Name: Gewinnung menschlicher embryonaler Stammzellen durch Immunosurgery (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-13T00:28:00.000+00:00
Duration: 11 min 56 s
Description: Erfahren Sie die Gewinnung menschlicher embryonaler Stammzellen durch Immunosurgery zur Isolierung der inneren Zellmasse. Diese Methode ermöglicht zuverlässige Ableitungen für die Stammzellforschung.

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AEC ist ein Fellow des Jane Coffin Childs Memorial Fund for Medical Research und den Merck Research Laboratories. Wir danken D. Egli und C. Cowan für experimentelle Beratung und Diskussion.

<html> Gefrorene menschlichen Embryonen zu humanen embryonalen Stammzellen (hES) Zellen Ableitung verwendet wurden für die Forschung nach einer ordnungsgemäßen Einwilligung Rahmen von Forschungs-Protokolle, die überprüft und durch das Komitee über die Verwendung von menschlichen Probanden und die Forschung an embryonalen Stammzellen Aufsichtsgremium genehmigt an der Harvard University gespendet . Geschrieben untenstehenden Protokoll basiert auf den veröffentlichten Parametern von Cowan et al berichtet wurden. 2004, mit leichten Modifikationen. Embryo Culture Thaw menschlichen Embryonen mit Quinn Advantage Kit auftauen und Kultur in Tropfen von Global-Medium mit 15% Plasmanate bis zur Entwicklung der erweiterten Blastozystenstadium ergänzt. Immunosurgery-basierte Isolierung der inneren Zellmasse Zubereitung: <ol><li> Bereiten Platten für die Entfernung der Zona pellucida und immunosurgery (siehe unten) durch die Einrichtung Tropfen jeder Lösung in 10cm-Platten. Overlay mit Mineralöl, um Verdunstung zu verhindern. Bereiten Sie eine einzelne Zeile pro Embryo für die Ableitung bestimmt. <ul><li> EmbryoMax Saure Tyrodes, verwenden Sie wie es ist. </li><li> hES-Zell-Ableitung Medien: 75% KO-DMEM, 10% KO-Serum Replacement, 10% Plasmanate, 2,5% ES-Zellen getestet fötales Rinderserum (FBS), 2mM Glutamax-I, 1% nicht-essentiellen Aminosäuren, 50 Einheiten / ml Penicillin, 50μg/ml Streptomycin, 0,055 b-Mercaptoethanol, 5ng/ml bFGF. </li><li> Kaninchen Anti-Human-roten Blutkörperchen primärer Antikörper, rekonstituiert nach Herstellerangaben Vorschlag, bei 1:10 mit hES-Zell-Ableitung Medien verdünnt. </li><li> Meerschweinchen-Komplement-Serum, rekonstituiert nach Herstellerangaben Vorschlag, bei 1:10 mit hES-Zell-Ableitung Medien verdünnt. <img src="/files/ftp_upload/old/574_2008_9_18_6/574_Figure-01.png" alt="574_Figure-01" width="600" height="166" /> </li></ul></li><li> Äquilibrieren alle Platten bis 37 ° C in Gewebekultur-Inkubator vor dem Gebrauch. </li><li> Ziehen Sie 50 ul-100 &amp;mgr; Kapillarpipetten (VWR) für den Einsatz bei der Übertragung von Embryonen. Cut endet mit Diamant-Stift und den Einsatz mit dem Mund pipettieren Schlauch mit einem 0,2 um-Filter ausgestattet. </li></ol> Immunosurgery Vorgehen: Notes: <ul><li> In diesem Verfahren werden die Zellen des Trophektoderm durch kurze Exposition gegenüber Antikörpern gegen menschliche Zellen in Tandem mit Komplement-Aktivität gerichtet zerstört. Deshalb arbeitet Protokoll am besten mit qualitativ hochwertigen Embryonen mit intakter Trophektoderm, da nur die strukturelle Integrität der Blastozyste verhindert, dass die ICM aus auch anfällig für die immunologische Reaktion. </li><li> Alle Verfahren unter Verwendung einer Dissektion Umfang mit beheizten Bühne ausgestattet. </li></ul> Steps: <ol><li> Mund ausspülen Pipette für Embryotransfer mit FBS Embryonen aus Zusammenkleben zu verhindern verwendet werden. </li><li> Transfer von Blastozysten Kulturschale zu hES hält Tropfen AT Gericht. </li><li> Begin Verfahren durch die Übertragung von Blastozysten aus hES Tropfen durch Serie von AT Tropfen. In dritter Tropfen, für die Auflösung der Zona pellucida (in der Regel 5-30 Sekunden) zu beobachten. Achten Sie darauf, nicht zu stark zu behandeln oder Embryo Integrität beeinträchtigt werden kann. <img src="/files/ftp_upload/old/574_2008_7_21_2/574_Figure-02.png" alt="574_Figure-02" width="551" height="273" /> </li><li> Transfer Blastozyste durch Reihe von hES-Zell-Ableitung Medien fallen auf abspülen AT. Preloading Pipette mit Medien wird empfohlen, sofort AT Reaktion zu neutralisieren. Blastozysten können hier abgehalten werden, bis alle AT-verarbeitet wurden. </li><li> Transfer Blastozyste durch Reihe von Primär-Antikörper sinkt, so dass in dritter Tropfen für 30 Minuten Inkubation bei 37 ° C in einer Gewebekultur-Inkubator. </li><li> Transfer Blastozyste durch Reihe von hES-Zell-Ableitung Medien fallen auf abspülen primär. </li><li> Transfer Blastozyste durch Serien von Komplement Tropfen, so dass im dritten Drop für die Lyse von Trophektoderm Zellen zu beobachten. Beachten Sie Blastozyste für die ersten 30 Sekunden auf der Bühne für &quot;sprudelnden&quot; von Trophektoderm Zellen, wie sie zu lysieren. Wenn Lyse innerhalb dieses Zeitrahmens zu beobachten ist, halten Gericht über Mikroskoptisch, um die Reaktion bis zur Fertigstellung zu überwachen. Wenn keine Blasenbildung während der ersten 30 Sekunden beobachtet wird, um Inkubator zurück, Überprüfung alle 5 Minuten, bis die meisten der Trophektoderm hat lysiert. Dies kann 5-15 Minuten. Monitor-Reaktion eng mit Reaktionszeit und mögliche Schäden an der inneren Zellmasse zu minimieren. <img src="/files/ftp_upload/old/574_2008_7_21_3/574_Figure-03.png" alt="574_Figure-03" width="571" height="273" /> </li><li> Transfer Blastozyste durch Reihe von hES-Zell-Ableitung Medien fallen auf abwaschen Komplement-Aktivität. </li><li> Mit Glaspipette mit einem Durchmesser, der geringfügig kleiner als der Blastozyste (gezogen von 10 &amp;mgr; l VWR Kapillaren) ist, zeichnen sich die Blastozyste nach oben und unten abzustreifen meisten der lysierten Trophektoderm. g &quot;alt =&quot; 574_Figure-0 &quot;width =&quot; 577 &quot;height =&quot; 270 &quot;/&gt; </li><li> Platte ICM isolieren auf Feeder-Zellen mitotisch inaktivierten Maus-Embryo-Fibroblasten (MEFs). MEFs sollte der Tag vor der Ableitung vorbereitet werden und wechselte zu hES-Zell-Ableitung Medien Tag. 4-und NUNC Gerichte eignen sich gut für erste Schritte der Ableitung. </li><li> Bitte nicht stören Platte für die ersten 1-2 Tage. Danach täglich überprüfen Auswuchs der embryonalen Stammzellen Kolonien (in der Regel, welche innerhalb von 1-2 Wochen). Die Medien sollten in der Hälfte Bände geändert werden jeden zweiten Tag zu Beginn am Tag 3. </li></ol> ES-Zell-Auswuchs und Passagierung Wenn der hES-Zell-Auswuchs hat ca. 0,5 mm oder mehr erreicht, ist es bereit für die Expansion durch mechanische Kommissionierung. <ol><li> Mechanisch verteilen die Hälfte der Auswuchs und Übertragung auf neue Platten mit frischen Feeder. Embryonale Stammzellen Zellklumpen sollte etwa 30-50 Zellen jeder werden. Lassen Sie andere Hälfte der Auswuchs als Back-up für den ersten Durchgang (p1). Der Auswuchs (p0) können aus verschiedenen Zeiten abgeholt werden, da es sich weiterhin ausbreitet. <img src="/files/ftp_upload/old/574_2008_7_21_5/574_Figure-05.png" alt="574_Figure" width="639" height="219" /> </li><li> Sekundäre Kolonien können in ähnlicher Weise verteilt werden und erweitert in größere Kulturschalen bis Passagen 3-5, zu welchem ​​Zeitpunkt die neuen Zelllinien enzymatische Passagieren mit Trypsin angepasst werden kann. Das Serum-Gehalt der Kulturmedien sollte auch schrittweise auf 1% und 0% werden in diesen ersten Passagen reduziert, um ES-Zell-Differenzierung zu minimieren. </li><li> Alle etablierten embryonalen Stammzelllinien sollte durch Einfrieren unten einen Teil der frühen Passagen für zukünftige Erweiterungen angeschüttet werden. </li><li> Darüber hinaus sollte jeder Zelllinie von Karyotyp-Analyse charakterisiert und validiert werden, indem Pluripotenz und Differenzierung in vitro und in vivo. </li></ol>

<ol><li>Cowan, C. A., Klimanskaya, I., McMahon, J., Atienza, J., Whitmyer, J., Zucker, J. P., Wang, S. P., Morton, C. C., McMahon, A. P., Powers, D., Melton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+embryonic+stem-cell+lines+from+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22N+ENGL+J+MED%22%5BJournal%5D)">Derivation of embryonic stem-cell lines from human blastocysts.</a> N ENGL J MED. 350 (13), 1353-1356 (2004).</li>
</ol>

Die Autoren haben keine Offenlegungen vorzunehmen.

Das Protokoll hier vorgestellten bietet den Forschern eine prägnante, leicht zu folgen Überblick darüber, wie die Ableitung humanen embryonalen Stammzelllinien durch immunosurgical Isolierung der inneren Zellmasse.

<table><tbody><tr><td>Quinn&amp;rsquo;s Advantage Thaw Kit </td><td>Sage</td><td>ART-8016</td><td></td></tr><tr><td>Globales Medium</td><td>Life Global</td><td>GMGB-050</td><td></td></tr><tr><td>Plasmanate</td><td>Talecris</td><td>61325</td><td></td></tr><tr><td>EmbryoMax saurer Tyrode-Lösung</td><td>Chemicon International</td><td>MR-004-D</td><td></td></tr><tr><td>KO-DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>10829-018</td><td></td></tr><tr><td>KO-Serumersatz</td><td>Invitrogen</td><td>10828-028</td><td></td></tr><tr><td>für ES-Zellen getestetes fetalen Kälberserum, definiert</td><td>Hyclone</td><td>SH30070.03</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax-I</td><td>Invitrogen</td><td>35050-079</td><td></td></tr><tr><td>Nicht-essentielle Aminosäuren</td><td>Invitrogen</td><td>11140-076</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Invitrogen</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>rekombinanter humaner basischer Fibroblastenwachstumsfaktor</td><td>Invitrogen</td><td>13256-029</td><td></td></tr><tr><td>Beta-Mercapto&amp;#8211;ethanol </td><td>Invitrogen</td><td>21985-023</td><td></td></tr><tr><td>Kaninchen-Anti-Human-Roten-Blood-Zell-Primärantikörper</td><td>Rockland Immunochemicals</td><td>109-4139</td><td></td></tr><tr><td>Meerschweinchen-Komplementserum</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S-1639</td><td></td></tr><tr><td>Kapillarpipetten in 10 µL, 50 µL, 100 µL Größen</td><td>VWR international</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mundpipetten mit Schlauch</td><td>VWR international</td><td></td><td>wird zusammen mit Kapillarpipetten von VWR geliefert</td></tr><tr><td>0,2 µm Acrodisc Spritzenfilter </td><td>Pall Corporation</td><td>PN4192</td><td></td></tr><tr><td>0,5 % Trypsin-EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>25300-120</td><td></td></tr><tr><td>Zellkulturschalen</td><td>VWR international</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zellkulturschalen</td><td>Nalge Nunc international</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon SMZ1500 Auflichtmikroskop mit wärmegeführter Nikon Tokai Hit ThermoPlate-Aufsatzplatte </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Maus-embryonale Fibroblasten (E12,5)</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

gewinnung menschlicher embryonaler stammzellen durch immunosurgery

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Die Fähigkeit von humanen embryonalen Stammzellen sich selbst zu erneuern und zu differenzieren sich in alle Zelltypen des Körpers lässt vermuten, dass sie großes Versprechen für medizinische Anwendungen und als Recherche-Tool für die Bewältigung grundlegender Fragen in Entwicklung und Krankheit zu halten. Hier bieten wir Ihnen einen kurzen Schritt-für-Schritt-Protokoll für die Gewinnung menschlicher embryonaler Stammzellen aus Embryonen, die durch immunosurgical Isolierung der inneren Zellmasse.

Gewinnung menschlicher embryonaler Stammzellen durch Immunosurgery

Die Fähigkeit menschlicher embryonaler Stammzellen zur Selbsterneuerung und Differenzierung in alle Zelltypen des Körpers lässt darauf schließen, dass sie ein großes Potenzial für sowohl ...

Hallo, mein Name ist Alice Chen. Ich bin Postdoktorandin im Schmelz-Labor und werde Ihnen heute zeigen, wie wir embryonale Stammzellen aus menschlichen Embryonen gewinnen. Wir erhalten Embryonen in verschiedenen Entwicklungsstadien und kultivieren sie in vitro, bis sie das geeignete Stadium des erweiterten Blastozystenstadiums erreicht haben.Dies sind Beispiele dafür, wie sich der Embryo von der ersten, der Einzelzellstufe bis zum frühen Blastozystenstadium und anschließend zur expandierten Blastozyste entwickelt, aus der wir humane embryonale Stammzellen gewinnen. Hochwertige Embryonen, die für die Gewinnung ausgewählt wurden, werden dann durch drei Tropfen ACE-Medien transferiert, wo man sie belässt und auf die Auflösung der Zona pellucida achtet. Der Immunosurgery-Prozess ist ein unspezifischer Prozess, bei dem der Kaninchen-Anti-Human-Antikörper an die äußere Zellschicht bindet.In diesem Fall liegt die Trifecta derm vor. Nach Zugabe von Komplement aus Meerschweinchen-Serum werden alle diese Zellen, an die Antikörper gebunden sind, lysiert. Zunächst sollen drei Platten vorbereitet werden.Die erste Platte dient für ACE-Tyros, die wir verwenden, um das Zita zu entfernen. Die zweite und dritte Platte dienen der Immunochirurgie. Zunächst werde ich die Platte vorbereiten, auf die wir die Säure-Tyros-Tropfen und die Ableitung humaner embryonaler Stammzellen geben werden.Tropfenweise Medien. Bereiten Sie drei Tropfen Säuretyros auf der linken Seite der Platte vor und auf der rechten Seite der Platte drei Tropfen humanen ES-Kulturmediums. Die zweite Platte besteht aus dem primären Antikörper, einem Kaninchen-Anti-Human-RBC.Auch hier wird die linke Seite der Platte dem Primärantikörper zugewiesen, drei Tropfen pro Embryo, und die rechte Seite der Platte wird der humanen ES-Kultur vorbehalten sein. Medientropfen, erneut drei Tropfen pro Embryo für die Komplementplatte. Auch hier werden wir drei Tropfen Komplement auf der linken Seite der Platte platzieren und dann drei Tropfen Kulturmedium für humane ES-Zellen auf der rechten Seite der Platte.Auch hier ist jede Zeile einem Embryo vorbehalten. Alle drei Platten werden mit Mineralöl bedeckt, um Verdunstung zu verhindern, und zur Gleichgewichtseinstellung in den Inkubator gestellt. Dies ist ein Dissektionsmikroskop in einer Werkbank mit laminarer Luftströmung, ähnlich wie bei Zellkulturarbeiten, und hier führen wir den größten Teil unserer menschlichen Embryomanipulationen durch.Als Erstes sollten Sie, bevor Sie mit Ihren Embryonen beginnen, Mundpipetten vorbereiten. Dies ist die übliche Mundpipetten-Schlauchleitung, wobei wir jedoch einen 0,2-Mikrometer-Filter zwischen Ihrem Mund und dem Ende, an dem die Pipette sitzt, eingebaut haben. Dies dient lediglich der Sicherstellung der Sterilität.Ich möchte Ihnen zeigen, wie man Mundpipetten zieht. Ich ziehe gerne eine Vielzahl von Größen. Sie können all diese bei VWR beziehen, und ich ziehe bevorzugt Durchmesser für 10 Mikroliter, 50 Mikroliter und 100 Mikroliter.Jetzt verwende ich eine Diamantnadel, um das Montageröhrchen zu schneiden. Für diesen ersten Schritt benötigen Sie einen relativ großen Durchmesser, da Sie das gesamte Embryo handhaben. Hochwertige Embryonen, die für die Ableitung ausgewählt wurden, werden anschließend durch drei Tropfen übertragen.OF-CI-Straßen, die gerade vom ersten Tropfen zum zweiten Tropfen und dann zum dritten Tropfen führen, an dem Sie sie belassen und das Auflösen der Zap-Palita beobachten. Dieser Vorgang dauert normalerweise weniger als 30 Sekunden, und Sie können tatsächlich sehen, wie sich die Zop-Palita auflöst. Sobald die Zap-Palita vollständig aufgelöst ist.Die Embryonen werden anschließend durch die drei Waschtropfen des menschlichen ES-Kulturmediums überführt, wobei nacheinander der erste, zweite und dritte Waschtropfen durchlaufen wird. Danach wird der Embryo in den Primärantikörper überführt, erneut in Tropfenform, wobei vom ersten zum zweiten und dann zum dritten Tropfen gewechselt wird, in dem er für eine halbe Stunde zur Inkubation im Gewebekultur-Inkubator belassen wird. Die Lyse der Trifecta-Dermis wird offensichtlich, wenn Sie Bläschenbildung an den äußeren Zellen des Embryos beobachten. Dies ist der Beginn der Lyse der Trifecta-Dermiszellen.Wenn die Lyse entlang des gesamten äußeren Randes des Embryos sichtbar ist, ist der Embryo bereit, durch die drei Tropfen Humanus-Kulturmedium gewaschen zu werden. Nach der Immunschirurgie werden die Embryonen mechanisch durch Pipettieren mit einer kleineren Mundpipette dissoziiert. Diese Mundpipette sollte einen geringeren Durchmesser aufweisen als die erste Pipette, um den Vorgang der Dissoziation effizienter zu gestalten, um die lysierte Trifecta abzuschaben.Hautzellen. Am Ende der mechanischen Isolierung verbleibt ein Zellhaufen in der Mitte. Dort befindet sich die intakte innere Zellmasse.Darum herum befinden sich viele lysierte Trifecta-Dermiszellen sowie einige intakte Trifecta-Dermiszellen. Dieses isolierte innere Zellmassenaggregat wird dann in eine Vertiefung gegeben, die mit einer Füttererschicht aus embryonalen Mauszellen vorbereitet wurde. Die Platte mit der Füttererschicht wurde am Vortag vorbereitet, und heute Morgen habe ich das Medium von Mausembryo-Fibroblasten-Medium auf Human-ES-Differenzierungsmedium gewechselt.Die isolierte innere Zellmasse wird anschließend nach der Zugabe des Komplements von den Waschtropfen in diese Vertiefung mit den Fütterungsschichtzellen überführt. Diese Schale wird danach in den Inkubator zurückgestellt und mehrere Tage unberührt gelassen, um die Anheftung der isolierten inneren Zellmasse zu ermöglichen. Dies ist ein Beispiel dafür, wie sich das Auswachsen entwickelt.Wenn das Auswachsen groß genug ist, können wir die erste Passage beginnen, indem wir dieses Auswachsen halbieren. Nun sind seit der ursprünglichen Gewinnung 14 Tage vergangen, und hier sehen Sie ein Beispiel eines Auswachsens aus einer unserer Gewinnungen.Dies ist ein Beispiel für einen solchen Auswuchs, von dem ich heute die Hälfte entnehmen werde. Der Auswuchs wird in zwei Hälften geteilt, anschließend in quadratische Stücke geschnitten, und jedes dieser Stücke wird in eine neue Vertiefung mit Fütterungszellen überführt. Es ist sinnvoll, die Hälfte des Auswuchses unberührt zu lassen, um eine kontinuierliche Zellquelle zu haben, auf die man zurückgreifen kann, um die Zellen zu amplifizieren und alle durchgeführten Passagen abzusichern.Für die ersten zwei bis drei Umpassagierungen ist es ratsam, die Zellen auf diese Weise mechanisch umzupassagieren und sie schließlich an die enzymatische Dissoziation anzupassen, um eine effizientere Aufbereitung zu erreichen. Unser Labor leitet regelmäßig humane embryonale Stammzelllinien ab, um deren Entwicklung und Differenzierung zu nutzen und zu verstehen.Diese Linien werden außerdem weltweit an Stammzellforscher verteilt. Meiner Meinung nach gibt es vier Hauptfaktoren, die den Erfolg der Ableitung beeinflussen. Der erste hängt mit der Qualität des Embryos zusammen, die ebenfalls von dem genetischen Hintergrund, der Qualität des Einfrierens und Auftauens der Embryos sowie von der Qualität der In-vitro-Kultur bis zum Ableitungsstadium im Blastozystenstadium abhängt.Der zweite Faktor ist vermutlich die Qualitätsintegrität der innere Zellmasse nach der Isolierung, was von der zur Isolierung der inneren Zellmasse verwendeten Technik abhängen kann und ebenfalls von Erfahrung und Geschick abhängt. Der dritte Faktor ist, wie gut die isolierte innere Zellmasse an die Futterzellschichten anheftet, und der vierte Faktor ist das Auswachsen dieses ICM-Isolats. Ich denke nicht, dass es technisch ein schwieriger Prozess ist.Es braucht nur etwas Übung. Tatsächlich ist jeder Schritt ziemlich einfach, sodass jeder dies schaffen kann, solange er die Anleitung befolgen kann. Mit etwas Übung denke ich, dass jeder dazu in der Lage ist. Was wir im Labor festgestellt haben, ist, dass jede Linie ein wenig unterschiedlich ist, aus Gründen, die wir nicht vollständig verstehen.Beispielsweise könnten bei der Untersuchung des Differenzierungspotenzials von 10 Linien zwei oder drei dieser Linien eher zu der Zellart heranreifen, die Sie interessiert. Ich vermute, dass diese Unterschiede mit dem Entwicklungsstadium zusammenhängen, in dem die embryonalen Stammzelllinien gewonnen wurden – also mit dem Entwicklungsstadium des Embryos – sowie mit der manuellen Handhabung dieser Zellen. Ich denke, dass sich ihre Eigenschaft manchmal ändert, und die Heterogenität der Zelllinien sowie ihr Potenzial ist etwas, woran jeder Stammzellforscher denken muss.Auch hier weiß ich nicht, was dies verursacht, aber sicherlich als Beispiel für meine Forschung ist unser Ziel letztendlich, insulinproduzierende Beta-Zellen der Bauchspeicheldrüse herzustellen. Der erste Schritt zur Herstellung dieser Zelllinie besteht darin, Endoderm aus embryonalen Stammzellen zu erzeugen, und bei einem Vergleich über 10 bis 20 Linien hinweg stellten wir fest, dass eine oder zwei dieser Linien effizient Endoderm bilden können, während etwa die Hälfte möglicherweise weniger effizient Endoderm erzeugen kann und einige überhaupt kaum Endoderm bilden können. Durch diesen initialen Screening-Prozess selektieren wir daher Zellen mit einer höheren Neigung, den gewünschten Zelltyp zu bilden, und verfolgen die anschließende Differenzierung mit diesen Zelltypen weiter.Die erste Gewinnung menschlicher embryonaler Stammzellen wurde 1998 von Thomson et al. beschrieben, und im Jahr 2004 berichtete unser Labor über die Gewinnung von 17 neuen menschlichen embryonalen Stammzelllinien. Durch Modifikation dieser publizierten Protokolle, die eigentlich nur darauf abzielten, den Ableitungsprozess effizienter zu gestalten, wurden Anpassungen in der Medienzusammensetzung, der Passagierung der Zellen sowie in der Einfrier- und Auftaumethode vorgenommen.Seitdem suchen wir bei jeder Ableitung nach neuen Möglichkeiten, den Protokollablauf und die Ableitungsrate zu verbessern. Beispielsweise untersucht unser Labor alternative Methoden zur Isolierung der inneren Zellmasse, bei denen keine Xenoreagenzien wie das Kaninchenantikörper oder das Meerschweinchen-Serokomplement verwendet werden, sondern die innere Zellmasse mechanisch präpariert wird. Wir hoffen, dass diese Methoden zu mindestens vergleichbaren, wenn nicht sogar besseren Verfahren zur Isolierung der inneren Zellmasse führen werden.

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Forschung

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Biologie

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