Dynamic Contrast Verbesserte Spintomographie von einem orthotopen Mausmodell Bauchspeicheldrüsenkrebs

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, die dynamische kontrastverstärkte Magnetresonanztomographie (D-C-E-M-R-I) auf ORTHOTOPISCHE Pankreastumor-Xenotransplantate bei Mäusen anzuwenden. Dies wird erreicht, indem zuerst die Bauchspeicheldrüse aus dem Bauch entfernt und dann langsam menschliche Bauchspeicheldrüsenkrebszellen in den Schwanz der Bauchspeicheldrüse infundiert werden. Die Bauchspeicheldrüse ist dann in den Bauch zurückgekehrt, und wenn der Tumor einen Durchmesser von fünf bis sieben Millimetern hat, werden eine Kunststoffplatte und eine Oberflächenspirale auf die Gewebemasse Humas gelegt.

Letztendlich kann das mikrovaskuläre Gefäß des Tumor-Xenotransplantats mittels D-C-E-M-R-I sichtbar gemacht werden. Der Hauptvorteil dieser Technik gegenüber herkömmlichen Methoden wie D-C-M-R-I bei subkutanen Tumor-Xenotransplantaten besteht darin, dass orthotope Pankreastumormodelle die Beurteilung der primären Tumormikroumgebung ermöglichen, einschließlich der neovaskularisierten Blutversorgung und der Tumorzellinvasion. Das Verfahren wird von Sharon Samuel, Research Associate, und Marie Warren, einer Forschungstechnikerin, beide aus unserem Labor, demonstriert.

Beginnen Sie damit, eine betäubte, acht Wochen alte weibliche Skid-Valve-Seemaus auf ein Heizkissen zu legen, nachdem Sie den entsprechenden Grad der Sedierung durch Zehenkneifen bestätigt haben. Entfernen Sie anschließend die Haare aus dem linken oberen Quadranten des Bauches des Tieres und verabreichen Sie ein schmerzstillendes Medikament mit einer geraden Irisschere in die Haut. Machen Sie einen einen Zentimeter großen Schnitt in der Haut und im Bauchfell und heben Sie die Bauchspeicheldrüse sanft durch den Schnitt an.

Verwenden Sie dann eine 0,5-Milliliter-Insulinspritze, die mit einer 28-Gauge-Nadel ausgestattet ist, um langsam 2,5 Millionen menschliche Bauchspeicheldrüsenkrebszellen in 30 Mikrolitern DMEM in den Schwanz der Bauchspeicheldrüse zu infundieren. Vergewissern Sie sich, dass durch die Lösung ein kleiner Bläschen im Kopf der Bauchspeicheldrüse entsteht. Platzieren Sie dann die Bauchspeicheldrüse vorsichtig wieder in den Bauch und schließen Sie das Bauchfell in der Haut in einer Schicht mit zwei unterbrochenen fünf Null-Prolin-Nähten.

Kontrollieren Sie täglich die Tumorgröße mit zwei Fingern Abtasten des Operationsgebietes. Die Tumore fühlen sich in der Regel dichter und holpriger an als die umliegenden Gewebe und Organe. Überwachen Sie die Tiere auch täglich auf Krankheitsanzeichen.

Wenn der Tumor einen Durchmesser von fünf bis sieben Millimetern erreicht, führen Sie eine scharfe 30-Gauge-Nadel in das eine Ende eines Mikro-Polyethylen-Röhrchens und eine stumpfe 30-Gauge-Nadelspitze in das andere ein. Schließen Sie eine Ein-Milliliter-Spritze mit frisch zubereitetem MRT-Kontrastmittel an die stumpfe Nadelspitze an und drücken Sie den Kolben langsam herunter, um das gesamte Röhrchen zu füllen. Erweitern Sie dann die Schwanzvenen des Tieres unter einer Wärmelampe und greifen Sie mit einer Kelly-Pinzette nach dem Schaft der scharfen 30-Gauge-Nadel.

Führen Sie die Nadel vorsichtig in eine der erweiterten Schwanzvenen ein und kleben Sie sowohl den Schwanz als auch den Schlauch auf ein Stück 10 x 100 Millimeter Kunststoff, um den Schwanz gerade zu halten. Legen Sie dann die Maus in Rückenlage in ein Tierbett, das mit zirkulierendem warmem Wasser ausgestattet ist, um die Körpertemperatur des Tieres während der Bildgebung zu regulieren. Setzen Sie zu diesem Zeitpunkt auch einen rektalen Temperaturfühler ein.

Wenn das Tier in Position ist, bringen Sie ein orthogonal gebogenes Kunststoffbrett in den Bauchbereich an, achten Sie darauf, dass sich der Tumor hinter dem oberen Ende des Brettes befindet, und ziehen Sie dann das Brett etwa zwei Millimeter nach unten, um sicherzustellen, dass der Tumor fest gefangen ist. Kleben Sie das Brett an das Tierbett. Kleben Sie dann einen Schallkopf auf den Brustbereich, um die Atmung des Tieres während der Bildgebung zu überwachen. Legen Sie nun die Oberflächenspirale auf die Oberseite der Tumorregion und kleben Sie sie sicher an das Tierbett.

Schieben Sie dann das Tierbett in den MRT-Scanner, bis sich die Tumorregion in der Mitte der Volumenspule befindet. Wenden Sie eine gewichtete MRT von T an, um den Tumor zu lokalisieren, gefolgt von einer gewichteten MRT von T 1 mit verschiedenen Flip-Winkeln für die Kartierung von T eins. Wenden Sie dann für die D-C-E-M-R-I-Bildgebung kontinuierlich eine T-1-gewichtete MRT mit einem festen Flip-Winkel vor, während und nach der Injektion des Gadolinium-basierten MRT-Kontrasts an.

Überwachen Sie die Atmung und Körpertemperatur des Tieres während der Bildgebung am Ende der Bildgebung kontinuierlich, entfernen Sie die Nadel und andere Sonden und legen Sie das Tier unter eine Wärmelampe, während Sie den unteren Bauchbereich sanft massieren. Bis das Tier quantitativ aufwacht. D-C-E-M-R-I kann erfolgreich für orthotope Xenotransplantate von Pankreastumoren eingesetzt werden.

Anhand des Referenzregionenmodells zeigen diese Kontrastkarten beispielsweise die Tumorregion in der Farbskala eine Minute vor der Injektion des MRT. Kontrastmittel. Und nach fünf und 40 Minuten überlappend mit T zwei Gewichts-MRT-Bilder in Graustufen. Die Maus in diesem Experiment trug ein orthotopes Xenotransplantat eines humanen Pankreastumors.

Diese Kontrastmittelverstärkungskurven wurden aus der Tumorregion und der paravertebralen Muskelregion gemittelt. Diese kts- und KEP-Karten für den Tumor zeigen die Einwasch- und Auswaschrate des Mr.Kontrastmittels. Bei diesem TCMI-Verfahren ist es wichtig, sicherzustellen, dass sich der Tumor hinter dem oberen Ende der Platine befindet.