Name: Murine oropharyngealen Aspiration Modell der Ventilator-assoziierten und nosokomiale Bakterielle Pneumonie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 32 s
Description: Lernen Sie das murine oropharyngeale Aspirationmodell zur Untersuchung von beatmungsassoziierter Pneumonie. Diese Methode ermöglicht die schnelle und reproduzierbare Replikation klinischer Infektionen zur Entwicklung neuer Therapien.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Diese Arbeit wurde durch das National Institute of Allergy and Infectious Diseases in der National Institutes of Health [Grant Zahlen R01 AI117211, R01 AI130060 R21 AI127954 und R42 AI106375 BS] und US Food and Drug Administration [Vertrag unterstützt. HHSF223201710199C, BML].

Alle Verfahren, bei denen Tiere müssen von der Forscher institutionelle Animal Care und Nutzung Committee (IACUC) genehmigt werden.
1. Vorbereitung der bakterielle Inokulum
<ol><li>Bakterienkolonien zu isolieren.<ol>
<li>Streifen ein Bakterienstamm (z. B. A. Baumannii "HUMC1") auf geeigneten sterilen Agar Medium (z. B.Tryptic Soy Agar), wobei Sie darauf achten, isolierte Kolonien zu generieren.</li>
		<li>Inkubieren Sie zu angemessenen Bedingungen (z. B.über Nacht bei 37 ° C).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Wachsen Sie über Nacht Kultur.<ol>
<li>Wählen Sie einen Vertreter, isolierten Kolonie von der Agarplatte mit einer sterilen Impfkeimen Schleife und es 10 mL geeigneten sterilen Brühe Medium (z.B. Tryptic Soja Brühe) zu impfen.</li>
		<li>Lassen Sie die Probe, die stationäre Phase zu angemessenen Bedingungen (z.B., 37 ° C mit schütteln bei 200 u/min über Nacht in eine belüftete Kappe, 50 mL konische Ampulle) zu erreichen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Wachsen der Subkultur.<ol>
<li>10 mL frische sterile Brühe mit einer Pipette übermitteln Sie 100 μL der Nacht Kultur.</li>
		<li>Erlauben Sie, um exponentielle/Log-Phase bei den richtigen Bedingungen (z.B., 37 ° C mit schütteln bei 200 u/min für 3 h in einer entlüftet-Cap, 50 mL konische Phiole) zu erreichen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Waschen der Subkultur.<ol>
<li>Entfernen Sie die Subkultur aus seiner Inkubation Umgebung.</li>
		<li>Zentrifugieren Sie bei 4.000 × g für 5 min um die Bakterien zu Pellets.</li>
		<li>Aspirieren und den überstand verwerfen.</li>
		<li>Pellet und Strudel kräftig bis voll Nukleinsäuretablette fügen Sie 10 mL sterile Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (PBS hinzu).</li>
		<li>Wiederholen Sie die Schritte 1.4.2 - 1.4.4 zweimal, für eine Gesamtmenge von 3 wäscht.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Passen Sie die Konzentration der Bakteriensuspension.<ol>
<li>Mit einem Spektralphotometer, die Maßnahmen der Extinktion bei 600 nm (OD600), Messung die optische Dichte der Bakteriensuspension.</li>
		<li>Hinzufügen, sterile PBS die Bakteriensuspension bis die optische Dichte des Inokulums sinkt auf ein OD600 von 0,5, unter Verwendung der Gleichung Cich× Vich = Cf× Vf, wo "C" Konzentration, "V" ist, "ich" ist initial, und "f" ist endgültig. * Cf sollte immer 0,5; Vf ist die Variable zu lösen.</li>
		<li>Wenn die Bakteriensuspension eines OD600 von 0,5 unterschreitet, Zentrifugieren Sie es 4.000 × g für 5 min pellet-die Bakterien zu entfernen einen angemessenen Betrag des Überstands ein OD600 von 0,5 erreichen.</li>
		<li>Führen Sie serielle Verdünnungen in sterilen PBS (z.B. drei Verdünnungen von 1: 100, 1 × 10-6zu erreichen) und Platte auf sterile Agar der Korrelationskoeffizient bestimmen, die offenbart die Bakterienkonzentration in koloniebildenden Einheiten pro mL (KBE/mL) bei einer OD600 von 0,5. Hinweis: Der Wert dieser Korrelationskoeffizient für jede Belastung der einzelnen Arten variiert und vor Inokulum Vorbereitung für eine Infektion festzustellen.</li>
		<li>Verwenden Sie nach der Bestimmung der Korrelationskoeffizient, um erstellen Sie ein Inokulum die gewünschte Konzentration (z.B. 2 × 108- 1 × 109 KBE/mL); Wenn das gewünschte Inokulum OD600 von 0,5 übersteigt, Zentrifugieren der Bakteriensuspension bei 4.000 × g für 5 min pellet-die Bakterien zu entfernen, einen angemessenen Betrag des Überstands um die gewünschte Konzentration zu erreichen.</li>
		<li>Führen Sie in Vivo Pilotstudien um die Virulenz von jede bakterielle Isolat in jedem Stamm der Maus zu bestimmen, da diese Werte zwischen bakterielle Isolate der gleichen Spezies und Mäuse verschiedene genetische Hintergründe variieren. Für verschiedene Gram-negative ist das LD100 bei Mäusen in der Regel 1 bis 5 × 108 KBE/Maus, obwohl bestimmte Stämme am unteren Impfkulturen tödlich sind.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Frieren Sie identische Aliquote für eine spätere Verwendung als auf Abruf, präzise Impfkulturen als zuvor veröffentlichten8 (optional).<ol>
<li>Bereiten Sie 1 L bakterielle Inokulum als oben beschrieben, Übertragung auf zwei konischen 500-mL-Fläschchen und Zentrifuge bei 4.000 × g für 5 min.</li>
		<li>Verwerfen Sie 450 mL des Überstands von konischen jede und Aufschwemmen Sie der Pellets von Bakterien im restlichen überstand.</li>
		<li>Übertragen Sie das konzentrierte bakterielle Inokulum auf eine 250 mL-Becherglas mit einer magnetischen Stir Bar und kontinuierlich auf einer Platte rühren bei 300 u/min mischen.</li>
		<li>Übertragen Sie sorgfältig genau 600 μL der konzentrierten bakterielle Inokulum (z.B.1 x 1010 KBE/mL) mit einer Pipette zu einem kryogenen 1,6 mL-Fläschchen mit genau 300 μL der sterilen H2O und 300 μL der sterilen Glycerin; mischen und speichern bei-80 ° C. Hinweis: Notwendig für die Lagerung Glycerin kann verwirren die experimentellen Ergebnisse und Übersterblichkeit verursachen, so es notwendig ist, es zu waschen.</li>
		<li>Wenn Sie bereit sind für den Einsatz, tauen Sie die Probe für 10 min bei Raumtemperatur auf.</li>
		<li>Übertragen Sie 1 mL zu einem konischen 50-mL-Fläschchen zu, fügen Sie 9 mL sterile PBS und Zentrifuge bei 4.000 × g für 5 min um die Bakterien zu Pellets. Den überstand abgesaugt und erneut die vorgegebene Anzahl der KBE (1 mL × eingefroren Lager Konzentration in KBE/mL) in einem entsprechenden Volumen von PBS, die gewünschte Konzentration für das infektiöse Inokulum zu erreichen.</li>
	</ol>
</li>
</ol>(2) betäubende Mäuse
<ol><li>Ketamin/Xylazin Hinweis: Betäubung mit Ketamin/Xylazin hat eine lange Laufzeit, bietet genügend Zeit für den Forscher, die neue an dieser Technik für die Inokulation Vorgang, bevor die Maus erwacht ist.<ol>
<li>10 mL Injektionslösung durch die Kombination von 8,5 mL Pharmaceutifcal Grade PBS, 1 mL 100 mg/mL Ketamin-Stammlösung vorbereiten (Endkonzentration 10 mg/mL), und 20 mg/mL Stammlösung Xylazin 0,5 mL (Endkonzentration 10 mg/mL).</li>
		<li>Verwalten Sie 10 μL/g durch intraperitoneale Injektion der (IP) (z.B. 250 μl für eine 25-g-Maus).</li>
		<li>Die Augen der Mäuse mit Ketamin/Xylazin betäubt, weil ihre Augen anfällig sind für Beschädigungen während längerer Anästhesie zuweisen Sie Augenheilkunde Salbe.</li>
		<li>Platzieren Sie den Mauszeiger in einem Käfig und überwachen Sie, bis es aus der Narkose erwacht. Hinweis: Das Tier sollte nicht unbeaufsichtigt gelassen werden bis es ausreichend Bewusstsein zur Aufrechterhaltung der sternalen liegen wiedererlangt hat.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Isofluran Hinweis: Mäuse aufwachen schnell aus Isofluran induzierte Narkose nach der Entnahme aus der Kammer Induktion diese Methode der Narkose sollte nur verwendet werden, nachdem Sie kompetent bei der Impfung Verfahren geworden.<ol>
<li>Legen Sie die naive Mäuse in eine entsprechend dimensionierte Induktion Kammer mit Sauerstoff fließt.</li>
		<li>Nachdem die Kammer versiegelten geschlossen ist, Betäuben Sie die Mäuse mit eine Präzision Vaporizer Isofluran bei 4 % (V/V) für mindestens 5 min hinzufügen; die Narkose durch eine Maus aus der Induktion Kammer entfernen und Messen, wie lange es dauert, bis aus der Narkose aufwachen zu bestätigen (~ 60 s). Hinweis: Beachten Sie, dass die Anästhesie, die Zeiten variieren basierend auf Richtlinien und einige Tiere erfordern mehr als 5 min bis vollständig betäubt werden.</li>
		<li>Pflegen Sie die Narkose für bis zu 10 min durch eine Anpassung der Isofluran Konzentration auf 2-3 %; Wenn die Gesamtdauer der Narkose ist > 15 min, ophthalmologische Salbe für die Augen der narkotisierten Mäuse gelten.</li>
		<li>Platzieren Sie den Mauszeiger in einem Käfig und überwachen Sie, bis es aus der Narkose, wie in Schritt 2.1 aufwacht.</li>
	</ol>
</li>
</ol>(3) impfen/infizieren Mäuse
<ol><li>Aussetzen einer narkotisierten Maus, durch die oberen Schneidezähne an einer starken, dünnen Schnur (z.B., Zahnseide) hängen an einem festen Gegenstand in einer Höhe ungefähr zweimal die Maus Körperlänge (z.B.20 cm) über der Arbeitsfläche (z. B. gesichert Labortisch).</li>
	<li>Ziehen Sie die Maus Zunge aus seinen Mund mit Pinzette steril, Blunt beendet. Übertragen Sie die Zunge auf eine sterile, behandschuhten Finger gegen versehentliche Zerkleinerung von der Maus Zunge. Halten Sie die Zunge außerhalb der Mündung, den Zugriff auf die Mund-Rachenraum und schlucken des Inokulums zur Seite zu verhindern.</li>
	<li>Halten Sie die Maus Zunge, Platz 50 μL Inokulum (Bakteriensuspension) in den Mund-Rachenraum mit einer Mikropipette; der Mund-Rachenraum befindet sich an der Kreuzung von der Mundhöhle und des Rachens im hinteren Bereich des Mundes. Hinweis: Es ist sehr wichtig, nur Flüssigkeit durch pipettieren, die erste Station auf der Mikropipette liefern. Die Maus stoppt Atem für ein paar Sekunden, wenn das Inokulum im Oropharynx gelegt wird; Schließlich verursacht reflexive streben die Maus, um die Bakteriensuspension, angezeigt durch die markante knisterndes Geräusch von Flüssigkeit in die Lunge, führt zu einer Lungenentzündung Infektion zu inhalieren.</li>
	<li>Wenn das Inokulum nicht weit steht genug, um normale Atmung zu blockieren, die Nasenlöcher mit Zangen zwingen reflexive Absaugen durch Mund und anschließende Einatmen des Inokulums Kneifen zurück.</li>
	<li>Lassen Sie nach der Inokulation die Zunge, entfernen Sie die Maus aus dem String Suspension, legen Sie sie in einen Käfig und überwachen Sie, bis er aus der Narkose, wie in Schritt 2.1 erwacht.</li>
</ol>4. Überwachung der Progression der Erkrankung
Hinweis: Aufgrund von Tierleid, sollte verschiedene Indikatoren verwendet werden um anzuzeigen, wenn Mäuse moribund geworden; Euthanasie sollte nach dieser Bestimmung gemäß einer zuvor genehmigten IACUC Protokoll durchgeführt werden; verschiedene Marker des Moribundity gehören Körpertemperatur, Gewichtsverlust, aussehen, Gang und andere Biomarker, die von Blut (z. B. über iSTAT)9,10,11,12gewonnen werden können, 13,14,15,16.
<ol><li>Einschläfern Sie die Mäuse nach zuvor genehmigten IACUC Protokoll (z.B. CO2 gefolgt von zervikale Dislokation).</li>
	<li>Entfernen Sie die Lunge aus euthanasierten Maus durch Schneiden der Luftröhre, Lungenarterie und Pulmonalvene in der Nähe der Lunge.<ol>
<li>Mikroskopie<ol>
<li>Legen Sie die Lunge (oder Teil) in einer Probe-Form.</li>
			<li>Füllen Sie den Probe-Schimmel mit optimalen schneiden Temperatur (O.C.T.) Verbindung, das Gewebe vollständig untertauchen.</li>
			<li>Einfrieren der Probe bei-80 ° C.</li>
			<li>Senden Sie die Probe an ein Labor Pathologie Abschnitt und montieren auf Folien für die Mikroskopie.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Bakterielle Belastung<ol>
<li>Wiegen Sie das Lungengewebe auf einer Analysenwaage.</li>
			<li>Übertragen Sie das Lungengewebe auf 50 mL konisch Fläschchen mit 2-5 mL sterile PBS (abhängig von der Größe des Gewebes).</li>
			<li>Homogenisieren des Lungengewebes mit einem Gewebe-Homogenisator.</li>
			<li>Führen Sie Verdünnungsreihen Das Homogenat in sterilen PBS, etwa 1.000 KBE/mL, basierend auf erwartete bakterielle Belastung in der Lunge zu erreichen.<ol>
<li>Zum Beispiel wenn 1 × 109 KBE/mg zu erwarten ist, führen Sie drei Verdünnungen von 1: 100: Transfer 100 μL von Homogenat bis 9,9 mL PBS und Wirbel; Dies ist die erste 1: 100 Verdünnung. Übertragen Sie 100 μl der ersten 1: 100 Verdünnung auf 9,9 mL PBS und Wirbel; Dies ist die zweite 1: 100 Verdünnung. Übertragen Sie 100 μl der zweiten 1: 100 Verdünnung auf 9,9 mL PBS und Wirbel; Dies ist die dritte und letzte 1: 100 Verdünnung.</li>
				<li>Wenn bakterielle Belastung in der Lunge nicht bekannt ist, führen Sie eine Reihe von Verdünnungen des erwarteten Bereichs zu erfassen.</li>
			</ol>
</li>
			<li>Platte Dilution(s) auf sterile Agar.<ol>
<li>Sterile Tryptic Soy Bouillon (TSB) mit Agarplatten (TSA) vorbereiten: Mähdrescher 30 g TSB, 15 g Agar, 1 L Wasser, mischen mit einem Magnetrührer und Hitze zum Kochen bringen bei ~ 100 ° C für 5 min. zulassen, um Cool und dann Autoklaven auf flüssigen Zyklus für 15 min. abkühlen lassen ~ 55 ° C, Transfer 10 mL frisch autoklaviert TSA, sterile Petrischalen und auf Raumtemperatur abkühlen lassen. Lassen Sie auf Benchtop für 2-5 d trocken oder unter einen Schrank für 10 min Biosafety aufgedeckt.</li>
				<li>100 μl der Verdünnung auf einer Petrischale mit sterilem TSA übertragen und TSA mit einem Streuer oder Glas Perlen verteilt.</li>
				<li>Speichern der Petrischale über Nacht bei 37 ° C in einem befeuchteten Inkubator (d.h. 37 ° C Inkubator mit einem aufgedeckt 1-L-Becher mit Wasser gefüllt)</li>
			</ol>
</li>
			<li>KBE/mL Lunge Homogenat basierend auf Agar-Beschichtung zu bestimmen (z. B.100 KBE auf TSA Teller mit 100 μL der dritte und letzte Verdünnung, die oben beschriebenen wäre 100 KBE/100 μL × 100Dil #1 × 100Dil #2 × 100Dil #3 = 1 × 109 CFUs/mL).</li>
			<li>Berechnen Sie KBE/mg Lungengewebe durch Division KBE/mL Lunge Homogenat von mg Lunge Gewebe/mL Homogenat (z. B., wenn oben beschriebene Beispiel 100 mg in 5 mL PBS, dann 1 × 109 KBE/mL ÷ 100 mg / 5 mL = 5 × 107 homogenisiert Lungengewebe verwendet basierend CFUs/mg).</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Media Centre, W. H. O. World Health Organization. Fact Sheet - Top 10 Causes of Death. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs310/en/">http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs310/en/</a> (2017).</li>
<li>Spellberg, B., Talbot, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommended+Design+Features+of+Future+Clinical+Trials+of+Antibacterial+Agents+for+Hospital-Acquired+Bacterial+Pneumonia+and+Ventilator-Associated+Bacterial+Pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Recommended Design Features of Future Clinical Trials of Antibacterial Agents for Hospital-Acquired Bacterial Pneumonia and Ventilator-Associated Bacterial Pneumonia.</a> Clinical Infectious Diseases. 51 (S1), S150-S170 (2010).</li>
<li>Kalil, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+Adults+With+Hospital-acquired+and+Ventilator-associated+Pneumonia%3A+2016+Clinical+Practice+Guidelines+by+the+Infectious+Diseases+Society+of+America+and+the+American+Thoracic+Society%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Management of Adults With Hospital-acquired and Ventilator-associated Pneumonia: 2016 Clinical Practice Guidelines by the Infectious Diseases Society of America and the American Thoracic Society.</a> Clinical Infectious Diseases. 63 (5), e61-e111 (2016).</li>
<li>Medina, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+model+of+pneumococcal+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Murine model of pneumococcal pneumonia.</a> Methods in Molecular Biology. , 405-410 (2010).</li>
<li>Azoulay-Dupuis, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+efficacy+of+a+new+fluoroquinolone%2C+sparfloxacin%2C+against+penicillin-susceptible+and+-resistant+and+multiresistant+strains+of+Streptococcus+pneumoniae+in+a+mouse+model+of+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">In vivo efficacy of a new fluoroquinolone, sparfloxacin, against penicillin-susceptible and -resistant and multiresistant strains of Streptococcus pneumoniae in a mouse model of pneumonia.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 36 (12), 2698-2703 (1992).</li>
<li>Mizgerd, J. P., Skerrett, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+human+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Animal models of human pneumonia.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 294 (3), L387-L398 (2008).</li>
<li>Rayamajhi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-surgical+intratracheal+instillation+of+mice+with+analysis+of+lungs+and+lung+draining+lymph+nodes+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Non-surgical intratracheal instillation of mice with analysis of lungs and lung draining lymph nodes by flow cytometry.</a> Journal of Visualized Experiments. (51), (2011).</li>
<li>Nielsen, T. B., Bruhn, K. W., Pantapalangkoor, P., Junus, J. L., Spellberg, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryopreservation+of+virulent+Acinetobacter+baumannii+to+reduce+variability+of+in+vivo+studies%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Cryopreservation of virulent Acinetobacter baumannii to reduce variability of in vivo studies.</a> BMC Microbiology. 15, 252(2015).</li>
<li>Trammell, R. A., Toth, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Markers+for+predicting+death+as+an+outcome+for+mice+used+in+infectious+disease+research%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Markers for predicting death as an outcome for mice used in infectious disease research.</a> Comparative Medicine. 61 (6), 492-498 (2011).</li>
<li>Bast, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+murine+model+of+pneumococcal+pneumonia%3A+use+of+temperature+as+a+measure+of+disease+severity+to+compare+the+efficacies+of+moxifloxacin+and+levofloxacin%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Novel murine model of pneumococcal pneumonia: use of temperature as a measure of disease severity to compare the efficacies of moxifloxacin and levofloxacin.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 48 (9), 3343-3348 (2004).</li>
<li>Hankenson, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Weight+loss+and+reduced+body+temperature+determine+humane+endpoints+in+a+mouse+model+of+ocular+herpesvirus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Weight loss and reduced body temperature determine humane endpoints in a mouse model of ocular herpesvirus infection.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 52 (3), 277-285 (2013).</li>
<li>Adamson, T. W., Diaz-Arevalo, D., Gonzalez, T. M., Liu, X., Kalkum, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypothermic+endpoint+for+an+intranasal+invasive+pulmonary+aspergillosis+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Hypothermic endpoint for an intranasal invasive pulmonary aspergillosis mouse model.</a> Comparative Medicine. 63 (6), 477-481 (2013).</li>
<li>Nielsen, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+Exacerbates+Infection+via+Hyperinflammation+by+Signaling+through+TLR4+and+RAGE%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Diabetes Exacerbates Infection via Hyperinflammation by Signaling through TLR4 and RAGE.</a> mBio. 8 (4), (2017).</li>
<li>Nielsen, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+Antibody+Protects+Against+Acinetobacter+baumannii+Infection+by+Enhancing+Bacterial+Clearance+and+Evading+Sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Monoclonal Antibody Protects Against Acinetobacter baumannii Infection by Enhancing Bacterial Clearance and Evading Sepsis.</a> Journal of Infectious Diseases. 216 (4), 489-501 (2017).</li>
<li>Cheng, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+serotypes+5+and+8+capsular+polysaccharides+in+protection+against+Staphylococcus+aureus+in+murine+models+of+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Vaccine+Immunotherapy%22%5BJournal%5D)">Evaluation of serotypes 5 and 8 capsular polysaccharides in protection against Staphylococcus aureus in murine models of infection.</a> Human Vaccine Immunotherapy. 13 (7), 1609-1614 (2017).</li>
<li>Wong, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+and+Pathophysiological+Overview+of+Acinetobacter+Infections%3A+a+Century+of+Challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+Reviews%22%5BJournal%5D)">Clinical and Pathophysiological Overview of Acinetobacter Infections: a Century of Challenges.</a> Clinical Microbiology Reviews. 30 (1), 409-447 (2017).</li>
</ol>

Die Autoren erklären, dass sie keine finanziellen Interessenkonflikte.

Um sicher zu sein, sind die Mäuse nicht Miniatur Menschen. Ergebnisse aus Mausmodellen müssen im Zusammenhang betrachtet und anschließend auf Übertragbarkeit auf den Menschen, basierend auf Unterschiede und Gemeinsamkeiten zwischen den beiden Arten6interpretiert werden. Es ist auch wichtig, die entsprechenden Maus-Stamm als wählen sicher sind einige Infektionen anfälliger als andere; das gleiche gilt für die Erreger-Stamm von Wahl16.
Es ist wicht...

Infektion der unteren Atemwege ist die tödlichste Infektionskrankheit der Welt und die häufigste Todesursache in Entwicklungsländern1. Diese Infektionen entfallen weltweit mehr als 3,2 Millionen Todesfälle1. Darüber hinaus nosokomiale Pneumonie gehört zu den häufigsten und tödlichen Formen der Gesundheitswesen erworbenen Infektionen und wird durch die meisten Antibiotika-resistente Erreger2,3verursacht. Der typische Weg des Erwerbs von für beide ambulant erworbenen bakteriellen Pneumonie und nosokomialer Pneumonie ist das Bestreben der oropharyngealen Inhalt in die Alveolen. Murine Modelle verwendet, um diese Krankheiten oft zu studieren verwenden intranasale Impfung4, ein Großteil der Bakterien außerhalb der Lunge, wodurch Ziel Komplikationen und Symptome wie Sinusitis und physischen Traumata, die mit der Krankheit inkongruent sind der Hinterlegung Progression bei Menschen, die die Modelle wurden entwickelt, um zu emulieren. Andere Modelle können Inhalation Kammern und Micromisting Geräte, die genauer virale, tuberkulösen und Pilz-Pneumonien zu imitieren, aber nicht genau rekapitulieren die Normalroute des Erwerbs für typische bakterielle Pneumonien.
Das murine oropharyngealen Aspiration Lungenentzündung Modell kann genutzt werden, um den natürlichen Weg und Pathogenese der bakteriellen Pneumonie zu simulieren. Von Impfkeimen 50 µL Bakteriensuspension in den Mund-Rachenraum narkotisierten Mäuse mit einer Pipette folgt reflexive Anspruch, woraus sich infektiöse Lungenentzündung. Mit diesem Modell kann man die Pathogenese von Lungenentzündung-verursachenden Erreger und neue Therapien zur Bekämpfung dieser Krankheiten mit höheren Treue Vorbild mehr analog zur Aspiration Pneumonie Infektionen beim Menschen beobachtet untersuchen. Darüber hinaus sorgt im Gegensatz zu ähnlichen Modellen, die durch die Mundhöhle5,6infizieren, dieses Modell die volle Inokulum der Lunge statt den Darm erreicht wo es Off-Site-Entzündungen und Infektionen wie Gastritis verursachen kann und Enteritis. Schließlich, im Gegensatz zu anderen veröffentlichten Modell, das erfordert ein Laryngoskop und inoculates durch die Luftröhre7, dieses Modell nicht behindert die Atemwege mit einer Magensonde Nadel und erfordert keine Injektion für Inokulum Lieferung. Impfung, stützt sich auf das natürliche streben Reflex der Maus.

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>BD</td><td>214530</td><td>Kombinieren Sie es mit TSB, um TSA-Perlen herzustellen</td></tr><tr><td>, Borosilikatglas</td><td>Kimble</td><td>135003</td><td>Sterilisieren Sie durch Backen oder Autoklavieren vor jedem Gebrauch</td></tr><tr><td>Becherglas, 250 mL</td><td>Pyrex</td><td>1003</td><td>Wird während der präzisen Aliquotierung von konzentrierten bakteriellen Inokula verwendet</td></tr><tr><td>Zentrifuge</td><td>Sorvall</td><td>ST 40R</td><td>Kann 4.000 Mal verwenden; g bei 4°; C-Kammer</td></tr><tr><td>für die Anästhesie</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>VetFlo-0720</td><td>Bietet Platz für bis zu 5 Mäuse</td></tr><tr><td>Kryomold, Zwischengröße</td><td>Sakura Tissue-Tek</td><td>4566</td><td>Einweg-Vinylprobenformen, 15-fach; 15&mal; 5 mm</td></tr><tr><td>Zahnseide</td><td>Oral-B</td><td>37000469537</td><td>Binden Sie an einen stabilen Pfosten ca. 6" über der Tischhöhe</td></tr><tr><td>Pinzette</td><td>VWR</td><td>82027-440</td><td>Wird verwendet, um die Zunge sanft aus dem Mund einer Maus zu ziehen</td></tr><tr><td>Homogenisator für Lungengewebe</td><td>Omni International</td><td>TM125-115</td><td>Autoklav vor dem ersten Gebrauch; spülen Sie zwischen den Proben</td></tr><tr><td>Isofluran für die Anästhesie</td><td>Abbott</td><td>10015516</td><td>Alternative Medikamente können verwendet werden; Ändern Sie das Verfahren entsprechend</td></tr><tr><td>iSTAT Patrone</td><td>Abbott</td><td>03P79-25</td><td>Verschiedene Kartuschen sind erhältlich, um Ihren Bedürfnissen gerecht zu werden</td></tr><tr><td>Ketamin, 100 mg/mL</td><td>Western Medical Supply</td><td>4165</td><td>Verdünnen Sie 1:10 in PBS auf 1 mg/mL und kombinieren Sie es mit Xylazin bei 1 mg/mL</td></tr><tr><td>Salbe für die Augen</td><td>Akorn</td><td>Tränen erneuert</td><td>Vermeiden Sie es, das Auge mit der Spitze des Spenders zu berühren</td></tr><tr><td>Optimale Schnitttemperatur (O.C.T.) Compound</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-730-571</td><td>Wird zum Einfrieren von Lungenproben bei -80 & Grad verwendet; C zur Vorbereitung auf die Pathologie</td></tr><tr><td>Petrischale</td><td>VWR</td><td>25384-302</td><td>Polystyrol, Einweg, sterilisiert, 100-fach; 15 mm</td></tr><tr><td>phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)</td><td>Corning</td><td>21-031-CM</td><td>Dulbecco's PBS ohne Calcium und Magnesium</td></tr><tr><td>Pipettenspitzen, 200-&mu; L</td><td>VWR</td><td>10017-044</td><td>Autoklav vor Gebrauch</td></tr><tr><td>Pipetter, 200-&mu; L</td><td>Gilson</td><td>Pipetman P200</td> Vor <td>Gebrauch autoklavieren und kalibrieren</td></tr><tr><td>Spreader, Bakterienzelle</td><td>Bel-Art</td><td>F377360006</td><td>Vor jedem Gebrauch durch Backen oder Autoklavieren sterilisieren</td></tr><tr><td>Rührstab, magnetisch, 7,9 mm Durchmesser & 38,1 mm Länge</td><td>VWR</td><td>58948-150</td><td>Wird zum Rühren von konzentrierten bakteriellen Inokula während des Aliquotierens</td></tr><tr><td>verwendet Rührplatte, magnetisch</td><td>Corning</td><td>PC-620D</td><td>Wird zum Rühren von konzentrierten bakteriellen Inokula während der Aliquotierung</td></tr> verwendet <tr><td>Tryptische Sojabrühe (TSB)</td><td>BD</td><td>211822</td><td>Kombinieren Sie es mit Agar, um TSA-Fläschchen herzustellen</td></tr><tr><td>, konisch, steril, 50 mL</td><td>Corning</td><td>431720</td><td>Wird zur Herstellung von bakteriellen Inokula</td></tr><tr><td>Fläschchen verwendet, konisch, steril, 500 mL</td><td>Corning</td><td>431123</td><td>Wird verwendet, um Inokula für die Zubereitung von gefrorenen Inokula</td></tr><tr><td>zu konzentrieren Fläschchen, kryogen, 2,0 mL</td><td>Corning</td><td>430659</td><td>Zur kryogenen Lagerung von konzentrierten bakteriellen Inokula</td></tr><tr><td>Xylazin, 20 mg/ml</td><td>Akorn</td><td>AnaSed Injektion</td><td>Verdünnen Sie 1:20 in PBS auf 1 mg/ml und kombinieren Sie es mit Ketamin bei 1 mg/ml</td></tr></tbody></table>

murine oropharyngealen aspiration modell der ventilator-assoziierten und nosokomiale bakterielle pneumonie

Murine Oropharyngeal Aspiration Model of Ventilator-associated and Hospital-acquired Bacterial Pneumonia

Murine Infektionsmodelle sind entscheidend für das Verständnis der Pathogenese der Krankheit und Prüfung der Wirksamkeit neuer Therapeutika entwickelt, um die verursachenden Erreger zu bekämpfen. Infektiöse Lungenentzündung zählt zu den häufigsten Infektionen von Patienten in der Klinik vorgestellt und somit garantiert eine geeignete in-Vivo -Modell. Typische Pneumonie-Modelle verwenden intranasale Impfung, die übermäßige Organismen außerhalb der Lunge verursacht Ziel Komplikationen und Symptome wie Sinusitis, Gastritis, Enteritis, physisches Trauma oder Mikropartikel beschlagen Aerosol imitieren Einlagen die Ausbreitung ist eher typisch für virale, tuberkulösen oder pilzartige Pneumonie. Diese Modelle entsprechen nicht exakt die Pathogenese der bakteriellen Lungenentzündung typischen Gemeinschaft oder Gesundheitswesen erworben. Im Gegensatz dazu imitiert dieses Mausmodell der oropharyngealen Aspirationspneumonie die Tröpfchen-Route im Gesundheitswesen-erworbener Pneumonie. Impfen 50 µL der Bakterien verursacht Aussetzung in den Mund-Rachenraum narkotisierten Mäuse reflexive Aspiration, die zu einer Lungenentzündung führt. Mit diesem Modell kann man die Pathogenese von Lungenentzündung-verursachenden Erreger und neue Therapien zur Bekämpfung dieser Krankheiten untersuchen.

Durch sorgfältig Folgendes Protokoll, können leicht reproduzierbare und robuste Daten abgerufen werden. Es ist wichtig, sich strikt an die individuelle Inokulum Vorbereitung Protokoll für Experimente zu einem miteinander verglichen werden. Es ist auch wichtig, richtig Mäuse während des Verfahrens der Infektion zu behandeln. Achten Sie darauf, um Mäuse in einer Narkose Kammer frei von Isofluran zu platzieren. Mäuse werden Panik, wenn sie in eine Kammer platziert werden, die mit Isofluran v...

Infektiöse Lungenentzündung gehört zu den häufigsten Infektionen beim Menschen. Eine geeignete in-Vivo -Modell ist von entscheidender Bedeutung für das Verständnis der Pathogenese der Krankheit und Prüfung der Wirksamkeit neuer Therapeutika. Mit diesem Modell murine oropharyngealen Aspiration Pneumonie kann man die Pathogenese und neue Therapien gegen diese tödliche Infektionen untersuchen.

Murine oropharyngealen Aspiration Modell der Ventilator-assoziierten und nosokomiale Bakterielle Pneumonie

Murine infection models are critical for understanding disease pathogenesis and testing the efficacy of novel therapeutics designed to combat causative ...

Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen im Bereich der Antibiotikaresistenz zu neuartigen Therapeutika zur Behandlung von beatmungsassoziierter Pneumonie zu beantworten. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie die klinische Infektion schnell und einfach reproduzierbar repliziert. Um die Mäuse zu impfen, hängt man das erste betäubte Tier an seinen oberen Schneidezähnen an eine starke, dünne Schnur.Befestigen Sie sie an einem festen Gegenstand über der Bedienoberfläche in einer Höhe, die etwa der doppelten Körperlänge der Maus entspricht. Ziehen Sie die Zunge mit einer sterilen Zange mit stumpfen Händen vorsichtig heraus und übertragen Sie die Zunge auf sterile, behandschuhte Finger, um den Zugang zum Mundrachen zu ermöglichen. Drücken Sie den Kolben einer Mikropipette bis zum ersten Anschlag, um 50 Mikroliter des Inokulums in den Mundrachen zu geben, bis die Maus die Bakteriensuspension durch reflexartige Aspiration einatmet.Die Maus hört für einige Sekunden auf zu atmen, wenn das Inokulum in den Mundrachen gelegt wird, und schließlich führt eine reflexartige Aspiration dazu, dass die Bakteriensuspension eingeatmet wird, was durch das charakteristische Knistern vo

murine-oropharyngeal-aspiration-model-ventilator-associated-hospital

Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Quelle: Lenhard, A. et al. Ein Mausmodell für den Übergang von Streptococcus pneumoniae vom Kolonisator zum Erreger bei viraler Koinfektion wiederholt altersbedingte Erkrankungen. J. Vis. Exp. (2022)Dieses Video demonstriert ein Modell der Maus-Koinfektion, bei dem das Influenzavirus den Übergang von Streptococcus pneumoniae vom Kolonisator zu einem Krankheitserreger auslöst. Es beschreibt die Schritte, die bei bakterieller Besiedlung, Virusinfektion und Krankheitsprogression beteiligt sind.

Ein Mausmodell zur Untersuchung des pathogenen Übergangs von Streptococcus pneumoniae nach viraler Koinfektion

Quelle: Nielsen, T. B., et al., Murine Oropharyngeal Aspiration Model of Beatmator-assoziierte und im Krankenhaus erworbene bakterielle Pneumonie. J. Vis. Exp. (2018)Dieses Video demonstriert das Verfahren, bei dem Bakterien über den Oropharynx in die Lunge einer anästhesierten Maus geleitet werden, um eine Lungeninfektion auszulösen und eine Immunantwort auszulösen.

Vorbereitung eines murinen Oropharyngeal-Aspirationsmodells zur Etablierung bakterieller Lungeninfektionen

Dieses Video zeigt die Etablierung einer Lungeninfektion in einem immunkompetenten Nagetiermodell durch Intubation und Installation von bakteriellen Suspensionen in Lungenlappen. Dieses Modell ermöglicht antibakterielle Wirksamkeitsstudien an immunkompetenten Tieren.

Intrabronchiale Instillation von Streptococcus pneumoniae in immunkompetenten Nagetiermodellen

Wir haben ein Modell für Lungenverletzungen von Mäusen durch intratracheale Injektion des Bakteriums Pseudomonas aeruginosa entwickelt. Dieses Modell ahmt Lungenschäden bei Lungenentzündungen nach und ist klinisch relevant.

Pseudomonas aeruginosa induzierte Lungenschädigung-Modell

Während in vitro Studien von Wirt-Erreger-Interaktionen die Charakterisierung spezifischer Immunantworten ermöglichen, sind in vivo Modelle erforderlich, um die Auswirkungen komplexer Reaktionen zu beobachten. Unter Verwendung der Exposition von Candida albicans, gefolgt von einer Pseudomonas aeruginosa-vermittelten Lungeninfektion, etablierten wir ein Mausmodell für mikrobielle Interaktionen, die an der Pathogenität der beatmungsassoziierten Pneumonie beteiligt sind.

Studieren Mikrobielle Gemeinschaften<em&gt; In-vivo-</em&gt;: Ein Modell von Host-vermittelte Interaktion zwischen<em&gt; Candida albicans</em&gt; Und<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; In den Atemwegen

Verschiedene Verfahren wurden für die Modellierung von bakterieller Pneumonie bei Mäusen in der Literatur beschrieben. Hier beschreiben wir eine nicht-invasive, kostengünstige, schnelle Methode zur Lungenentzündung durch Aspiration induzierenden (dh Inhalation) eines bakteriellen Inokulums in den Oropharynx pipettiert. Downstream Methoden zur Beurteilung der Lungen angeborenen Immunantwort sind auch detailliert.

Ein Nicht-invasive und in technischer Hinsicht nicht intensive Verfahren zur Induktion und Phänotypisierung für experimentelle bakterielle Pneumonie bei Mäusen

Dieses Protokoll induziert eine akute Lungenschädigung bei einer Maus, die der Pathogenese der sauren Pneumonitis, die beim Menschen beobachtet wurde, sehr treu ist. Wir erzeugen eine maximale akute nichtletale Lungenschädigung mit niedrigem pH-Wert und berücksichtigen Unterschiede in der anatomischen Atmungsstruktur von Nagetieren und Menschen mit Hilfe einer offenen Tracheostomie in Verbindung mit einer zirkumferentialen Druckentlastung.

Offene Tracheotomie Magensäure Aspiration Mausmodell der akuten Lungenschädigung Ergebnisse in Maximal Akute nonlethal Lung Injury

Eine Methode zur Feststellung von Lungeninfektionen bei immunkompetenten Nagetieren wird beschrieben. Mit Kompetenz kann diese Methode schnell und einfach durchgeführt werden, um eine stabile Infektion mit vielen Isolaten von S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae und A. baumannii zu induzieren.

A Robust Pneumonia Modell in intaktem Immunsystem Nagetiere zur Bewertung antibakterieller Wirksamkeit gegen<i&gt; S. pneumoniae</i&gt;,<i&gt; H. influenzae</i&gt;,<i&gt; K. pneumoniae</i&gt;,<em&gt; P. aeruginosa</em&gt; oder<em&gt; A. baumannii</em

Hier stellen wir Methoden zur Verbesserung der sekundären bakteriellen Lungenentzündungsstudien vor, indem wir einen nicht-invasiven Weg der Instillation in die unteren Atemwege bereitstellen, gefolgt von der Genesung von Krankheitserregern und der Transkriptanalyse. Diese Verfahren sind reproduzierbar und können ohne spezielle Ausrüstung wie Kanülen, Führungsdrähte oder Glasfaserkabel durchgeführt werden.

Ein präzises Pathogen-Liefer- und Wiederherstellungssystem für murine Modelle der sekundären bakteriellen Pneumonie

Dieses Manuskript beschreibt die Etablierung eines infektiösen Modells der Lungenentzündung bei Mäusen und die entsprechende Charakterisierung der Verletzungsauflösung sowie Methoden zur Züchtung von Bakterien und zur intratrachealen Instillation. Ein neuartiger Ansatz mit Hilfe der hochdimensionalen Durchflusszytometrie zur Bewertung der Immunlandschaft wird ebenfalls beschrieben.

Experimentelles Modell zur Evaluierung des Abklingens von Lungenentzündungen

Diese Arbeit beschreibt ein neuartiges Mausmodell für den Übergang von Pneumokokken von einem asymptomatischen Kolonisator zu einem krankheitsverursachenden Erreger während einer Virusinfektion. Dieses Modell kann leicht angepasst werden, um polymikrobielle und Wirt-Pathogen-Interaktionen während der verschiedenen Phasen des Krankheitsverlaufs und über verschiedene Wirte hinweg zu untersuchen.

Ein Mausmodell für den Übergang von Streptococcus pneumoniae vom Kolonisator zum Krankheitserreger nach viraler Koinfektion rekapituliert altersbedingte Erkrankung

Lernen Sie das murine oropharyngeale Aspirationmodell zur Untersuchung von beatmungsassoziierter Pneumonie. Diese Methode ermöglicht die schnelle und reproduzierbare Replikation klinischer Infektionen zur Entwicklung neuer Therapien.

Murine oropharyngealen Aspiration Modell der Ventilator-assoziierten und nosokomiale Bakterielle Pneumonie

Weitere Videos entdecken