Name: Der Einsatz von Gas-Chromatographie zu Änderungen der Zusammensetzung der Fettsäuren in Rattenlebergewebe während der Schwangerschaft Analysieren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-13T13:45:00.000+00:00
Duration: 11 min 8 s
Description: Erfahren Sie die Analyse der Fettsäurezusammensetzung in Rattenlebergewebe während der Schwangerschaft mittels Gas-Chromatographie. Diese Methode ermöglicht präzise Einblicke in metabolische Anpassungen.

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Die Autoren möchten den Beitrag von Meritxell Romeu-Nadal in die Studie an Ratten bestätigen.

1. Tierverfahren <ol><li> Alle Tier Arbeiten sollten in Übereinstimmung mit den Home Office Tiere (Scientific Procedures) Act (1986) durchgeführt werden. </li><li> Mate-Wistar-Ratten im Alter von 10 Wochen alt von monogamen Zucht, und bestätigen Schwangerschaft durch das Auftreten einer vaginalen Stecker. Nehmen Sie dies als ein Tag der Trächtigkeit und beginnen experimentelle Ernährung. Für jungfräulichen Weibchen, jedes Haus individuell Ratte, und beginnen experimentelle Ernährung. </li><li> Nach Fütterung der Versuchsdiäten für 20 Tage einschläfern Ratten durch CO 2-Erstickung durch Genickbruch folgte. </li><li> Verwenden Dissektion Pinzette und Schere, um die Bauchhöhle zu entlarven und die Leber herauszuschneiden, indem die Bänder, die die Leber mit der Membran zu verbinden, Vorderwand der Bauch, Magen und Zwölffingerdarm. Waschen der Leber in PBS und in flüssigem Stickstoff einfrieren vor der Lagerung bei -80 ° C. </li></ol> 2. Erstellung eines Gesamtlipidextrakt 9 <ol><li> Molecul hinzufügenar Sieben (zu füllen 1/10 der Lösungsmittelbehälter) an alle Lösungsmittel, um &quot;trocken&quot; Lösungsmittel erstellen. Führen Sie alle Lösungsmittel Arbeit innerhalb einer Abzugshaube. </li><li> Schneiden Sie ca. 100 mg eingefroren Leber und wiegen. Legen Sie das Gewebe in ein Rohr in einem Eiskübel und fügen Sie 0,8 ml eiskaltem 0,9% NaCl. Homogenisieren des Gewebes. </li><li> Hinzufügen interner Standards in 1 ml / mg trockenes Chloroform: Methanol (2:1, v / v) enthält, butyliertes Hydroxytoluol (BHT, 50 mg / l) als Antioxidationsmittel. Für 100 mg Rattenleber mit 100 ug CE-Standard (Cholesteryl heptadecanoate 17.00). Vorsicht: Chloroform und BHT sind gefährlich. </li><li> 5,0 ml trockenem Chloroform: Methanol (2:1, v / v), enthaltend BHT (50 mg / L). </li><li> 1,0 ml 1 M NaCl, gründlich durch Vortexen mischen, bis die Mischung aussieht Uniform. Proben verschlossen und bei -20 ° C zu diesem Zeitpunkt gespeichert werden für bis zu einer Woche. </li><li> Zentrifugieren bei 1000 × g für 10 min, geringe Brems bei Raumtemperatur. </li><li> Sammeln unterenPhase mit Pasteur-Glaspipette, Transfer zum neuen Schraubverschluss Glasrohr und trocken unter Stickstoff bei 40 ° C Proben verschlossen und bei -20 ° C zu diesem Zeitpunkt gespeichert werden für bis zu einer Woche. </li></ol> 3. Trennung der Lipidklassen durch Festphasenextraktion (SPE) 10 <ol><li> Verbinden der SPE Tank mit einer Vakuumpumpe und legen Aminopropylsilicagel SPE-Kartusche auf den Tank. </li><li> Zeigen neuen Schraubverschluss Glasrohr markiert TAG und CE im Tank Rack unter der Spalte zur ersten Fraktion zu sammeln. </li><li> Lösen Sie die Gesamtlipidextrakt in 1,0 ml trockenem Chloroform und Wirbel. </li><li> Bewerben Probe auf die Säule mit einem Glas-Pasteur-Pipette und zu ermöglichen, durch in die Schraubkappe Rohr unter der Schwerkraft tropfen. Wenn keine weiteren Tropfen fallen, entfernen Sie die restliche Flüssigkeit durch Vakuum. </li><li> Eluiere das TAG-und CE-Fraktion unter Vakuum, waschen Sie die Säule mit 2 x 1,0 ml trockenem Chloroform wäscht. </li><li> Wenn alle Flüssigkeit entfernt wird, trocknen die TAG-und CE-Fraktionierungn unter Stickstoff bei 40 ° C. Proben verschlossen und bei -20 ° C zu diesem Zeitpunkt gespeichert werden für bis zu einer Woche. </li><li> Zeigen neuen Schraubverschluss Glasrohr markiert PC in den Tank Fach unter der Spalte. </li><li> Eluieren die PC-Fraktion im Vakuum unter Zusatz von 2 x 1,0 ml trockenem Chloroform: Methanol (60:40, v / v), bis alle Flüssigkeit aus der Säule entfernt wird. </li><li> Entfernen und trocken PC-Fraktion unter Stickstoff bei 40 ° C Proben verschlossen und bei -20 ° C zu diesem Zeitpunkt gespeichert werden für bis zu einer Woche. </li><li> Legen Sie eine neue Schraubverschluss Glasrohr mit der Bezeichnung PE in den Tank Tablett und eluieren PE Fraktion mit der Zugabe von 1,0 ml trockenem Methanol unter Vakuum. </li><li> Entfernen und trocken PE-Fraktion unter Stickstoff bei 40 ° C Proben verschlossen und bei -20 ° C zu diesem Zeitpunkt gespeichert werden für bis zu einer Woche. </li><li> Zeigen neuen Schraubverschluss Glasrohr markiert NEFA in den Tank Tablett und eluieren NEFA-Fraktion unter Vakuum durch die Zugabe von 2 x 1,0 ml Wasch trockenem Chloroform: Methanol: Eisessig. (100:2:2, v / v / v) Achtung: Eisessig ist gefährlich. </li><li> Entfernen gesammelten NEFA-Fraktion und trocken unter Stickstoff bei 40 ° C Proben verschlossen und bei -20 ° C zu diesem Zeitpunkt gespeichert werden für bis zu einer Woche. </li><li> Legen Sie eine neue Aminopropylsilicagel SPE-Kartusche auf dem SPE Tank und setzen Sie ein Glas mit Schraubverschluss Rohr im Tank Wanne unter der Patrone, um Abfall zu sammeln. </li><li> Mit 3 Wasch trockenem Hexan unter Vakuum und dann eine endgültige 1,0 ml Wasch unter der Schwerkraft Die Säule. Lassen Sie die Patrone zu trocken geworden Vorsicht (drehen Sie die Patrone Spalte Kanäle in eine geschlossene Position, wenn Hexan Füllstand nahe an der Patrone Matrix):. Hexan ist gefährlich. </li><li> Ersetzen Abfallschlauch mit neuen Schraubverschluss Glasrohr markiert CE. </li><li> Lösen Sie die TAG getrocknet und CE-Fraktion (in Schritt 3.6 vorbereitet) in 1.0 ml trockenem Hexan und Wirbel. Wenden Sie diese auf die Säule mit einem Glas-Pasteur-Pipette und ermöglichen durch unter g abtropfenravity. </li><li> Wenn keine weiteren Tropfen fallen, entfernen Sie die restliche Flüssigkeit im Vakuum. </li><li> Im Vakuum, waschen Sie die Säule mit 2 x 1,0 ml trockenem Hexan wäscht CE und trocken gesammelte Fraktion eluieren unter Stickstoff bei 40 ° C Proben verschlossen und bei -20 ° C zu diesem Zeitpunkt gespeichert werden für bis zu einer Woche. </li><li> Zeigen neuen Schraubverschluss Glasrohr markiert TAG in der Tankschale und eluieren TAG mit der Zugabe von 2 x 1,0 ml Wasch trockenem Hexan: Methanol: Ethylacetat (100:5:5) unter Vakuum. </li><li> Trocken gesammelte Fraktion unter Stickstoff bei 40 ° C. Proben können begrenzt werden und bei -20 ° C zu diesem Zeitpunkt gespeichert sind bis zu einer Woche. Vorsicht: Ethylacetat ist gefährlich. </li></ol> 4. Herstellung von FAME von CE 10 <ol><li> 0,5 ml trockenem Toluol zu der abgetrennten CE-Fraktion (in Schritt 3.19) und auf die Wirbel. Vorsicht: Toluol ist gefährlich. </li><li> Bereiten Methylierungsreagens (trocken Methanol mit 2% (v/ V) H 2 SO 4), von denen 1,0 ml pro Probe erforderlich. Abgabevolumen trockenem Methanol in Glas oder geeignete Kunststoffbehälter mit Deckel, und fügen Sie die erforderliche Menge an H 2 SO 4 tropfenweise dann mischen durch Umdrehen. Vorsicht: Schwefelsäure ist gefährlich. </li><li> 1,0 ml der Methylierungsreagens auf die in trockenem Toluol gelöst Proben, die Kappe die Rohre sicher und vorsichtig mischen. </li><li> Erhitzen Sie die Proben für 2 Stunden bei 50 ° C </li><li> Nach 2 Stunden Rohre vom Herd nehmen. Nach dem Abkühlen 1,0 ml Neutralisationslösung (0,25 M KHCO 3 0.5MK 2 CO 3). Vorsicht: Kaliumbicarbonat und Kaliumcarbonat sind gefährlich. </li><li> 1,0 ml trockenem Hexan und Wirbel. </li><li> Zentrifuge bei 250 × g für 2 min, geringe Brems bei Raumtemperatur. </li><li> Sammeln oberen Phase, die die FAME enthält, und übertragen in eine neue nicht Schraubverschluss Einwegglasrohr. </li><li> Trocknen Sie die gesammelten FAME unterStickstoff bei 40 ° C. Proben verschlossen und bei -20 ° C zu diesem Zeitpunkt gespeichert werden für bis zu einer Woche. </li></ol> 5. Entfernung von freiem Cholesterin Kontamination von CE FAME 14 (Free Cholesterin kann die Probe verunreinigen, siehe Abbildung 1 zum Beispiel Gaschromatographen Spuren mit und ohne freies Cholesterin-Entfernung). <ol><li> Stellen Sie einen Abfallrohr in SPE Tank und setzen Sie ein Kieselgel-SPE-Kartusche auf den Tank. </li><li> Mit 3 x 1 ml Wasch trockenem Hexan unter Vakuum und 1 x 1 ml unter Schwerkraft waschen Spalte. </li><li> Entfernen Abfall wäscht und neue Abfallschlauch in den Tank. </li><li> Lösen CE FAME in 1 ml trockenem Hexan, Wirbel. </li><li> Übernehmen, um die Spalte mit einer Glaspasteurpipette und ermöglichen durch unter der Schwerkraft zu tropfen. </li><li> Mit 3 x 1 ml Waschschritten mit Hexan unter Vakuum Waschkolonne. </li><li> Entfernen Abfall wäscht und setzen Sie neue Schraubverschluss Rohr in den Tank markiert CE FAME. </li><li> Eluieren derCE FAME mit 2 x 1 ml trockenem Hexan: Diethylether (95:5 v / v) Waschen. </li><li> Trocknen unter Stickstoff bei 40 ° C. Proben können begrenzt werden und bei -20 ° C zu diesem Zeitpunkt gespeichert sind bis zu einer Woche. Vorsicht: Diethylether ist gefährlich. </li></ol> 6. Übernahme von FAME in GC Auto Sampler Vial <ol><li> In 75 ul trockenem Hexan zu probieren, Wirbel-, und Transfer zu einem GC-Autoprobenfläschchen. </li><li> Fügen Sie eine weitere 75 ul trockenem Hexan zu probieren, Wirbel und übertragen auf den gleichen GC Autoprobenfläschchen. Proben verschlossen und bei -20 ° C zu diesem Zeitpunkt gespeichert werden für bis zu einem Monat. </li></ol> 7. Analyse mit dem Gaschromatographen 14 <ol><li> Analysieren FAME auf einem Gaschromatographen. Beispiel einzurichten: 30 mx 0,25 um x 0,25 mm BPX-70 Quarzkapillarsäule mit Temperaturprotokoll: Anfangstemperatur 115 ° C, halten 2 min, Rampe 10 ° C / min auf 200 ° C, halten 18,5 min, Rampe 60 ° C / min bis 245 ° C, halt 4 min. Kolumne: Heliumgas, Durchflussmenge 1,0-, Druck-und Geschwindigkeits 29 14.6. Injektor: Temperatur = 300 ° C Detektor: Der Wasserstoffstrom 40,0, 184,0 Luftstrom, Make-up Gas Helium, fließen 45,0, Temperatur = 300 ° C </li><li> Stellen Splitverhältnis als angemessen (zB 25:1 für die CE-FAME-Analyse). </li><li> Bestimmen Sie die Fläche unter jedem Peak mit der entsprechenden Software und identifizieren FAME durch Vergleich mit Standards. Siehe Abbildung 2 beispielsweise Chromatogramme. </li><li> Verwenden der Fläche unter den Spitzendaten, um den Beitrag der einzelnen Fettsäuren als Prozentsatz der Gesamtfettsäuren zu berechnen. </li><li> Berechnen absoluten Konzentrationen von Fettsäuren durch Teilen der Fläche des internen Standards von der zugegebenen Menge. Teilen die Fläche jeder Fettsäure dieses Ergebnis absoluten Konzentrationen jeder Fettsäure in der Menge des Gewebes verwendet zu erhalten. </li></ol>

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</ol>

Die Autoren erklären, keine finanziellen Interessen konkurrieren.

Gas-Chromatographie ist eine genaue Technik, um für die Fettsäureanalyse zu verwenden, und die hohe Reproduzierbarkeit hält diese Technik für die klinische Analysen. Falls GC-Säulen verwendet werden, um die Identifizierung der Fettsäuren von Interesse zu ermöglichen, die verfügbaren Spalten mit Variationen in der Polarität der stationären Phase, Säulenlänge und Innendurchmesser. Die Verwendung einer Quarzglas-Kapillarsäule in dieser Analysemethode eine gute thermische Stabilität und eine hohe Reproduzierbarkeit der Rete...

Gaschromatographie (GC) ist eine gut etablierte Technik, die zur Nahrungsergänzung bei oder physiologischen Bedingungen, wie Fettsucht (und verwandten Krankheiten wie Diabetes) oder Schwangerschaft 3 in Lipidpools und Zellmembranen 1,2 Identifizierung und Quantifizierung des Einbaus von Fettsäuren - 5. Es ist auch für die Analyse der Art und Menge der Fette in Lebensmitteln. Dies ist nützlich bei der Charakterisierung von Versuchsdiäten, sowie die Gewährleistung, dass die Lebensmittelindustrie erfüllt die Norm. Zum Beispiel kann GC verwendet werden, um die Identität und Menge der Fettsäuren in einem Produkt, wie ein Nahrungsergänzungsmittel zu bestätigen, um sicherzustellen, dass die Kennzeichnung korrekt und Vorschriften eingehalten 6,7. Analyse der Fettsäuren können wertvolle Einblicke in den Fettstoffwechsel in Gesundheit und Krankheit, die Auswirkungen der Änderung der Ernährungsgewohnheiten und die Auswirkungen von Änderungen in physiologischen Zustand 8 bereitzustellen. Verwendung von GC-Proben während der Schwangerschaft Studie hat wichtige bereitgestelltInformationen über Änderungen in Fettsäure und komplexe Lipidhomöostase 3. Vor der chromatographischen Trennung, Lipide werden typischerweise aus der Probe unter Verwendung der Löslichkeit der Lipide im Lösungsmittel Mischungen aus Chloroform und Methanol extrahiert. Natriumchlorid wird zugegeben, um die Trennung der Mischung in eine wässrige und organische Phasen enthaltendes Lipid 9,10 erleichtern. Komplexe Lipidklassen von Interesse aus der Gesamtlipidextrakt durch Festphasenextraktion (SPE) getrennt werden. Dieses Trennverfahren eluiert Lipidklassen auf der Grundlage ihrer Polarität oder Bindungsaffinität. Triacyglycerols (TAG) und Cholesterinester (CE) zunächst als Kombinationsanteil, weitere Klassen, Phosphatidylcholin (PC) eluiert, Phosphatidylethanolamin (PE), und nicht-veresterten Fettsäuren (NEFA), indem die Polarität der Elutionsmittel eluiert . Die Trennung der TAG von CE nutzt die Bindung von TAG nur zu einem frischen SPE cartridge, so dass CE eluiert werden. TAG kann dann durch Erhöhen der Polarität des Lösungsmittels 9,10 Elution eluiert werden. Diese Verfahren können mehrere Proben gleichzeitig mit einer höheren Ausbeute als getrennt werden mit Dünnschichtchromatographie erreicht, was bedeutet, dass relativ klein Proben (z. B. &lt;100 ul Plasma oder Serum, &lt;100 mg Gewebe) können analysiert werden 11,12. GC ist eine gut etablierte Technik zuerst in den 1950er Jahren beschrieben, wurde vorgeschlagen, dass die mobile Phase in der dann Flüssigkeit-Flüssigkeit-Systeme können mit Dampf ersetzt werden. Es wurde ursprünglich für die Erdöl-Analyse verwendet, aber schnell in anderen Bereichen, wie Aminosäureanalyse und Lipidbiochemie, die immer noch von besonderem Interesse erweitert. Fortschritte in der GC und Technologie wie die Entwicklung von Kapillarsäulen von den bisher verwendeten Füllkörper hat unseren derzeitigen Techniken, bei denen Fettsäuren sind in der Lage zu sein, führteeffizienter bei niedrigeren Temperaturen, was zu GC routinemäßig verwendet werden, um in einer Vielzahl von Untersuchungen 13 identifizieren und zu quantifizieren Fettsäuren getrennt. GC benötigt Fettsäuren zu, damit sie ausreichend flüchtig, um bei vernünftigen Temperaturen ohne thermische Zersetzung eluiert werden können derivatisiert werden. Dies beinhaltet gewöhnlich die Substitution einer funktionellen Gruppe Wasserstoff enthaltenden Ester, Thioester oder Amide, zur Analyse zu bilden. Methylester sind häufig Derivate untersucht, die durch Methylierung hergestellt werden. In diesem Verfahren werden die Esterbindungen in komplexen Lipiden hydrolysiert, um freie Fettsäuren, die transmethyliert zu Fettsäuremethylester (FAME) bilden freizugeben. Das resultierende Profil der FAME GC bestimmt wird, wird als die Fettsäurezusammensetzung bezeichnet und kann leicht zwischen den verschiedenen Versuchsgruppen 9,10 verglichen werden. Die Technik ermöglicht sowohl die Anteile der einzelmanuelle Fettsäuren und deren Konzentrationen zu messen. Neben der Verwendung von GC analysiert Fettsäuren in der Ernährung Studien und in der Lebensmittelindustrie, kann die Technik für eine Vielzahl von Analysefeldern verwendet werden. Zum Beispiel, Umweltanalysen mit GC sind die Bestimmung von Wasserverunreinigungen durch Insektizide und Bodenanalysen Messchlorgehalt. In der Toxikologie hat GC auch verwendet, um illegale Substanzen in Urin-und Blutproben von Personen zu identifizieren, wie ein Sport-Leistungsförderer 12 und die Fähigkeit, komplexe Mischungen von Kohlenwasserstoffen zu trennen macht diese Technik beliebt in der Erdölindustrie für petrochemische Analyse 12. Schwangerschaft mit signifikanten Änderungen der Fettsäurezusammensetzung von mütterlichem Gewebe, insbesondere des Gehalts an Omega-3 (n-3) und Omega-6 (n-6) polyungesättigten Fettsäuren aci zugehörigends (PUFA) 3. In der aktuellen Studie, veranschaulichen wir die Verwendung von GC in der Messung der Fettsäuren durch die Beschreibung seiner Verwendung in der Analyse der Fettsäurezusammensetzung von Lebergewebe aus Jungfrau und trächtige Ratten Fett niedrigen und hohen Diäten mit verschiedenen Ölquellen gespeist übernommen. Die experimentellen Diäten hier vorgesehen waren eine fettarme Sojaölbasis Diät, eine fettreiche Sojaöl-Diät (130,9 g Gesamtfett / kg Gesamtfett) oder eine hohe Fett-Leinöl-Diät (130,9 g Gesamtfett / kg Ernährung) für 20 Tage zur Verfügung gestellt. Der vollständige Nährstoff und Fettsäurezusammensetzung dieser Diäten wurden zuvor 14 beschrieben. Die Sojaöl-Diäten sind reich an Linolsäure (18.02 n-6) und enthalten eine α-Linolensäure (n-3-18.03 Uhr), während der Leinöl-Diät ist reich an α-Linolensäure. Diese fettreiche Ernährung repräsentieren unterschiedliche Rationen von Linolsäure zu α-Linolensäure (Ration von 8:1 und 1:1, jeweils). Das Verfahren zur Isolierung einzelner Lipidklassen und Analyse durch GC ist, dass wirll entwickelt und validiert, und hat vorher 10, aber ohne detaillierte technische Beschreibung hier gefunden veröffentlicht.

<table><tbody><tr><td>Methanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>M/4056/17'VORSICHT</td><td>' Dämpfe -</td></tr><tr><td>HPLC Chloroform</td><td>Fisher Scientific</td><td>C/4966/17'VORSICHT</td><td>' Dämpfe - HPLC Grade</td></tr><tr><td>BHT</td><td>Sigma- Aldrich</td> <td>W218405'VORSICHT' Staubdämpfe - wasserfrei</td><td></td></tr> <tr><td>NaCl</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>S9888</td><td>wasserfreies</td></tr><tr><td>Hexan</td><td>Fisher Scientific</td><td>H/0406/17'VORSICHT</td><td>' Dämpfe - HPLC-Qualität</td></tr><tr><td>Eisessig</td><td>Sigma- Aldrich</td><td></td> <td>695084'VORSICHT' Verbrennungen - 99,85</td></tr>%<tr><td>Schwefelsäure</td><td>Sigma- Aldrich</td> <td>339741'VORSICHT' Verbrennungen - 99,999</td><td></td></tr>%<tr><td>Kaliumcarbonat</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>209619</td><td>99%</td></tr><tr><td>ACS Kaliumbicarbonat</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>237205</td><td>99,7 % ACS</td></tr><tr><td>Ethylacetat</td><td>Fisher Scientific</td><td></td> <td>10204340'CAUTION' Rauchgase - 99+% GLC SpeciFied Toluol</td></tr><tr><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>T/2300/15'CAUTION</td><td>' Rauch</td></tr><tr><td>Diethylether</td><td>Sigma- Aldrich</td><td></td> <td>309966'CAUTION' Rauch</td></tr> Stickstoff <tr><td>(sauerstofffrei) Zylinder</td><td>BOC</td><td>44-w</td><td>"VORSICHT" Druckgas - Explosionsgefahr</td></tr><tr><td>Aminopropylkieselkie SPE-Kartuschen</td><td>Agilent</td><td>12102014</td><td>Kartusche - Raupenmasse 100 mg</td></tr><tr><td>Kieselgel SPE-Kartuschen</td><td>Agilent</td><td>14102010</td><td>Kartusche - Perlmasse 100 mg</td></tr><tr><td>Molekulare Seives</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>334324</td><td>Pellets, AW-300, 1,6 mm</td></tr><tr><td>Glaspasteurpipetten</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB50251</td><td></td></tr></tbody></table>

der einsatz von gas-chromatographie zu Änderungen der zusammensetzung der fettsäuren in rattenlebergewebe während der schwangerschaft analysieren

The Use of Gas Chromatography to Analyze Compositional Changes of Fatty Acids in Rat Liver Tissue during Pregnancy

Gaschromatographie (GC) ist ein auf Basis von Geweben, Zellen und Plasma / Serum zu identifizieren und die Fettsäuren der Lipide, wodurch Ergebnisse mit hoher Genauigkeit und hoher Reproduzierbarkeit hochempfindliche Methode. Im Stoffwechsel-und Ernährungsstudien ermöglicht GC Beurteilung von Änderungen der Fettsäure-Konzentrationen nach Eingriffen oder bei Veränderungen in physiologischen Zustand wie Schwangerschaft. Festphasenextraktion (SPE) mit Aminopropyl-Silicakartuschen ermöglicht die Trennung der Hauptlipidklassen, einschließlich Triglyceride, verschiedene Phospholipide, und Cholesterylester (CE). GC in Kombination mit SPE wurde verwendet, um die Änderungen in der Fettsäurezusammensetzung der CE-Fraktion in der Leber von Jungfrau und trächtige Ratten, die verschiedenen Hoch-und fettarme Ernährung zugeführt hatte zu analysieren. Es gibt signifikante Diät / Schwangerschaft Wechselwirkungen auf die Omega-3 und Omega-6-Fettsäuren von Leber CE, das anzeigt, dass schwangere Frauen eine unterschiedliche Reaktion auf Nahrungs MANIPULATIonen, als unter den jungfräulichen Weibchen gesehen.

Der Erfolg dieser Methode hängt von genau nach dem Protokoll und auf die saubere Lösemittel und Reagenzien, um &quot;Lärm&quot; und Verunreinigungen, die auf einem Chromatogramm erscheinen können reduzieren. Kontaminierten Proben sind schwieriger zu analysieren, eine Senkung der Genauigkeit der Fläche unter der Kurve Berechnungen. Wenn das Protokoll erfolgreich ein Chromatogramm mit klaren symmetrischen, gut definierte Höhen und mit minimalem Hintergrundgeräusche gefolgt sollten erhalten werden, wie in Abbildung...

Schwangerschaft führt zu signifikanten Änderungen der Fettsäurezusammensetzung von mütterlichem Gewebe. Lipid-Profile können über Gaschromatographie erhalten werden, damit die Identifizierung und Quantifizierung von Fettsäuren in den einzelnen Lipidklassen unter Ratten während der Schwangerschaft zugeführt verschiedenen Hoch-und fettarme Ernährung.

Der Einsatz von Gas-Chromatographie zu Änderungen der Zusammensetzung der Fettsäuren in Rattenlebergewebe während der Schwangerschaft Analysieren

Gas chromatography (GC) is a highly sensitive method used to identify and quantify the fatty acid content of lipids from tissues, cells, and plasma/serum, ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, die Fettsäurezusammensetzung der Leber zu analysieren. Dies wird erreicht, indem zunächst eine Leberprobe gewogen und homogenisiert wird. Der zweite Schritt besteht darin, alle Lipide aus der homogenisierten Leberprobe zu extrahieren.Anschließend werden die einzelnen Lipidklassen wie Cholesterinester mittels Festphasen-Extraktion getrennt. Der letzte Schritt ist die Identifizierung und Derivatisierung der Lipidklassen zu Fettsäuremethylestern. Abschließend wird mittels Gaschromatographie gezeigt, wie sich die Fettsäurezusammensetzung von Geweben nach einer Ernährungsintervention verändern kann oder durch Änderungen des physiologischen Zustands, wie beispielsweise während einer Schwangerschaft, beeinflusst wird.Obwohl diese Methode Einblicke in die Fettsäurezusammensetzung von Gewebe ermöglicht, kann sie auch auf andere Probenarten wie Öle, Samen und Lebensmittel angewendet werden. Im Allgemeinen könnten Nutzer, die neu in dieser Technik sind, Schwierigkeiten haben, da einige Teile des Protokolls manuelle Geschicklichkeit erfordern und Übung benötigen, beispielsweise die wiederholte Sammlung der oberen und unteren Phasen. Die D

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Chemistry

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Wir präsentieren robust biochemischen und mikroskopischen Methoden zur...

Biochemische und High Throughput Mikroskopische Beurteilung der Fettmasse in<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Ein Verfahren zur Bestimmung der Fettsäuregehalt und der Zusammensetzung in Mikroalgen anhand von mechanischen Zellaufschluss, Lösungsmittelbasis Lipidextraktion, Umesterung und die Quantifizierung und Identifizierung der Fettsäuren mittels Gaschromatographie beschrieben. Ein tripentadecanoin interner Standard verwendet wird, um für die möglichen Verluste bei der Extraktion und unvollständiger Umesterung kompensieren.

Die Analyse der Fettsäuregehalt und Zusammensetzung in Mikroalgen

De novo Lipogenese und β-Oxidation von Fettsäuren bilden Schlüsselstoffwechselwege in Hepatozyten, Wege, die in mehreren Stoffwechselstörungen, einschließlich Fettleber gestört werden. Hier zeigen wir Isolierung von Maus primären Hepatozyten und zu beschreiben, die Quantifizierung der β-Oxidation von Fettsäuren und Lipogenese.

Bestimmung der Fettsäureoxidation und Lipogenese in Maus primären Hepatozyten

Hier werden optimierte Methoden zur Generierung von in vivo und in vitro Modellen der hepatischen Steatose und zur Analyse der steatotischen Phänotypen und der damit verbundenen physiologischen Parameter beschrieben.

Optimierte Analyse von<em&gt; In Vivo</em&gt; und<em&gt; In Vitro</em&gt; Hepatosteatose

Die Fettsäure trophische Marker Ansatz, d. h. die Aufnahme von Fettsäuren als gesamte Molekül und Transfer in das Gewebe der Verbraucher ohne oder geringfügige Änderung, durch Wissenslücken im Fettsäure-Stoffwechsel der kleinen Boden Wirbellosen behindert wird. Isotopologue Profilierung dient als ein wertvolles Instrument zur trophische Interaktionen zu entwirren.

Fettsäure- 13C Isotopologue Profilierung gibt Einblick in trophische Carbon Transfer und Fettstoffwechsel der Wirbellosen Verbraucher

Dieses Protokoll beschreibt die Drosophila Larven für GC-MS-basierte Metabolomic Analyse vorzubereiten.

Vorbereitung von Drosophila Larven Proben für Gaschromatographie-Massenspektrometrie (GC-MS)-basierte Metabolomik

Die auf Schrotflinten-Massenspektrometrie basierende Lipidomik liefert eine empfindliche quantitative Momentaufnahme eines breiten Spektrums von Lipidklassen gleichzeitig in einer einzigen Messung aus verschiedenen Nagetiergeweben.

Schrotflinten-Lipidomik von Nagetiergewebe

In dieser Arbeit stellen wir eine kostengünstige quantitative Methode vor, die Deuteriumoxid- und Gaschromatographie-Massenspektrometrie (GCMS) zur Analyse der Gesamtfettsäure-De-novo-Lipogenese in braunem Fettgewebe in vivo verwendet.

Quantitative Bestimmung der de novo Fettsäuresynthese im braunen Fettgewebe mittels Deuteriumoxid

In dieser Arbeit demonstrieren wir ein optimiertes BODIPY 493/503 Fluoreszenz-basiertes Protokoll zur Charakterisierung von Lipidtröpfchen in Lebergewebe. Durch die Verwendung von orthogonalen Projektionen und 3D-Rekonstruktionen ermöglicht der Fluorophor eine erfolgreiche Unterscheidung zwischen mikrovesikulärer und makrovesikulärer Steatose und kann einen komplementären Ansatz zu den klassischen histologischen Protokollen zur Beurteilung der hepatischen Steatose darstellen.

Analyse fluoreszenzgefärbter Lipidtröpfchen mit 3D-Rekonstruktion zur Beurteilung der Lebersteatose

Die Bestimmung der Gasphase Acidität von Cystein enthaltenden Oligopeptide beschrieben. Die Experimente werden unter Verwendung eines Dreifach-Quadrupol-Massenspektrometer. Die relativen Aciditäten der Peptide werden mit Stoßfragmentierung Experimente, und die quantitative Aciditäten werden unter Verwendung der erweiterten Cooks kinetische Methode.

Bestimmung der Gas-Phase Aciditäten von Oligopeptides

Erfahren Sie die Analyse der Fettsäurezusammensetzung in Rattenlebergewebe während der Schwangerschaft mittels Gas-Chromatographie. Diese Methode ermöglicht präzise Einblicke in metabolische Anpassungen.

Der Einsatz von Gas-Chromatographie zu Änderungen der Zusammensetzung der Fettsäuren in Rattenlebergewebe während der Schwangerschaft Analysieren (Video) | JoVE Journal

Der Einsatz von Gas-Chromatographie zu Änderungen der Zusammensetzung der Fettsäuren in Rattenlebergewebe während der Schwangerschaft Analysieren

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