Name: Kontinuierliche intravenöse Infusion ist die Wahl Behandlung Weg für Arginin-Vasopressin-Rezeptorblocker Conivaptan bei Mäusen Stroke-evozierte Hirnödem zu studieren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 44 s
Description: Erfahren Sie, wie Sie Conivaptan durch kontinuierliche intravenöse Infusion bei Mäusen verabreichen, um schlaganfallbedingtes Hirnödem zu reduzieren. Diese Methode optimiert die Wirkstoffzufuhr für präklinische Schlaganfallforschung.

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Wir danken Swedish Medical Center für die Finanzierung und Einrichtungen. Wir danken auch Craig-Krankenhaus für die großzügige Verwendung von Laborfläche.

Die Experimente wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien der National Institutes of Health für die Pflege und Verwendung von Tieren in der Forschung und wurden von der schwedischen Medical Center Animal Care und Use Committee genehmigt durchgeführt. Alle Verfahren wurden mit geeigneten aseptischen Bedingungen durchgeführt. Versuchstiere für die Studie verwendet wurden, männlich, 3 Monate alt, Wildtyp-C57-Mäuse mit einem Körpergewicht von 25 bis 27 g. 1. In - vivo - Stroke Induction <ol><li> Pre-Mantel der Glühfaden mit Dental Harz vor der Operation. <ol><li> Schneiden Sie ein 12 mm langes Stück Faden aus einer 7-0 Nylonnaht. Mix 2 Teile des Harzes mit 1 Teil des Härtungsmittels und dann tauchen unmittelbar um die Spitze des Filaments in die Mischung etwa 1/3 der gesamten Länge abdeckt. Entfernen Sie es schnell und stellen Sie sicher, dass es mit einem glattflächigen Mantel von Dentalharz bedeckt ist. </li><li> Luft trocknen das Filament 2 Stunden vor dem Gebrauch. </li></ol></li><li> Platzieren Sie die Maus in einen Anästhesie Induktionskammer (2 l Volumen), und den Fluss von 1,5% Isofluran in 25% Sauerstoff angereicherte Raumluft eingestellt auf 2 l / min in die Kammer gehen. </li><li> Lassen Sie die Maus in die Induktionskammer zu bleiben , bis sie vollständig anästhesiert, 8 , wie durch Fehlen einer Antwort auf tail pinch bestimmt. </li><li> Platzieren Sie die Maus auf den OP-Tisch mit einem Heizkissen, und stellen Sie die Isofluran-Konzentration auf 1% für die Aufrechterhaltung der Anästhesie spontan durch die Nase Kegel geliefert. </li><li> Clip Haar auf der Vorder- und der Rückseite des Halses, und sprühen Sie den Hals mit Alkohol. Bewerben Veterinäraugensalbe auf beiden Augen. </li><li> Um kontinuierlich die Körpertemperatur zu überwachen, verwenden Sie eine Sonde Rektaltemperatur mit Digitalanzeige während der Operation. </li><li> Platzieren Sie die Maus in Rückenlage, gelten Povidonjod 10% Waschlösung zur Desinfektion, Deckel mit einem sterilen Tuch, und dann einen Mittelschnitt machen entlang des Halses mit einer Größe 10 chirurgische Skalpell. </li> &lt;li&gt; vorübergehend die linke Arteria carotis communis (CCA) mit 6,0 Seidennaht abzubinden. </li><li> Legen Sie eine andere Bindung auf der linken Arteria carotis externa (ECA). </li><li> Legen Sie eine mikrovaskuläre Clip auf der A. carotis interna (ICA). </li><li> Schneiden Sie ein kleines Loch an der A. carotis externa mit mikrovaskulären Schere. Setzen Sie einen Faden 7-0 Nylonnaht beschichtet mit Dentalharz in die Öffnung in der ECA gemacht, und es kranial vorrücken, während der Clip zu entfernen, bis ein Widerstand (etwa 5-7 mm von der Gabelung des CCA) zu spüren ist. </li><li> Legen Sie eine temporäre Bindung an die A. carotis interna des Filaments in Position zu sichern. Siehe Diagramm 1A. Schließen die Haut mit Seidennaht und infiltrieren die Wunde auf der Vorderseite des Halses mit 0,2 ml 0,5% Bupivacain, wie in Schritt 2.6. </li><li> Lassen Sie die Maus aus der Narkose und wieder das Bewusstsein in einer Erholungsraum für 60 min zu wecken. Nicht das Tier unbeaufsichtigt lassen, bis er wiedergewonnen hatausreichend Bewusstsein sternal recumbence zu halten. </li><li> Testen Sie die Maus für die neurologische Defizit Scoring (NDS) wie folgt: 0 = normale motorische Funktion, 1 = Beugung des Rumpfes und der kontralateralen forelimb auf Hubladebühne, 2 = auf der Gegenseite kreisen aber normale Haltung in Ruhe, 3 = stützte sich auf Kontralaterale Seite in Ruhe, 4 = keine spontane motorische Aktivität. 4,9 <ol><li> Für die NDS-Tests, heben Maus am Schwanz und auf einer ebenen Fläche für die Beobachtung (2-3 min). Alternativ beobachten Mäuse in der Rückgewinnungskammer. Ausschließen Mäuse, die NDS unter 2 aus dem Experiment aufgrund unzureichender Verschluss der MCA aufweisen. Hinweis: Laser - Doppler - Flowmetrie Technik verwendet werden kann , MCA - Okklusion zu bestätigen 11.09. </li></ol></li><li> Re-betäuben das Tier nach 60 Minuten der Erholung in der Kammer Induktion, wie oben beschrieben, resterilisieren die vorherige Hautschnitt mit 10% Povidon-Iod-Peeling-Lösung, und öffnen Sie die Operationswunde auf derVorderseite des Halses durch Schneiden und Entfernen der Seidennaht. </li><li> den Faden aus der ECA die folgenden Schritte zu entfernen: <ol><li> Legen Sie eine mikrovaskuläre Clip auf der ICA. Lösen Sie die Naht auf der ICA und ziehen Sie den Faden, während Klammer offen zu halten. </li><li> Schließen Sie den Clip und legen Sie eine Bindung an die ECA proximal zu dem Schnitt. </li><li> Entfernen Sie den Clip und aus der CCA die Ligatur den Blutfluss zum Gehirn wieder herzustellen. Siehe Diagramm 1B. </li></ol></li></ol> 2. Installation von IV-Katheter in die Jugularvene für die kontinuierliche 48 h Behandlung Hinweis: Gehen Sie zur Installation des Katheters unmittelbar nach dem Schritt 1.16.3 ohne Erwachen der Maus. <ol><li> Verwenden Sie zwei verschiedene Größen von flexiblen Schlauch: Legen Sie die innere Schlauch (0,94 mm Außendurchmesser, um das Medikament zu enthalten wird infundiert) in den äußeren Schlauch (3,18 mm Außendurchmesser, für den Schutz des Innendurchmesser). </li><li> Pein 1 cm langer Schnitt auf der Rückseite des Halses mit einer Größe 10 chirurgische Skalpell Spitze die Maus in die Bauchlage, gelten für die Desinfektion 10% PVP-Jod-Peeling-Lösung und machen. Drehen Sie die Maus in die Rückenlage, resterilisieren die Vorderseite des Halses mit 10% Povidon-Iod-Peeling-Lösung, und öffnen Sie die Operationswunde auf der Vorderseite des Halses. Tunnel der Schlauch unter der Haut von dem Einschnitt auf der Rückseite auf die Vorderseite des Halses gemacht und exteriorisieren es aus der offenen Wunde 1 cm. </li><li> Entfernen subkutane Fettgewebe von der linken Seite der Vorderseite des Halses etwa 1 cm seitlich von der Mittellinie. Suchen Sie die Halsvene links, indem Sie zwei Bindungen entlang der Vene 5 mm voneinander entfernt, und leicht in die Vene zu strecken. Machen Sie ein kleines Loch an der Halsvene zwischen den beiden Verbindungen mit mikrovaskulären Schere; Legen Sie die Spitze der inneren Röhre 5 mm tief kaudal (zum Herzen hin). </li><li> Befestigen Sie den Schlauch mit beiden Bindungen an die Halsvene. Schließen die Haut an der Vorderseite des Halses mitein 3-0 Seidennaht. Siehe Diagramm 1C. </li><li> Befestigen Sie den Schlauch auf die Haut auf der Rückseite des Halses mit einer Naht, und verbinden Sie den Schlauch auf eine Mikroinfusions IV-Pumpe durch ein Drehgelenk. Der Schwenk ermöglicht die freie Bewegung von Mäusen innerhalb des Käfigs mit vollen Zugriff auf die Nahrung und Wasser. </li><li> Infiltrieren die Hauteinschnitte auf der Vorderseite und der Rückseite des Halses mit 0,2 ml 0,5% Bupivacain postoperative Schmerzen zu verhindern. Hinweis: Je nach institutionellen spezifischen Tier Protokolle, Tiere mit Opioiden behandelt werden können, NSAIDs oder Antibiotika prä- und postoperativ. Allerdings erwähnten Behandlungen können die Ergebnisse des ischämischen Schlaganfalls Ergebnis ändern (siehe Diskussion Sektion). 11-14 </li><li> Lassen Sie das Tier in der Rückgewinnungskammer zu wecken, und Haus dann das Tier in einem separaten Käfig bis zum Endpunkt des Experiments. Lassen Sie das Tier unbeaufsichtigt, bis es genügend Bewusstsein zu halten sternal wiedergewonnen hatrecumbence. </li><li> Stellen Sie die Infusionsrate für die kontinuierliche 48 h IV Behandlung von conivaptan (0,14 mg / ml in 5% Dextrose) oder Vehikel bei 1,5 ml / kg / h, 4 und die Infusion zu starten. Anmerkung: Die Gesamtmenge der IV infundiert Conivaptan sollte etwa 0,2 mg / Maus / Tag in einem Gesamtvolumen von 1,44 ml sein. Hinweis: Führen intraperitoneale (ip) Injektion von Conivaptan zweimal täglich mit Gesamtmenge von 0,2 mg in 1,44 ml 5% Dextrose. Umsetzung IP Injektion wurde wie zuvor beschrieben. 15 Mäusen zurückhalten durch die Haut der Hinterfläche des Körpers und dem Schwanz Greif. Injizieren conivaptan oder Fahrzeug in den linken unteren Quadranten des Abdomens eine 26 G / 1/2 - Zoll - Nadel. 15 </li><li> Beachten Sie die Tiere zweimal pro Tag für die gesamte Dauer des Experiments (48 h). Lassen Sie die Tiere vollen Zugang zu Nahrung und Wasser zu haben. Wenn das Tier Anzeichen von Leiden oder Dyspnoe zeigt einen Tierarzt zu konsultieren. Wenn Euthanasie ist notwendig für das Tier in schweren distverweisen Ress auf den Schritt unter 3,1, und schließen Sie das Tier von der Studie. </li></ol> 3. Bewertung der Stroke-evozierte Hirnödem am Endpunkt <ol><li> Opfere die Maus durch Über anesthetizing mit 5% Isofluran. </li><li> Verwenden Sie ein Skalpell, um einen Hautschnitt über den Schädelknochen machen entlang der Mittellinie und einfahren die Haut den ganzen Schädel über das Gehirn zu belichten. Beginnend am Foramen magnum, schneiden Sie den Schädelknochen seitlich entlang des Umfangs des Gehirns auf jeder Seite, und heben Sie sie vorsichtig, ohne das Gehirn darunter zu berühren. Sever das Gehirn von der Wirbelsäule und die auf der Basis des Schädels befestigt Nerven. </li><li> Entfernen des Gehirns, trennen sie von den Riechkolben und dem Kleinhirn und sezieren das Cerebrum entlang der Interhemisphärenspalt in den ischämischen und nicht-ischämischen zerebralen Hemisphären, wie zuvor beschrieben. 9 </li><li> Beurteilen Hirnödem durch Vergleich wet-zu-Trocken - Verhältnisse (WDR) , wie zuvor beschrieben , 4,9. Wiegen Sie Gewebevor und 3 Tage nach dem in einem Ofen bei 100 ° C für die Trocknung. Berechnen Gehirnwassergehalt (BWC) in% H 2 O = (1-Trockengewicht. / Nassgewicht.) X 100%. </li></ol>

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</ol>

Die Autoren haben nichts zu offenbaren.

Diese Studie hat wichtige Wert für die präklinische Schlaganfallforschung. Diese Studie zeigt, dass eine kontinuierliche intravenöse Infusion von conivaptan (0,2 mg / Tag) nach experimentellem Schlaganfall bei Mäusen effizient Hirnödem nach 48 Stunden der Behandlung reduziert. Die Wirkung der IP-Injektion der gleichen Dosis von Conivaptan auf Hirnödem wurde ebenfalls untersucht. Conivaptan Behandlung sowohl von IV und IP-Routen erzeugt aquaresis in Mäusen, wie durch: 1) Erhöhung der Plasma Osmolalität leicht über physio...

Der Schlaganfall ist nach wie vor eine enorme Belastung für Patienten und Ärzte. Schlaganfallmodelle von Tieren werden seit fast zwei Jahrzehnten im Labor eingesetzt. 1 Dennoch scheitern experimentelle Behandlungen, die bei Tieren funktionieren, beim Menschen oft. 2 Diese Diskrepanz in den Behandlungsergebnissen kann auf verschiedene Faktoren zurückzuführen sein, wie z. B. die Verabreichungswege von Arzneimitteln, die in Tierversuchen verwendet werden, den Arzneimittelstoffwechsel und die Eliminationsrate sowie viele andere Aspekte. Eine der Hauptkomplikationen des Schlaganfalls, das Hirnödem, steht im Mittelpunkt der aktuellen Forschung in den Neurowissenschaften. Zu den Mechanismen der Bildung von Hirnödemen gehören Störungen des Wasser- und Elektrolythaushalts, die durch die Reaktion von Arginin-Vasopressin (AVP) auf ischämische Hirnverletzungen ausgelöst werden. 3 Daher stehen AVP und seine Rezeptoren (V1a und V2) im Mittelpunkt von Forschungsstudien zur Bildung postischämischer Hirnödeme. 3
Wir haben eine Methodik entwickelt, um die Auswirkungen des gemischten Arginin-Vasopressin (V1a und V2)-Rezeptorblockers Conivaptan auf postischämische Hirnödeme bei Mäusen zu untersuchen. 4 Die molekularen Ziele von Conivaptan5 machen das Medikament zu einem geeigneten Kandidaten für die Erforschung seiner Eigenschaften bei der Linderung von Hirnödemen. Darüber hinaus muss Conivaptan im Zusammenhang mit pathophysiologischen Ereignissen des Schlaganfalls untersucht werden. 6 Bei der Konzeption dieser Studie haben wir den Vergleich der Behandlungsergebnisse mit zwei verschiedenen Verabreichungswegen für Conivaptan in Betracht gezogen: intravenös (IV)4 und intraperitoneal (IP). 7 Die Auswirkungen der Behandlungen auf Schlaganfall-induzierte Hirnödeme wurden untersucht. Hier werden detaillierte Protokolle für die chirurgische Einleitung eines experimentellen Schlaganfalls durch Verschluss der mittleren Hirnarterie (MCAO) beschrieben, gefolgt von einer kontinuierlichen Conivaptan-Behandlung unter Anlegen eines jugularen IV-Katheters. Nach Induktion eines Schlaganfalls wurden die Tiere nach dem Zufallsprinzip in die folgenden Gruppen eingeteilt: Vehikel oder Conivaptan (0,2 mg/Tag), die i.v. oder IP erhielten.

<table><tbody><tr><td>Heizkissen</td><td>K& H Manufacturing Inc</td><td>1060</td><td></td></tr><tr><td>Temperaturmonitor mit Rektalsonde</td><td>Physitemp</td><td>7029</td><td></td></tr><tr><td>Seidennahtspule, 6-0</td><td>Surgical Specialties Corporation</td><td>SP114</td><td></td></tr><tr><td>Seidennaht auf einer Nadel, 3-0</td><td>Ethicon</td><td>1684G</td><td></td></tr><tr><td>Nylonnaht, 7-0</td><td>Ethicon</td><td>1696G</td><td></td></tr><tr><td>Dentalharz Polysiloxan mit Härter</td><td>Heraeus Kulzer</td><td>65817930</td><td></td></tr><tr><td>Microinfusion IV Pumpe</td><td>Kent Scietific</td><td>GT0897</td><td></td></tr><tr><td>Swivel 22GA</td><td>Instech</td><td>375/22PS</td><td></td></tr><tr><td>Laborschlauch, 0,94 mm x 0,51 mm</td><td>Dow Corning</td><td>508-002</td><td></td></tr><tr><td>Laborschlauch, 3,18 mm x 1,98 mm</td><td>Dow Corning</td><td>508-009</td><td></td></tr></tbody></table>

kontinuierliche intravenöse infusion ist die wahl behandlung weg für arginin-vasopressin-rezeptorblocker conivaptan bei mäusen stroke-evozierte hirnödem zu studieren

Continuous IV Infusion is the Choice Treatment Route for Arginine-vasopressin Receptor Blocker Conivaptan in Mice to Study Stroke-evoked Brain Edema

Schlaganfall ist eine der Hauptursachen von Morbidität und Mortalität in der Welt. Schlaganfall wird durch Hirnödem und anderen pathophysiologischen Ereignisse kompliziert. Zu den wichtigsten Akteure in der Entwicklung und Evolution von Schlaganfall-evozierte Hirnödem ist das Hormon Arginin-Vasopressin und seine Rezeptoren, V1a und V2. Vor kurzem hat die V1a und V2-Rezeptorblockers Conivaptan Aufmerksamkeit als potentielle Arzneimittelangezogen Hirnödem nach Schlaganfall zu reduzieren. Allerdings Tiermodelle, die conivaptan Anwendungen in der Schlaganfallforschung einbeziehen müssen basierend auf machbar Verabreichungswege geändert werden. Hier werden die Ergebnisse des 48 Stunden kontinuierlicher intravenöser (IV) sind gegenüber intraperitoneal (IP) Conivaptan Behandlungen nach experimentellem Schlaganfall in Mäusen. Wir entwickelten ein Protokoll, in dem mittleren zerebralen Arterienverschluss mit Katheter Einbau in die Jugularvene zur intravenösen Behandlung von Conivaptan (0,2 mg) oder Vehikel kombiniert wurde. Verschiedene Kohorten von Tieren wurden mit 0,2 behandeltmg-Bolus von conivaptan oder Fahrzeug IP täglich. Experimentelle Schlaganfall-evozierte Hirnödem wurde bei Mäusen nach einer kontinuierlichen IV und IP-Behandlungen ausgewertet. Vergleich der Ergebnisse zeigte, dass die kontinuierliche Verabreichung von IV Conivaptan mildert post-ischämische Hirnödem in Mäusen, im Gegensatz zu der IP-Verabreichung von Conivaptan. Wir schließen daraus, dass unser Modell für zukünftige Studien von Conivaptan Anwendungen im Zusammenhang mit Schlaganfall und Hirnödem verwendet werden kann.

Die Körpertemperatur der Tiere wurde im physiologischen Bereich und stabil während des gesamten chirurgischen Eingriffs von Schlaganfall Induktion. Zwei Mäuse, die NDS zeigte weniger als 2 unmittelbar nach MCAO von der Studie ausgeschlossen wurden. MCAO in Mäusen erzeugt bei 48 h in der ipsilateralen Hemisphäre Infarktvolumen. Die Auswertung der TTC-gefärbten Scheiben zeigt , dass etwa 50% der Hemisphäre durch Infarkt nach MCA...

Unsere Studien haben gezeigt, dass die positiven Wirkungen von Conivaptan von der Art der Verabreichung nach einem experimentellen Schlaganfall bei Mäusen abhängen. Wir haben ein Forschungsprotokoll für die Verabreichung des Rezeptorblockers über einen IV-Katheter bei der Bildung von Schlaganfall-evozierten Hirnödemen bei Mäusen entwickelt.

Kontinuierliche intravenöse Infusion ist die Wahl Behandlung Weg für Arginin-Vasopressin-Rezeptorblocker Conivaptan bei Mäusen Stroke-evozierte Hirnödem zu studieren

Stroke is one of the major causes of morbidity and mortality in the world. Stroke is complicated by brain edema and other pathophysiological events. Among ...

Das übergeordnete Ziel dieser präklinischen Studie besteht darin, ein erfolgreiches Mausmodell zur Verabreichung von Conivaptan nach Schlaganfall zu erstellen, um die Planung zukünftiger Forschungsstudien im Schlaganfallbereich zu verbessern. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen der Schlaganfallforschung zu beantworten, beispielsweise welche Bedeutung der Verabreichungsweg für die positiven Wirkungen von Conivaptan auf die Schlaganfallrehabilitation bei Mäusen hat. Der Hauptvorteil dieser Technik liegt darin, dass sie Forschern bei der Modellierung von Studien zu Conivaptan und dessen Wirkungen auf schlaganfallbedingtes Hirnödem unterstützen wird.Mindestens zwei Stunden vor der Operation ein 12 mm langes Filamentstück aus einer 7-0-Nylonnaht abschneiden, anschließend zwei Teile Zahnharz mit einem Teil Härter vermischen und das Filament schnell in die Mischung eintauchen, bis etwa vier Millimeter des Filaments beschichtet sind. Unmittelbar danach überprüfen, ob die Filamentspitze gleichmäßig mit Zahnharz bedeckt ist. Anschließend das Filament zwei Stunden lang an der Luft trocknen lassen.Wenn das Harz bereit ist, legen Sie eine anästhesierte Maus auf eine Heizplatte auf dem Operationstisch und überprüfen Sie das Fehlen einer Reaktion auf das Zupinnen der Zehen. Entfernen Sie die Haare am Vorder- und Hinterhals mit einer Schermaschine, besprühen Sie den Hals mit Alkohol und tragen Sie Salbe auf beide Augen auf. Zur kontinuierlichen Überwachung der Körpertemperatur während der Operation verwenden Sie eine rektale Temperatursonde, die mit einer digitalen Anzeige verbunden ist.Legen Sie die Maus in Rückenlage unter ein Stereomikroskop und positionieren Sie gegebenenfalls ein Stück gerollte Gaze unter dem Hals, um diesen zu überstrecken. Desinfizieren Sie anschließend den Hals mit einer 10%igen Povidon-Jod-Lösung. Bedecken Sie das Tier dann mit einem sterilen Tuch und führen Sie mit einer chirurgischen Klinge der Größe 10 einen medianen Hautschnitt entlang des Halses durch.Legen Sie mit einer 6-0-Seidennaht vorübergehend eine Ligatur um die linke Arteria carotis communis und anschließend eine Ligatur um die linke Arteria carotis externa. Setzen Sie eine mikrovaskuläre Klemme an der Arteria carotis interna an und schneiden Sie mit mikrovaskulären Scheren ein kleines Loch in die Arteria carotis externa. Nachdem Sie den mit Dentinharz beschichteten Faden in die Öffnung eingeführt haben, schieben Sie den Faden zephalad vorwärts, während Sie die Klemme entfernen, bis ein Widerstand spürbar ist.Legen Sie eine vorübergehende Ligatur an die Arteria carotis interna, um den Filament in Position zu halten, und verschließen Sie die Haut mit einer Seidennaht. Infiltrieren Sie anschließend die Wunde an der Halsvorderseite mit 0,2 Millimetern 0,5 % Bupivacain und bringen Sie die Maus in eine Erholungskammer mit Überwachung, bis eine sternale Liegeposition aufrechterhalten wird. Zur neurologischen Defizitbewertung heben Sie die Maus am Schwanz an und stellen Sie das Tier für zwei bis drei Minuten auf eine flache Oberfläche.Bewerten Sie das Verhalten des Tieres gemäß dem Text und schließen Sie Mäuse aus, die einen neurologischen Defizit-Score von weniger als zwei aufweisen, da dies auf eine unzureichende Okklusion der Arteria cerebri media hindeutet. Um den Filament zu entfernen, desinfizieren Sie den Einschnitt erneut mit einer 10 %igen Povidon-Jod-Lösung, schneiden und entfernen Sie die Naht, um die chirurgische Wunde erneut zu öffnen. Anschließend platzieren Sie unter einem Operationsmikroskop eine mikrovaskuläre Klemme an der Arteria carotis interna und lösen die Naht der Arteria carotis interna.Halten Sie die Klemme geöffnet, um den Faden herauszuziehen. Schließen Sie die Klemme dann sofort wieder und nähen Sie die externe Karotisarterie proximal zum Schnitt zu. Sobald die Ligatur der externen Karotisarterie sicher ist, entfernen Sie die Klemme und lösen Sie den Faden um die gemeinsame Karotisarterie, um den Blutfluss zum Gehirn wiederherzustellen.Unmittelbar nach dem Entfernen der Naht der Arteria carotis communis desinfizieren Sie den Nackenrücken mit einer 10 %igen Povidon-Jod-L&ouml;sung und verwenden eine chirurgische Skalpellklinge der Gr&ouml;&szlig;e 10, um einen ein Zentimeter langen Schnitt anzulegen. Danach sterilisieren Sie die Vorderseite des Nackens erneut und &ouml;ffnen die chirurgische Wunde erneut. F&uuml;hren Sie nun ein St&uuml;ck Schlauch mit einem Au&szlig;endurchmesser von 0,94 Millimetern, das in ein St&uuml;ck Schlauch mit einem Au&szlig;endurchmesser von 3,18 Millimetern eingeschoben ist, unter der Haut des Tieres vom hinteren zum vorderen Teil des Nackens hindurch und f&uuml;hren Sie den Schlauch nach au&szlig;en, sobald er die vordere Schnittstelle erreicht.Entfernen Sie das subkutane Fettgewebe auf der linken Seite der Vorderseite des Halses etwa einen Zentimeter seitlich von der Mittellinie. Suchen Sie dann unter dem Operationsmikroskop die linke Vena jugularis und legen Sie zwei Ligaturen im Abstand von fünf Millimetern entlang der Vene an, wobei das Gefäß leicht gedehnt wird. Anschließend machen Sie mit einer mikrovaskulären Schere ein kleines Loch in die Vena jugularis zwischen den beiden Ligaturen und führen die Spitze des inneren Schlauchs fünf Millimeter tief kaudal in Richtung Herz ein.Befestigen Sie den Schlauch mit beiden Bindungen an der Vena jugularis und schließen Sie die Haut an der Vorderseite des Halses mit einer 3-0-Seidennaht. Danach befestigen Sie den Schlauch mit einer Naht an der Haut auf der Rückseite des Halses und verbinden Sie den Schlauch über ein Drehgelenk mit einer mikroinfusiven intravenösen Pumpe. Infiltrieren Sie die Hautschnitte an der Vorder- und Rückseite des Halses mit 0,2 Millimetern von 0,5 % Bupivacain, um postoperative Schmerzen zu verhindern, und lassen Sie das Tier unter Überwachung in der Erholungskammer aufwachen.Wenn das Tier in Rückenlage ist, stellen Sie die Infusionsrate für eine kontinuierliche 48-stündige intravenöse Behandlung mit Conivaptan oder Placebo auf 1,5 Millimeter pro Kilogramm pro Stunde ein und beginnen Sie die Infusion. Alternativ verabreichen Sie 0,2 Milligramm Conivaptan und 1,44 Milliliter 5 % Dextrose zweimal täglich über einen Zeitraum von zwei Tagen intraperitoneal, gefolgt von einer kurzen Beobachtung der Tiere nach jeder Injektion. Die Okklusion der mittleren zerebralen Arterie bei Mäusen führt nach 48 Stunden zu einem Infarktvolumen in der ipsilateralen Hemisphäre, wobei ungefähr 50 % der Hemisphäre betroffen sind, wie durch Tetrazoliumchlorid-Färbung sichtbar gemacht werden kann.Die Untersuchung des Gehirnwassergehalts 48 Stunden nach einer 60-minütigen Okklusion der Arteria cerebri media zeigt, dass die intravenöse Gabe von Conivaptan das Hirnödem sowohl in der ipsilateralen als auch in der kontralateralen Hemisphäre signifikant verringert. Im Gegensatz dazu führt eine tägliche intraperitoneale Gabe von Conivaptan in Form eines 0,2-Millimeter-Bolus nicht zu vergleichbaren positiven Effekten auf das schlaganfallbedingte Hirnödem. Sobald die Technik beherrscht ist, kann sie bei korrekter Durchführung innerhalb von zwei Stunden abgeschlossen werden.Bei der Durchführung dieses Verfahrens ist es wichtig, übermäßigen Blutverlust beim Versuchstier zu vermeiden, da dies die Studienergebnisse beeinträchtigen und zu einer erhöhten Mortalität führen kann. Nach diesem Verfahren können weitere Untersuchungen, wie beispielsweise die Beurteilung der Blut-Hirn-Schranke-Störung, durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen zur Beteiligung von Entzündungen an postischämischen Hirnödemen zu beantworten. Nach der Entwicklung ebnete diese Technik den Forschern auf dem Gebiet der Neurowissenschaften den Weg, um die Bedeutung der Applikationsroute von Arzneimitteln für klinische Studien zu untersuchen.Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man ischämische Bedingungen bei Mäusen chirurgisch erzeugt, einen intravenösen Katheter in die Vena jugularis einlegt und Conivaptan mittels kontinuierlicher intravenöser Infusion bei Mäusen verabreicht. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit lebenden Tieren äußerst gefährlich sein kann und dass stets Vorsichtsmaßnahmen wie das Tragen von chirurgischen Handschuhen und Masken getroffen werden sollten, während dieses Verfahren durchgeführt wird.

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Research

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JoVE Journal

Medicine

Medizin

Dieser Artikel zeigt zwei sehr unterschiedliche Methoden der Injektion: 1) in das Gehirn (intracerebroventrikuläre) und 2) systemischen (intravenösen), um die therapeutischen Wirkstoffe in das zentrale Nervensystem von neugeborenen Mäusen einzuführen.

Abgabe therapeutischer Wirkstoffe durch intracerebroventrikuläre (ICV) und intravenöse (IV) Injektion in Mäuse

In diesem Video demonstrieren wir den Zusammenbau eines mikroosmotischen Pumpen-Gehirninfusionssystems, gefolgt von seiner chirurgischen Implantation in den Schädel der Maus. Dieses System ermöglicht die kontinuierliche Verabreichung potenzieller Medikamente und erleichtert die Untersuchung ihrer Auswirkungen auf das Gehirn und das Hirngewebe.

Kontinuierliches Medikamenteninfusionssystem im Mausmodell: Ein chirurgischer Eingriff zur Implantation eines mikroosmotischen Pumpeninfusionssystems in das Gehirn der Maus für eine kontinuierliche Wirkstoffabgabe

Quelle: Zeynalov, E. et. al., Continuous IV Infusion is the Choice Treatment Route for Arginin-Vasopressin Receptor Blocker Conivaptan in Mäusen zur Untersuchung von Schlaganfall-evozierten Hirnödemen. J. Vis. Exp. (2016)Dieses Video zeigt die intravenöse Verabreichung eines Arginin-Vasopressin (AVP)-Rezeptor-Antagonisten in einem Mausmodell. Ein vorübergehender Verschluss der mittleren Hirnarterie führt zu Hirnödemen. Ein AVP-Rezeptor-Antagonist wird über einen Katheter in die linke Halsvene...

Intravenöse Verabreichung von Rezeptorblockern zur Verringerung von Hirnödemen in einem Mausmodell

Wir beschreiben ein Verfahren, um Medikamente mit dem zentralen Nervensystem Ziel entweder durch Einsetzen eines Katheters oder Durchführen einer Bolus-Injektion in die rechte laterale Ventrikel in Mäusen. Wir konzentrieren uns speziell auf den Transport von Antisense-Oligonukleotiden. Diese Technik ist leicht an andere Medikamente und Ratten.

Direkt Intraventrikuläre Abgabe von Arzneimitteln an die Nager Central Nervous System

Vaskuläre Zugänge zur Messung der Hämodynamik, zur Bereitstellung von Flüssigkeiten und zur Durchführung von Blutproben sind wichtig für jede Kleintiermodellstudie. Wir stellen eine Technik zur Implantation von Kathetern in die Halsschlagader und die Vena jugularis communis bei einer anästhesierten Ratte vor, um sie an ein System zur Durchführung von Monitoring, Infusionen und Probenahmen anzuschließen.

Katheterisierung der Halsschlagader und Vena jugularis zur hämodynamischen Maßnahmen im Conscious Rattenmodell durchführen, Infusionen und Blutentnahme

Konvektionsverstärkte Abgabe (CED) ist eine Methode, die eine effektive Abgabe von Therapeutika in das Gehirn durch direkte Perfusion großer Gewebevolumina ermöglicht. Das Verfahren erfordert den Einsatz von Kathetern und ein optimiertes Injektionsverfahren. Dieses Protokoll beschreibt eine Methodik für CED eines Antikörpers in ein Maushirn.

Lieferung von Antikörpern in das Murine Gehirn über Konvektionsverstärkte Lieferung

Eine Methode zur Abgabe neuronaler Stammzellen, anpassungsfähig für Injektionslösungen oder Suspensionen, durch die gemeinsame Halsschlagader (Maus) oder externe Halsschlagader (Ratte) nach ischämischem Schlaganfall wird berichtet. Injizierte Zellen sind breit über das Gehirn Parenchym verteilt und kann bis zu 30 d nach der Geburt nachgewiesen werden.

Intra-arterielle Lieferung von neuronalen Stammzellen an das Ratten- und Maushirn: Anwendung auf zerebrale Ischämie

Die Überwachung des intrakraniellen Drucks in Nagetiermodellen nichttraumatischer intraventrikulärer Blutungen ist in der aktuellen Literatur nicht üblich. Hier demonstrieren wir eine Technik zur Messung des intrakraniellen Drucks, des mittleren arteriellen Drucks und des zerebralen Perfusionsdrucks während intraventrikulärer Blutungen in einem Rattentiermodell.

Intrakranielle Drucküberwachung im nichttraumatischen intraventrikulären Blutungsmodell

Dieses Protokoll bietet ein schrittweises Verfahren zur Durchführung der mehrfachen intravenösen Bolusdosisverabreichung und invasiven hämodynamischen Überwachung bei Mäusen. Forscher können dieses Protokoll für zukünftiges therapeutisches Wirkstoff-Screening auf pulmonalarterielle Hypertonie verwenden.

Multiple intravenöse Bolusdosierung und invasive hämodynamische Beurteilung in einem Hypoxie-induzierten Mausmodell für pulmonalarterielle Hypertonie

Dieses Protokoll beschreibt die konsekutive Implantation einer osmotischen Pumpe zur Induktion eines Bauchaortenaneurysmas durch Angiotensin-II-Freisetzung bei Mäusen mit Apolipoprotein E (ApoE)-Mangel und eines vaskulären Zugangsports mit einem Jugularvenenkatheter zur wiederholten medikamentösen Behandlung. Die Überwachung der Aneurysmaentwicklung durch 3D-Ultraschall wird trotz dorsaler Implantate effektiv durchgeführt.

Medikamentöse Behandlung mittels zentralvenösem Katheter in einem Mausmodell des Angiotensin-II-induzierten Bauchaortenaneurysmas und Überwachung mittels 3D-Ultraschall

Erfahren Sie, wie Sie Conivaptan durch kontinuierliche intravenöse Infusion bei Mäusen verabreichen, um schlaganfallbedingtes Hirnödem zu reduzieren. Diese Methode optimiert die Wirkstoffzufuhr für präklinische Schlaganfallforschung.

Kontinuierliche intravenöse Infusion ist die Wahl Behandlung Weg für Arginin-Vasopressin-Rezeptorblocker Conivaptan bei Mäusen Stroke-evozierte Hirnödem zu studieren (Video) | JoVE Journal

Kontinuierliche intravenöse Infusion ist die Wahl Behandlung Weg für Arginin-Vasopressin-Rezeptorblocker Conivaptan bei Mäusen Stroke-evozierte Hirnödem zu studieren

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