טיפול ונקומיצין טעון סולפט סידן ועצמות Autogenous במודל משופר הארנב של זיהום עצם

מודל של בעלי חיים פתלתל חשוב מאוד למחקר זיהום העצם. עם זאת, כיום אין מודל ארנב שעבורו מצב הזיהומים ומספר החיידקים עקבי. מודל הארנב שלנו לזיהום בעצמות משתמש בחיידק עקבי ומטופל על ידי סידן גופרתי טעון ונדקומיצין ושברי אוטוגניים.

ניתן להאריך את הטכניקה לאבחון של זיהום בעצמות וטיפול אי-איחוד בעצמות, ובהבנת הפתוגנזה של זיהום בעצמות. שיטה זו יכולה לספק תובנה על מודלים אחרים של זיהום בעצמות בחולדות, עכברים וחזירים. קשה לטעון את אותו נפח של השעיה חיידקית למח העצם.

הדגמה חזותית יכולה לעזור לחוקרים לבצע את השלבים הקריטיים בקלות ובדייקנות. כדי להכין את ההשעיה חיידקי, הראשון להמיס 0.5 מיליגרם של אבקה S.aureus מיובשים בהקפאה ב 0.3 מיליליטר של מדיום תרבות LB. מערבבים את ההשעיה ביסודיות, ומפוספסים את החיידקים על צלחות אגר סויה טריפטיות עבור הדגירה שלהם במשך 16 שעות ב 37 מעלות צלזיוס.

למחרת בבוקר, לבחור יחידה אחת להרכיב מושבה חיידקית לתרבות בצינורות מרק סויה טריפטי במשך 24 שעות ב 37 מעלות צלזיוס. כאשר החיידקים נמצאים בשלב הצמיחה הלוגאריתמית האמצעית, מעבירים מיליליטר אחד של חיידקים לצינור של 1.5 מיליליטר, ואוסף את החיידקים על ידי צנטריפוגה. לאחר מכן, לשטוף את גלולת התא החיידקי שלוש פעמים ב 100 microliters של PBS לכל לשטוף, resuspending את החיידקים ב 3 מיליליטר של PBS טרי לאחר הכביסה הסופית.

כדי להקים את עובש זיהום העצם, לאשר חוסר תגובה קמצוץ כפות רגליים ב 3 ק"ג זכר ניו זילנד ארנב לבן, ולהשתמש מכונת גילוח חשמלית כדי להסיר את השיער מאזור טיביאלי proximal נגד הכיוון של צמיחת השיער. לחטא את העור החשוף עם פתרון יוד povidone, ולהשתמש בעט וסרגל כדי לסמן את הקצה העליון של השוקה ואת מיקום חור הקידוח עבור הזרקת S.Aureus, דואג כי מיקום חור הקידוח הוא באמצע האופקי של הרמה tibial. לאחר מכן, השתמש באזמל מספר 11 כדי לבצע חתך בעור, ואחריו חתך של סנטימטר אחד בצלף.

באמצעות יחידת קידוח עצם חשמלית, אגרוף חור בקוטר שני מילימטר בשוקה, ולחץ על החור עם קוטר שני מילימטר שני מילימטר ארוך של שעווה בעצמות. הסר כל שעווה עצם חילוף לאורך המישור האופקי של הרמה tibial, ולאשר כי החור מלא שעווה בעצמות. לאחר מכן, השתמש תפרים כירורגיים נספגים לתפור את periosteum ואת העור בתפר מזרן אנכי כדי למנוע את החיה ללעוס את התפרים.

ולהשתמש מזרק אלח דם מיליליטר אחד לאט להזריק פעם אחת 10 לשמונה יחידות יוצרות מושבה למיליליטר של פתרון S.Aureus לתוך חור הקידוח. ביום השביעי, 14, 21 ו -28 לאחר ההזרקה, מניחים את הארנבים הנגועים לתוך מרסן ארנב עם הראש והאוזן מחוץ לרסן, ולאסוף דגימות דם מן כלי הרכב עבור תאי דם לבנים וניתוח חלבון תגובתי C. לאחר הרדמה, להשתמש באזמל מספר 11 כדי להפוך את העור tibial סנטימטר חתכים צפי, ולנקות את שעוות העצם.

לאחר מכן, השתמש ביחידת מקדחת עצם חשמלית כדי לחבוט בשני חורים סמוכים בקוטר 4.8 מ"מ כדי לרוקע את העצם הנקרוטית, ולהשתמש בכף עצם כדי לתחקר את מח העצם הנקרוטי ואת רקמת הגרגריון. לאחר מכן, לגרד ולנקות את רקמת העצם בין שני החורים, ולהפיץ מיליליטר אחד של מח העצם debrided על צלחות אגר דם כבשים לדגירה לילה ב 37 מעלות צלזיוס. למחרת בבוקר, בחר לוחות עם 30 עד 300 מושבות, וחשב את מספר היחידות יוצרות המושבה לכל חיה נגועה.

ביום ה -28 לאחר ההדבקה, מוסיפים גרם אחד של אבקת הידרוכלוריד vancomycin ל 9.5 גרם של סידן גופרתי ברמה רפואית, ולהשתמש מרית כדי לערבב את התערובת עם שלושה מיליליטר של מלוחים רגילים במשך 30 עד 45 שניות. מוסיפים את המוצר המעורב לתבנית ג'ל סיליקה גמישה, ומאפשרים למוצר להתייבש בטמפרטורת החדר במשך 15 דקות. לאחר מכן, להגמיש את התבנית כדי להסיר את vancomycin טעון סידן גופרתי, או חרוז VCS.

לטיפול אנטיביוטי והשתלה של העצם האוטוגנית, ראשית, לחשוף מחדש את השוקה הפצועה לפני גילוח אזור הזנב, ולחטא את עור הזנב החשוף בתווית יוד povidone. השתמש במספריים כירורגיים כדי לחתוך את הזנב, ולהשתמש תפרים כירורגיים נספגים כדי לסגור את העור בתפר מזרן אנכי כדי למנוע מהחיה ללעוס את התפרים. השתמש באזמל מספר 11 כדי לחתוך את עור הזנב כדי לחשוף את עצם הזנב.

הסר כל שריר, רקמות רכות ו periosteum, ולנתק את עצם הזנב בכל מפרק. מעבירים את שברי העצם לצלחת פלסטיק 100 מילימטר המכילה מלח סטרילי. לאחר מכן, השתמש במספריים מעוקלים כדי להשתיל ארבע חתיכות של חרוז VCS לתוך חלל מח העצם הטיביאלי, ולהשתמש במקלפים מעוגלים כדי למלא את פגם העצם בשמונה חתיכות של שברי עצם הזנב autogenous.

לאחר מכן, לסגור את periosteum ואת החתכים בעור עם תפרים כירורגיים נספגים באופן תפר מזרן. C-תגובתי חלבון ורמות תאי דם לבנים גבוהים יותר בקבוצת מודל זיהום העצם מאשר בבעלי חיים שליטה. שניים, ארבעה, שישה, ושמונה שבועות לאחר VCS או VCS טיפול בעצמות אוטוגניות, חלבון תגובתי C ורמות תאי הדם הלבנים מופחתים באופן משמעותי.

תמונות שחזור דו מימדי מצביעות על עלייה הדרגתית בנפח העצם במהלך 12 השבועות שלאחר הטיפול ב- VCS או VCS ובעצם אוטוגנית, בעוד שאובדן עצם הוא משמעותי בקבוצת מודל זיהום העצם שלא טופלה. כדי לנתח את האינדקסים הכמותיים של התחדשות העצם, ניתן לשחזר תמונות מודל תלת-ממד באמצעות נתוני מפת סיביות, ו ניתן לבחור קוטר אליפטי של 4.8 מילימטר על-ידי אזור מעניין אליפטי באורך 9.6 מילימטר בכל עצם. היחס בין נפח העצם לנפח הרקמות בקבוצת מודל זיהום העצם שלא טופל נמוך משמעותית מאלה שנמדדו בקבוצות ה-VCS וה-VCS.

ציוני המספר והעובי של trabecular בקבוצת העצמות האוטוגניות של VCS גבוהים משמעותית מאלה במודל זיהום העצם הבלתי מטופל ובעלי החיים ב- VCS. יתר על כן, ציוני ההפרדה הטרביקיו בקבוצת העצמות האוטוגניות של VCS נמוכים משמעותית מאלה שנמדדו במודל זיהום העצם הלא מטופל ובקבוצות VCS. יש לדאוג לבחור ארנבים עם משקל גוף מתאים.

לחסום את פתרון סטפילוקוקוס אוראוס עם שעווה בעצמות. לשבור את העצם הנקרוטית לחלוטין, ולחבוט שני חורים סמוכים בקוטר 4.8 מילימטר. בעקבות ההליך, ניתן לבצע שיטת אבחון אחרת כגון אולטרסאונד, רדיולוגיה וטומוגרפיה ממוחשבת כדי לפקח על התהליכים הפתולוגיים של זיהום העצם ותיקון.

מודל זיהום עצם משופר זה ואת השילוב VCS וטיפול בעצמות autogenous יכול להיות מועיל בחקר מנגנון קו תחתון של זיהום העצם והתחדשות העצם. כמו אבקה מיובשת בהקפאה סטפילוקוקוס aureus מסוכן, ההשעיה חיידקי תמיד צריך להיות מוכן במעבדה חיידקית מבודדת.