Dissektion der menschlichen Netzhaut und RPE-Aderhaut für Proteomic Analysen

In diesem Video wird veranschaulicht, wie Gewebebiopsien aus der Fovea, der Makula und der peripheren Netzhaut für die Proteomforschung erfasst werden können. In mehreren Schritten verwenden wir ein vier Millimeter großes Hautstanz-Biopsie-Werkzeug. Das menschliche Auge wird in eine Petrischale gelegt, nachdem es mit einem Schmetterling versehen wurde.

Das Stanzbiopsiewerkzeug wird direkt über der Fovea zentriert, nach unten gedrückt und leicht gerollt, bis ein Schnitt um die Fovea herum gemacht wird. Zentrieren und drücken Sie eine acht Millimeter lange Stanzbiopsie in den Arkaden der Makula mit sanftem Druck und Rollen. Auch hier kannst du die Vier-Millimeter-Stanzbiopsie verwenden, um eine Serie oder Stanzungen in der peripheren Netzhaut direkt außerhalb der Spielhalle zu machen.

Wir bekommen zwei Stempel für jede Klappe. Nachdem alle Stanzen gemacht sind, sieht das Auge in etwa so aus. Und wir sind bereit, mit der Gewebeentnahme zu beginnen.

Wir verwenden eine gebogene 0,12-Colibri-Pinzette, um die Ränder des Gewebes zu greifen. Hier fassen wir den Rand der fovealen Netzhaut. Die gleiche Pinzette wird verwendet, um den Ring des Makulagewebes zu greifen.

In diesem Fall scheint es an der Scheibe zu kleben. Mit einer Westcott-Schere können Sie den Rand so abschneiden, dass nur die Netzhaut erfasst wird. Als nächstes wenden wir uns den peripheren Netzhautschlägen zu: Wir verwenden eine Colibri-Pinzette, um sie sanft anzuheben und von der darunter liegenden RPE und Aderhaut zu trennen.

In einigen Fällen kann es zu Resten von Glasgel kommen. Versuchen Sie, die Pinzette zu benutzen und diese abzutrennen, bevor Sie das Gewebe erfassen. Dies ist ein weiteres Exemplar mit viel Glasgel.

Es wird einfach mit der Pinzette von der Trennung abgehoben und dann wird die Netzhaut erfasst. Nach der Entfernung der Netzhaut bleibt die RPE-Aderhaut erhalten. Mit der gleichen Pinzette greifen wir die Ränder dieses pigmentierten Gewebes und trennen es vorsichtig von der Sklera.

Dieses Gewebe stellt die RPE-Aderhaut dar, die der Fovea zugrunde liegt. Hier ist der Ring der zugrundeliegenden RPE-Aderhaut der Makula. Ein zweites Instrument in der linken Hand kann nützlich sein, um das Gewebe zu manipulieren.

Ähnlich wie bei der Netzhaut ist der RPE-Aderhaut-Komplex mit der Bandscheibe verschmolzen und eine Westcott-Schere ist wiederum nützlich, um dieses Gewebe vom Auge zu trennen. Mit 12 Colibri-Pinzetten wird die RPE-Aderhaut im peripheren Stanzbereich abgezogen. Wenn die Stanzbiopsieklinge stumpf war oder Sie nicht stark genug gedrückt haben, kann es sein, dass das Gewebe nicht sauber umgibt.

Ziehen Sie in diesen Fällen das Taschentuch so weit wie möglich weg und verwenden Sie dann eine Westcott-Schere, um es zu kürzen und zu trennen. Die Gewebeproben wurden mit Trypsin verdaut und mittels einer eindimensionalen STS-Seite analysiert, um den Proteingehalt zu visualisieren. Die Ergebnisse dieser Analyse deuteten auf unterschiedliche Proteine in den verschiedenen untersuchten Regionen der Netzhaut hin.

Das Folgeexperiment mit Flüssigchromatographie-Tandem-Massenspektrometrie identifizierte Peptide aus Rhodopsin, einem sehr häufigen und einzigartigen Retina-Protein. In Panel B ist das repräsentative Rhodopsinspektrum aus der Makularegion dargestellt. Eine weitere Analyse des Proteingehalts soll Aufschluss über die molekularen Funktionen der anatomisch unterschiedlichen Regionen der Netzhaut geben.

Die Netzhaut und die RPE-Aderhaut sind komplexe Gewebe, die wichtige regionale Unterschiede in der Proteinexpression und pathologischen Anfälligkeiten aufweisen. Hier wurde die neuartige Methode zur zuverlässigen Entnahme von Gewebeproben aus unterschiedlichen Regionen der Netzhaut für die proteomische Analyse beschrieben. Zu den wichtigen Überlegungen für diese Technik gehören die ordnungsgemäße Handhabung, Behandlung und Lagerung der Proben nach der Entnahme.

Postmortaler Zeitpunkt der Gewebeentnahme unter Berücksichtigung der Verwendung von Stanzbiopsiewerkzeugen unterschiedlicher Hautgrößen, um die Menge und den Grad der regionalen Spezifität des entnommenen Gewebes anzupassen. In Erwägung gezogen wird die Verwendung von visuellen Hilfsmitteln, wie z. B. einem Präparierfernrohr oder einer Lupe, um den Gewebeentnahmeprozess zu unterstützen. Insbesondere bei kleineren Globusgrößen.