Schnelle In-Vivo Beurteilung des Adjuvans der zytotoxischen T-Lymphozyten Generation Fähigkeiten für die Impfstoffentwicklung

Das übergeordnete Ziel dieses Experiments ist es, die Fähigkeit von Adjuvantien von Interesse zur Erzeugung zytotoxischer T-Lymphozyten zu bestimmen, indem adoptiv übertragene CFSE-gefärbte OT1 CD8-positive T-Zellproliferation in den drainierenden Lymphknoten und Milz immunisierter Empfängertiere überwacht wird. Diese Methode kann dazu beitragen, Schlüsselfragen im Bereich der Vakzinologie zu beantworten, wie z.B. die Wirksamkeit eines Adjuvans, um eine zytotoxische Zellantwort zu erzeugen. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass Sie nicht nur die CTL-Kapazität eines Adjuvans bestimmen können, sondern auch, ob es sich um ein lokales oder systemisches Adjuvans handelt, und zwar in nur vier Tagen.

Das Verfahren wird von einer Technikerin in unserem Labor, Elena Reinhard, demonstriert. Um 1.1-positive CD8-positive T-Zellen aus OT1-Mäusen zu isolieren, ernten Sie zunächst die Milz und die Leisten-, Achsel- und Gebärmutterhalslymphknoten gemäß Standardprotokollen, indem Sie alle Organe in ein 100-Mikrometer-Porennetzsieb in einer 60-Millimeter-Petrischale geben, die drei bis fünf Milliliter vollständiges Medium pro Maus auf Eis enthält, während sie entnommen werden. Entnehmen Sie nicht in großen OT1-Milzen oder Lymphknoten, da die T-Zellen aus diesen Lymphgeweben leukämisch sein können und sich auch ohne Stimulation vermehren, was die Testergebnisse verfälscht.