch Mäuse und somit inkonsistent Einwirkung von DSS, was zu einer Variation in dem Ausmaß, Umfang und Verteilung der Schädigung der Schleimhaut und Geschwüre im Dickdarm. All diese Eigenschaften führen zu Heterogenität der Ergebnisse und die Fähigkeit, Ergebnisse in Studien fr vergleichen begrenzenom verschiedenen Forschungsgruppen. Eine Alternative zu der DSS-Modell ist die Hapten-induzierte DNBS oder TNBS Modelle ulcerosa. Dieses Modell setzt die rektale Applikation von der Schleimhaut Sensibilisierungsmitteln DNBS oder TNBS, in unterschiedlichen Konzentrationen von Ethanol verdünnt. Die Verabreichung von Ethanol ist eine Voraussetzung, um den Dickdarm Schleimhaut-Barriere zu brechen, um das Eindringen von DNBS oder TNBS in die Lamina propria zu ermöglichen. DNBS / TNBS dann haptenize die lokalisierten Kolon-und Darm mikrobielle Proteine ​​immunogen zu werden, wodurch die Gastgeber angeborenen und adaptiven Immunantworten Triggerung. In der Regel wird dieses Modell mit schweren und manchmal blutigen Durchfall, Gewichtsverlust und Darmwandverdickung jedoch Symptome variieren je nach der Art von Nagetier verwendet wird, als auch den Zeitpunkt, Dosis und der Grad der Belastung durch die DNBS oder TNBS in das verwendete verbunden Studie. Wichtige Unterschiede zwischen Ratten und Mäusen sollte angemerkt werden, mit den Vorteilen der geringeren Kosten für den Kauf und Verpflegung, sowie lower Körpermasse für abnehmende pro-Tier Kosten der Behandlung in vivo. Dies sollte gegen die schnelleren und schwereren Verlauf von Colitis bei Mäusen, denen die zerbrechlich und reaktions Tiere können schnell eine humane Endpunkt erreichen eingestellt werden. Die Darmentzündung führt zunächst aus Ethanol induzierte Schäden intestinalen Epithelzellen, was zu einer erhöhten Durchlässigkeit epithelialen, mikrobielle Eindringen in die Schleimhaut, haptenization von Wirtsproteinen, all dies was die Infiltration von Neutrophilen, Makrophagen und Th1-T-Lymphozyten in das geschädigte Schleimhaut. Im Vergleich zu DNBS wird TNBS als gefährliche Chemikalie aufgrund seiner hochoxidativen Eigenschaften, die eine Explosionsgefahr bei Kontakt mit Basen, wie Natrium-und Kaliumhydroxid darstellen kann betrachtet. Daher DNBS wird derzeit als bevorzugte Wahl von chemischen über TNBS Colitis induzieren angesehen. Bei Nagetieren ist DNBS ulcerosa als eine der günstigsten Methoden als die fol studierenFlügel IBD verbunden Modifikatoren der Krankheit: <ol><li> Depression und Reaktivierung von Colitis: Es hat sich gezeigt, dass Stress, Angst und Depression bei CED-Patienten sind häufig mit Krankheitsrückfall verbunden. DNBS ulcerosa ist ein geeignetes Modell, um die Rolle der Depression und ihre Auswirkungen auf die Reaktivierung von Colitis bei Mäusen untersucht. Das Verfahren beinhaltet typischerweise Anfangs Induktion von Colitis durch DNBS, gefolgt von der Auflösung des ulcerosa, indem man die Mäuse für 6-8 Wochen. Die Mäuse werden dann mit Depressionen verursachen Mittel wie Reserpin oder durch Geruchs Bulbektomie verabreicht, um die Depression, gefolgt von Testen sie für die Reaktivierung der Colitis durch Herausforderung mit einem subcolitic Dosis von 2 DNBS induzieren. </li><li> Stress und Reaktivierung von Colitis: Stress ist ein weiterer gemeinsamer Umweltfaktor, der Pathogenese IBD in Verbindung gebracht wurde. Es gibt eine wachsende Zahl von Hinweisen, die eine starke Assoziation zwischen chronischem Stress und dem Auftreten der Symptome von UC und CD in Nagetier schlägts sowie bei Menschen und nicht-menschlichen Primaten 3. DNBS ulcerosa ist ein gutes Modell, um Stress-assoziierte Kolitis Reaktivierung des in Mäusen und Ratten. Die Methode wird in der Regel in einer ähnlichen Weise, wie oben erwähnt, außer für Depressionen anstelle von Depressionen eingesetzt werden, werden die Tiere auf Stressfaktoren wie Schall-und Zurückhaltung Stress 4 ausgesetzt. </li><li> Neurogener Entzündung: Eine Reihe von Studien haben entweder vorübergehende oder dauernde Veränderungen in der enterische Nervensystem (ENS) Struktur und Funktion, wie in Gewebeproben von Tiermodellen und bei Patienten mit IBD ersichtlich beschrieben. DNBS ist ein gutes Modell, um die Auswirkungen der Entzündung auf der ENS 5 zu erkunden und sowohl noradrenerge und cholinerge Nervenbahnen 6 zu studieren. </li><li> Verletzungs-Reparaturmechanismen: Während IBD Pathogenese, Wirt stamm Verletzungen Mediatoren wie reaktive Sauerstoffspezies (ROS), Stickstoffmonoxid (NO), interzelluläres Adhäsionsmolekül 3 (ICAM-3), und P-Selektin sind alle p dargestelltlag eine Rolle in der epithelialen Darmstörungen. DNBS ist ein ausgezeichnetes Modell, um Verletzungen durch die Hochregulation dieser Mediatoren sowie Reparaturmechanismen, die durch den Einsatz von selektiven Inhibitoren Drogen oder 7,8 reguliert werden verursacht studieren. </li><li> Transmurale Entzündung: Zusätzlich zu den oben erwähnten Anwendungen der DNBS, das Modell kann auch angewendet werden, um eine transmurale Entzündung des Darms, eine klassische Funktion in Patienten mit CD studieren. Beide DNBS und TNBS-induzierte Colitis mit signifikanten Eindringen von Lymphozyten zugeordnet ist, in die Darmschleimhaut macht diese Modelle besonders nützlich, um T-Zell-abhängigen Immunmechanismen zu untersuchen. </li></ol> Im Vergleich mit dem DSS-Modell, die Vorteile der DNBS und TNBS-induzierte Colitis sind geringe Kosten, schnelle Entwicklung einer Kolitis (erfordert in der Regel 1-3 Tage, um reproduzierbare Geschwüre und Entzündungen zeigen) und konsistente lokalisierte Schäden an der distalen Dickdarm. Aber die Nachteile sind eine Voraussetzung für einehöheres Maß an technischem Know-how, die Optimierung der DNBS / TNBS-Dosis, und die Notwendigkeit für die Anästhesie für die rektale Verabreichung. In dieser Methodenpapier untersuchten wir die Wirkung von verschiedenen Konzentrationen von n-6 und n-3 mehrfach ungesättigten Fettsäuren auf die Änderung der Kolon-Schleimhaut Reaktion auf DNBS-induzierte Colitis bei Ratten unter Verwendung der Pflanzenöle Distelöl (SO) und Rapsöl (CO) und Fischöl (FO). Es ist gezeigt worden, dass n-6 und n-3-Fettsäuren sind wichtige Mediatoren von entzündlichen Darmerkrankungen durch ihre Rolle als Acylreste der Zellmembran Phospholipiden 9. Im Gegensatz zu der proinflammatorischen Potential der n-6-Fettsäuren, sind n-3-Fettsäuren bei ausreichend hohen Aufnahme potentiell wirksame entzündungshemmende Mittel. Die entzündungshemmenden Wirkungen von n-3-Fettsäuren werden direkt durch Austausch von Arachidonsäure als Substrat Eicosanoid-vermittelte Hemmung der Arachidonsäure-Metabolismus und indirekt über die Veränderung der proinflammatory Genexpression und Zellsignalisierung. Die n-3-Fettsäuren führen auch zu resolvins, eine Familie von antiinflammatorischen Mediatoren. Hohe Aufnahme von n-3-Fettsäuren mit einer Abnahme in der Produktion von proinflammatorischen Eicosanoiden, Zytokine, Chemokine, reaktiven Sauerstoffspezies und die Expression von Adhäsionsmolekülen verbunden. In dieser Studie wurden Ratten ad libitum Diäten in aller Nährstoffe identisch, außer Fettsäuren zugeführt, wobei als ein Prozent Energie aus Fett, 20% SO, 20% CO, 18% Fischöl plus 2% Distelöl (FO) 10-11 . In Prozent der täglichen Energie die SO Nahrung zuge 15% Linolsäure (LA), mit &lt;0,06% α-Linolensäure (ALA) und keine Eicosapentaensäure (EPA) oder Docosahexaensäure (DHA), die CO-Diät hatte 4,2 LA% und 1,9% ALA ohne EPA oder DHA, und die FO Ernährung vorgesehen 1,4% EPA, DHA 4,9%, 0,32% LA, und 0,12% ALA. Drei Wochen nach Beginn der Diät Lipid wurden die Mäuse intrarektale DNBS oder 50% igem Ethanol verabreicht und nach 5 Tagen geopfert. Der Einflammatory Antwort wurde durch Bewertung der Gewichtsverlust, histologischen Scores und Gewebeschäden Myeloperoxidaseaktivität ausgewertet.

<table><tbody><tr><td>1 ml Spritze</td><td>BD Biosciences</td><td>309659</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>19 G Nadel</td><td>BD Biosciences</td><td>305187</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Polyethylenschlauch PE-50</td><td>BD Biosciences</td><td>427517</td><td>für die intrarektale Verabreichung bei Mäusen</td></tr><tr><td>Polyethylenschlauch PE-90</td><td>BD Biosciences</td><td>427519</td><td>für die intrarektale Verabreichung bei Ratten</td></tr><tr><td>DNBS</td><td>MP Bio</td><td>150959</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Tränengel</td><td>Novartis</td><td>63601662596</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>10% Formalin</td><td>Fischer</td><td>5F93-4</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Wärmekissen</td><td>Kent Scientific</td><td>TPZ-0510</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Fisher</td><td>A-962.4</td>&<td>nbsp;</td></tr><tr><td>Hexadecyltrimethyl-ammoniumbromid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H5882</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Kaliumphosphat-Pufferlösung</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>79628-</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>o-Dianisidin-Dihydrochlorid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D3252</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>30% H2O2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>31642</td><td>Wasserstoffperoxid-Spektralphotometer</td></tr><tr><td></td><td>BioRad</td><td>Benchmarker Plus</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Lichtmikroskop</td><td>Zeiss</td><td>Axio Image.Z1</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Softwareprogramm für die Datenanalyse&nbsp;</td><td>GraphPad Software</td><td>GraphPad Prism Software Version 4.00</td><td><a href="http://www.graphpad.com/">www.graphpad.com</a></td></tr></tbody></table>

dnbs / tnbs colitis-modelle: einblicke in chronisch entzündlichen darmerkrankungen und effekte von nahrungsfett

DNBS/TNBS Colitis Models: Providing Insights Into Inflammatory Bowel Disease and Effects of Dietary Fat

Chronisch entzündliche Darmerkrankungen (IBD), einschließlich Morbus Crohn und Colitis ulcerosa, sind seit langem mit einer genetischen Basis gebracht worden, und vor kurzem Gastgeber Immunantwort auf mikrobielle und Umweltfaktoren. Dinitrobenzolsulfonsäurelösung (DNBS)-induzierte Colitis ermöglicht es, die Pathogenese der IBD damit verbundenen Umwelt Auslöser wie Stress und Ernährung, die Auswirkungen von möglichen Therapien, und die zugrunde liegenden Mechanismen Darmentzündung und Schädigung der Schleimhaut zu studieren. In dieser Arbeit untersuchten wir die Wirkungen von diätetischen n-3 und n-6-Fettsäuren von der Kolon-Schleimhaut-entzündliche Reaktion auf DNBS-induzierte Colitis bei Ratten. Alle Ratten wurden identisch Diäten mit Ausnahme der verschiedenen Arten von Fettsäuren gefüttert [Färberdistelöl (SO), Rapsöl (CO), oder Fischöl (FO)] drei Wochen vor der Belichtung mit DNBS Intrarectale. Steuer Ratten intrarektalen Ethanol weiter an Gewicht über der 5-Tage-Studie, während DNBS behandelten Ratten Lipid Diäten alle lost Gewicht mit FO-und CO-gefütterten Ratten zeigen signifikanten Gewichtsverlust von 48 h und Ratten SO von 72 Stunden zugeführt. Gewichtszunahme wieder nach 72 Stunden nach DNBS, und um 5 Tage nach DNBS hatte der FO-Gruppe einen höheren Körpergewicht als SO oder CO-Gruppen. Darmabschnitten sammelte 5 Tage nach der Behandlung zeigte DNBS-Brenngeschwürbildung, Krypta Zerstörung, Becher-Zell-Depletion und Schleimhaut Infiltration von akuten und chronischen Entzündungszellen, die in ihrer Schwere unter Diätgruppen unterschieden. Die SO zugeführt Gruppe zeigte die schwersten Schäden, gefolgt von der CO und FO gefüttert Gruppen, die die mildesten Grad der Gewebeverletzung zeigte. Ebenso Kolon Myeloperoxidase (MPO)-Aktivität, einem Marker der Neutrophilen-Aktivität war signifikant höher in SO durch CO gefütterten Ratten gefolgt, mit LWL-gefütterten Ratten mit deutlich niedrigeren MPO-Aktivität. Diese Ergebnisse zeigen die Verwendung von DNBS-induzierte Colitis, wie in diesem Protokoll beschrieben, um den Einfluss der Ernährung bei der Pathogenese von IBD zu bestimmen.

Herausforderung von Ratten (Sprague-Dawley) oder Mäusen (C57BL / 6) mit DNBS führt in der Regel vorübergehenden Gewichtsverlust und Durchfall, manchmal mit vorliegenden Blut im Stuhl. Allerdings können Faktoren wie Genetik, Ernährung und intestinale Mikrobiota Anfälligkeit DNBS induzierte Colitis ändern. Daher wird in den Experimenten enthalten Tiere sollten von der gleichen Institution zu sein, entweder lokal abgeleitet oder von einem Tier Lieferanten bestellt. Alle Tiere müssen sorgfältig für den Grad der Gewichtsverl...

DNBS / TNBS induzierte Colitis bietet eine alternative und kostengünstige Methode, um die Pathobiologie von entzündlichen Darmerkrankungen zu untersuchen. Die in diesem Papier diskutiert Protokoll beschreibt die erfolgreiche Anwendung von DNBS Colitis bei Mäusen und Ratten zu induzieren, und erlaubt es, Host-Mediated-Darm-Reaktionen gründlich zu studieren.

DNBS / TNBS Colitis-Modelle: Einblicke in chronisch entzündlichen Darmerkrankungen und Effekte von Nahrungsfett

Inflammatory Bowel Diseases (IBD), including Crohn&#39;s Disease and Ulcerative Colitis, have long been associated with a genetic basis, and more recently ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, eine alternative und kostengünstige Methode zur Untersuchung der entzündlichen Darmerkrankung oder IBD unter Verwendung von DY-Nitrobenzolzonsäure oder DNBS bereitzustellen. Dies wird erreicht, indem DNBS zunächst über eine sanfte Einführung in den Anus rektal verabreicht wird. Im zweiten Schritt werden Gewebeproben des Dickdarms für die histologische Untersuchung gewonnen und die Myeloperoxidase-Aktivität der mit DNBS provozierten Gewebe bestimmt. Letztendlich können die Auswirkungen von Nahrungsölen auf Gewichtsverlust und Kolitis mittels makroskopischer und mikroskopischer Methoden bewertet werden.Der Hauptvorteil dieser Methode gegenüber der etablierten Dextron-Natriumsulfat-Methode besteht darin, dass die DNBS-Methode einfach durchzuführen, kostengünstiger und äußerst reproduzierbar ist. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der IBD-Forschung zu beantworten, beispielsweise welche Rolle Stress und Depression bei der Rezidivierung von IBD spielen oder welche zugrundeliegenden Mechanismen bei Darmverletzung und -reparatur eine Rolle spielen. Für die rektale Applikation von DNBS bei Mäusen befestigen Sie zunäc

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Dextransulfat-Natrium (DSS) im Trinkwasser verabreicht wird eine etablierte murine entzündlichen Verletzungen Modell der akuten Colitis. Dieses Protokoll beschreibt die Methode für die DSS-Behandlung und der Aufbereitung der Gewebe.

Murine Colitis Modeling mit Dextransulfat Sodium (DSS)

Experimentelle Modelle von chronisch entzündlichen Darmerkrankungen haben uns erlaubt, die komplexen angeborenen und adaptiven Immunantwort mit Pathogenese assoziiert zu untersuchen. Mit histologische Scoring, Quantifizierung von pro-inflammatorischen Zytokinen und Myeloperoxidase-Aktivität, kann man anfangen, diese Reaktionen in chronisch entzündlichen Darmerkrankungen gesehen zu beurteilen.

Untersuchung Darmentzündungen in DSS-induzierten Modell der IBD

Wir beschreiben Methoden zur longitudinalen Überwachung der Wirksamkeit von Therapeutika zur Behandlung von Dickdarmpathologien bei Mäusen mit einem starren Endoskop. Dieses Protokoll kann leicht für die Charakterisierung des therapeutischen Ansprechens eines einzelnen Tumors bei lebenden Mäusen und auch für die Überwachung eines möglichen Krankheitsrückfalls verwendet werden.

Nicht-invasive Beurteilung der Wirksamkeit neuer Therapeutika für Darmpathologien Verwenden der seriellen endoskopische Bildgebung von lebenden Mäusen

Aktuelle Behandlungen von entzündlichen Darmerkrankungen (IBD) zielen darauf ab, die Krankheitssymptome zu lindern, kann aber schwere Nebenwirkungen verursachen. Somit sind alternative Strategien in Tier Colitis-Modellen untersucht. Hier erklären wir, wie die positiven Wirkungen von Nahrungsergänzungsmitteln auf die klinische IBD Zeichen sind in einer solchen ulcerosa Modell analysiert.

Analyse wohltuende Wirkung von Nahrungsergänzungsmitteln auf Darmepithel Barrierefunktionen Während Experimental ulcerosa

Hier stellen wir Ihnen ein Protokoll zur Untersuchung der Wirkung von der Aufhebung der Verkos-Genen auf Immunreaktionen eine Dextran Sulfat Natrium (DSS)-induzierte entzündliche Darm-Krankheit (IBD)-Maus-Modell.

Auswirkungen des Geschmacks Signalisierung Protein Abschaffung auf Darm-Entzündung in eine entzündliche Darm-Krankheit-Maus-Modell

In dieser Studie beschreiben wir ein detailliertes Verfahren der TNBS-vermittelten Darmfibrose, die eine vergleichbare Pathophysiologie wie Morbus Crohns Fibrose aufweist. Wir diskutieren diesen Ansatz auch im Lichte von Rapamycin erleichterthemmende Auswirkungen auf Darmfibrose.

Mechanistische Einblicke in die Entwicklung von TNBS-vermittelter Darmfibrose und Bewertung der hemmenden Wirkungen von Rapamycin

Dieses Protokoll beschreibt ein Mausmodell der Salmonellen-getriebenen Darmfibrose, die den wichtigsten pathologischen Merkmalen der Morbus Crohn ähnelt, einschließlich transmuraler Entzündungen und Fibrose. Diese Methode kann verwendet werden, um Wirtsfaktoren zu bewerten, die fibrotische Ergebnisse mit mutierten Mäusen verändern, die auf einem c57Bl/6 genetischen Hintergrund gehalten werden.

Chronische Salmonelleninfektion induzierte Darmfibrose

Das Protokoll stellt ein vollständig validiertes TNBS-induziertes murines Modell der Morbus Crohn und Methoden zur Visualisierung von Östrogenrezeptoren durch Immunhistochemie unter Verwendung der Immunfluoreszenz formalinfixierter Dickdarmabschnitte dar, die in Paraffin eingebettet sind.

Visualisierung von Östrogenrezeptoren bei Mäusen mit TNBS-induzierter Morbus Crohn mit Immunfluoreszenz

Das vorliegende Protokoll beschreibt die Entwicklung eines Morbus Crohn-ähnlichen Colitis-Modells bei Nagetieren. Eine transmurale Entzündung führt zu einer Stenose an der TNBS-Instillationsstelle, und eine mechanische Vergrößerung wird im Segment proximal zur Stenose beobachtet. Diese Änderungen ermöglichen die Untersuchung der mechanischen Belastung bei Colitis.

Ein TNBS-induziertes Nagetiermodell zur Untersuchung der pathogenen Rolle von mechanischem Stress bei Morbus Crohn

Dieses Protokoll zeigt, wie das Src-Homologie-2-Domänen-enthaltende 5'-Inositolphosphatase (SHIP)-defiziente Mausmodell für Morbus Crohn (CD)-ähnliche ileale Entzündung und Fibrose verwendet werden kann, um neuartige Therapeutika für Zöliakie zu testen.

Evaluierung therapeutischer Interventionen im SHIP-defizienten Mausmodell der Morbus Crohn-ähnlicher Ileitis und Fibrose

Erfahren Sie die DNBS-Methode zur Induktion von Kolitis bei Mäusen und Ratten für chronisch entzündliche Darmerkrankungen. Diese kostengünstige Technik ermöglicht histologische Analysen und Untersuchungen zu Darmverletzungen.

DNBS / TNBS Colitis-Modelle: Einblicke in chronisch entzündlichen Darmerkrankungen und Effekte von Nahrungsfett

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