Name: Ein fluoreszierender Intravital-Bildgebungsansatz zur Untersuchung der belastungsinduzierten Kalzium-Signaldynamik in Maus-Osteozyten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-02-24T14:05:00.000+00:00
Duration: 5 min 3 s
Description: Erfahren Sie die intravitalen Bildgebung von Osteozyten in vivo mit Zweiphotonenmikroskopie. Diese Methode ermöglicht die Echtzeitbeobachtung der Kalzium-Signaldynamik unter mechanischer Belastung in Mäusen.

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<ol><li>Lu, X. L., Huo, B., Park, M., Guo, X. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+response+in+osteocytic+networks+under+steady+and+oscillatory+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Calcium response in osteocytic networks under steady and oscillatory fluid.</a> Bone. 51 (3), 466-473 (2012).</li>
<li>Wu, D., Schaffler, M. B., Weinbaum, S., Spray, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix-dependent+adhesion+mediates+network+responses+to+physiological+stimulation+of+the+osteocyte+cell+process%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Matrix-dependent adhesion mediates network responses to physiological stimulation of the osteocyte cell process.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (29), 12096-12101 (2013).</li>
<li>Verbruggen, S. W., Vaughan, T. J., McNamara, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+flow+in+the+osteocyte+mechanical+environment%3A+A+fluid-structure+interaction+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Biomechanics+and+Modeling+in+Mechanobiology%22%5BJournal%5D)">Fluid flow in the osteocyte mechanical environment: A fluid-structure interaction approach.</a> Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. 13 (1), 85-97 (2013).</li>
<li>Genetos, D. C., Kephart, C. J., Zhang, Y., Yellowley, C. E., Donahue, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oscillating+fluid+flow+activation+of+gap+junction+hemichannels+induces+atp+release+from+MLO-Y4+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Oscillating fluid flow activation of gap junction hemichannels induces atp release from MLO-Y4 osteocytes.</a> Journal of Cellular Physiology. 212 (1), 207-214 (2007).</li>
<li>Lu, X. L., Huo, B., Chiang, V., Guo, X. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteocytic+network+is+more+responsive+in+calcium+signaling+than+osteoblastic+network+under+fluid+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Osteocytic network is more responsive in calcium signaling than osteoblastic network under fluid flow.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 27 (3), 563-574 (2012).</li>
<li>Schaffler, M. B., Kennedy, O. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteocyte+signaling+in+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Osteoporosis+Reports%22%5BJournal%5D)">Osteocyte signaling in bone.</a> Current Osteoporosis Reports. 10 (2), 118-125 (2012).</li>
<li>Kramer, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteocyte+Wnt%2F+-Catenin+signaling+is+required+for+normal+bone+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Biology%22%5BJournal%5D)">Osteocyte Wnt/ -Catenin signaling is required for normal bone homeostasis.</a> Molecular and Cellular Biology. 30 (12), 3071-3085 (2010).</li>
<li>Nakashima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+osteocyte+regulation+of+bone+homeostasis+through+RANKL+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Evidence for osteocyte regulation of bone homeostasis through RANKL expression.</a> Nature Medicine. 17 (10), 1231-1234 (2011).</li>
<li>Kennedy, O. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+resorption+in+fatigue-loaded+bone+involves+both+apoptosis+and+active+pro-osteoclastogenic+signaling+by+distinct+osteocyte+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Activation of resorption in fatigue-loaded bone involves both apoptosis and active pro-osteoclastogenic signaling by distinct osteocyte populations.</a> Bone. 50 (5), 1115-1122 (2012).</li>
<li>Rawlinson, S. C. F., Wheeler-Jones, C. P. D., Lanyon, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arachidonic+acid+for+loading+induced+prostacyclin+and+prostaglandin+E2+release+from+osteoblasts+and+osteocytes+is+derived+from+the+activities+of+different+forms+of+phospholipase+A2%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Arachidonic acid for loading induced prostacyclin and prostaglandin E2 release from osteoblasts and osteocytes is derived from the activities of different forms of phospholipase A2.</a> Bone. 27 (2), 241-247 (2000).</li>
<li>David, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+bone+formation+in+bovine+trabecular+bone+cultured+in+a+dynamic+3D+bioreactor+is+enhanced+by+compressive+mechanical+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+A%22%5BJournal%5D)">Ex vivo bone formation in bovine trabecular bone cultured in a dynamic 3D bioreactor is enhanced by compressive mechanical strain.</a> Tissue Engineering Part A. 14 (1), 117-126 (2008).</li>
<li>Davies, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanically+loaded+ex+vivo+bone+culture+system+%26%2334%3BZetos%26%2334%3B%3A+systems+and+culture+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22European+Cell+%26+Materials%22%5BJournal%5D)">Mechanically loaded ex vivo bone culture system &#34;Zetos&#34;: systems and culture preparation.</a> European Cell & Materials. 11, 57-75 (2006).</li>
<li>Adachi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteocyte+calcium+signaling+response+to+bone+matrix+deformation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomechanics%22%5BJournal%5D)">Osteocyte calcium signaling response to bone matrix deformation.</a> Journal of Biomechanics. 42 (15), 2507-2512 (2009).</li>
<li>Huo, B., Lu, X. L., Guo, X. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intercellular+calcium+wave+propagation+in+linear+and+circuit-like+bone+cell+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+Transactions+of+the+Royal+Society+A%3A+Mathematical%2C+Physical+and+Engineering+Sciences%22%5BJournal%5D)">Intercellular calcium wave propagation in linear and circuit-like bone cell networks.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society A: Mathematical, Physical and Engineering Sciences. 368 (1912), 617-633 (2010).</li>
<li>Morrell, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanically+induced+Ca2%2B+oscillations+in+osteocytes+release+extracellular+vesicles+and+enhance+bone+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Research%22%5BJournal%5D)">Mechanically induced Ca2+ oscillations in osteocytes release extracellular vesicles and enhance bone formation.</a> Bone Research. 6, 6(2018).</li>
<li>Jing, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+intracellular+calcium+oscillations+in+osteocytes+in+intact+mouse+long+bones+under+dynamic+mechanical+loading%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">In situ intracellular calcium oscillations in osteocytes in intact mouse long bones under dynamic mechanical loading.</a> FASEB Journal. 28 (4), 1582-1592 (2014).</li>
<li>Chen, T. -W., Wardill, T. J., Sun, Y., Pulver, S. R., Renninger, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultra-sensitive+fluorescent+proteins+for+imaging+neuronal+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ultra-sensitive fluorescent proteins for imaging neuronal activity.</a> Nature. 499 (7458), 295-300 (2013).</li>
<li>Jacobs, C. R., Temiyasathit, S., Castillo, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteocyte+mechanobiology+and+pericellular+mechanics%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Osteocyte mechanobiology and pericellular mechanics.</a> Annual Review of Biomedical Engineering. 12, 369-400 (2010).</li>
<li>Jing, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+properties+of+intracellular+calcium+signaling+in+osteocytic+and+osteoblastic+cell+networks+under+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal properties of intracellular calcium signaling in osteocytic and osteoblastic cell networks under fluid.</a> Bone. 53 (2), 531-540 (2013).</li>
<li>Thi, M. M., Suadicani, S. O., Schaffler, M. B., Weinbaum, S., Spray, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanosensory+responses+of+osteocytes+to+physiological+forces+occur+along+processes+and+not+cell+body+and+require+%CE%B1V%CE%B23+integrin%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Mechanosensory responses of osteocytes to physiological forces occur along processes and not cell body and require αVβ3 integrin.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (52), 21012-21017 (2013).</li>
<li>Wang, Y., McNamara, L. M., Schaffler, M. B., Weinbaum, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+the+role+of+integrins+in+flow+induced+mechanotransduction+in+osteyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">A model for the role of integrins in flow induced mechanotransduction in osteyocytes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (40), 15941-15946 (2007).</li>
<li>McNamara, L. M., Majeska, R. J., Weinbaum, S., Friedrich, V., Schaffler, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attachment+of+osteocyte+cell+processes+to+the+bone+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record%22%5BJournal%5D)">Attachment of osteocyte cell processes to the bone matrix.</a> The Anatomical Record. 292 (3), 355-363 (2009).</li>
<li>Franz-Odendaal, T. A., Hall, B. K., Witten, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Buried+alive%3A+How+osteoblasts+become+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Buried alive: How osteoblasts become osteocytes.</a> Developmental Dynamics. 235 (1), 176-190 (2005).</li>
<li>Jing, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+clearing+and+its+application+to+bone+and+dental+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Tissue clearing and its application to bone and dental tissues.</a> Journal of Dental Research. 98 (6), 621-631 (2019).</li>
<li>Lewis, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteocyte+calcium+signals+encode+strain+magnitude+and+loading+frequency+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Osteocyte calcium signals encode strain magnitude and loading frequency in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (44), 11775-11780 (2017).</li>
<li>Lu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DMP1-targeted+Cre+expression+in+odontoblasts+and+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">DMP1-targeted Cre expression in odontoblasts and osteocytes.</a> Journal of Dental Research. 86 (4), 320-325 (2007).</li>
<li>Rubin, C. T., Lanyon, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+strain+similarity+in+vertebrates%3B+an+alternative+to+allometric+limb+bone+scaling%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Theoretical+Biology%22%5BJournal%5D)">Dynamic strain similarity in vertebrates; an alternative to allometric limb bone scaling.</a> Journal of Theoretical Biology. 107 (2), 321-327 (1984).</li>
<li>Jacobs, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+effect+of+steady+versus+oscillating+flow+on+bone+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomechanics%22%5BJournal%5D)">Differential effect of steady versus oscillating flow on bone cells.</a> Journal of Biomechanics. 31 (11), 969-976 (1998).</li>
<li>Kato, Y., Windle, J. J., Koop, B. A., Mundy, G. R., Bonewald, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+an+osteocyte-like+cell+line%2C+MLO-Y4%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Establishment of an osteocyte-like cell line, MLO-Y4.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 12 (12), 2014-2023 (1997).</li>
<li>Kato, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+an+osteoid+preosteocyte-like+cell+MLO-A5+that+spontaneously+mineralizes+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Establishment of an osteoid preosteocyte-like cell MLO-A5 that spontaneously mineralizes in culture.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 16 (9), 1622-1633 (2001).</li>
<li>Woo, S. M., Rosser, J., Dusevich, V., Kalajzic, I., Bonewald, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+line+IDG-SW3+replicates+osteoblast-to-late-osteocyte+differentiation+in+vitro+and+accelerates+bone+formation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Cell line IDG-SW3 replicates osteoblast-to-late-osteocyte differentiation in vitro and accelerates bone formation in vivo.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 26 (11), 2634-2646 (2011).</li>
<li>vander Plas, A., Nijweide, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+purification+of+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Isolation and purification of osteocytes.</a> Journal of Bone and Mineral Research. 7 (4), 389-396 (1992).</li>
<li>Gu, G., Nars, M., Hentunen, T. A., Metsikkö, K., Väänänen, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolated+primary+osteocytes+express+functional+gap+junctions+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Isolated primary osteocytes express functional gap junctions in vitro.</a> Cell and Tissue Research. 323 (2), 263-271 (2006).</li>
<li>Paic, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+differentially+expressed+genes+between+osteoblasts+and+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Identification of differentially expressed genes between osteoblasts and osteocytes.</a> Bone. 45 (4), 682-692 (2009).</li>
<li>Tian, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+neural+activity+in+worms%2C+flies+and+mice+with+improved+GCaMP+calcium+indicators%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Imaging neural activity in worms, flies and mice with improved GCaMP calcium indicators.</a> Nature Methods. 6 (12), 875-881 (2009).</li>
<li>Grienberger, C., Konnerth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+calcium+in+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Imaging calcium in neurons.</a> Neuron. 73 (5), 862-885 (2012).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>#3 Griff Skalpell</td><td>Elektronenmikroskopie Sciences</td><td>72040-03</td><td>Chirurgisches Zubehör</td></tr><tr><td>20x Wasserimmersionsobjektiv</td><td>Olympus</td><td>XLUMPLFLN20XW</td><td>Dies ist ein 20x Objektiv, aber 40x kann auch für dieses Protokoll verwendet werden. Wir empfehlen das Eintauchen in Wasser, da es während der Bildgebung in das Bad getaucht werden muss, so dass ein Objektiv im Freien zu Aberrationen führen kann</td></tr><tr><td>A.M. Bickford Omnicon F/AIR</td><td>AM Bickford</td><td>80120</td><td>Der F/AIR Anästhesiegasfilter ist eine sinnvolle Antwort auf Probleme mit Anästhesiegasen im Operationssaal und wurde speziell entwickelt, um Anästhesieabfallgase wie Isofluran zu entfernen. Halothan, Enfluran usw. aus der OP-Umgebung.</td></tr><tr><td>A.M. Bickford Omnicon F/AIR Bausatz&nbsp;</td><td>AM Bickford</td><td>80000</td><td>Ein komplettes Kit mit Schlauch und Adaptern zum Anschluss von F/AIR an das</td></tr><tr><td>Setup B6J. Cg-Gt(ROSA)26Sortm95.1(CAG-GCaMP6f)Hze/MwarJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>28865</td><td>GCaMP6f Mäuse für die Kreuzung mit Dmp1-Cre Mäusen</td></tr><tr><td>B6N. FVB-Tg(Dmp1-cre)1Jqfe/BwdJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>23047</td><td>Dmp1-Cre Mäuse für die Kreuzung mit GCaMP6f&nbsp; Mäusen</td></tr><tr><td>Kompressions-Wägezelle</td><td>FUTEK Advanced Sensor Technology, Inc.</td><td>905898</td><td>LCM100 , 1000 g , Subminiatur-Zug- und Druck-Wägezelle (Miniatur-/Inline-Gewinde) , RoHS bleifrei, Material - 17-4 PH S.S. , M3x0,5-Faden , 34 Awg 4-adriges geflochtenes Polyesterkabel , 5 ft</td></tr><tr><td>Long Corning 500 mL DPBS (Dulbeccos phosphatgepufferte Kochsalzlösung), 1x [+] Calcium, Magnesium</td><td>VWR International</td><td>21-030-CV</td><td>Ionisch ausgeglichenes Bad, das Kalzium enthält und den Mittelfußknochen während der Bildgebung</td></tr> <tr><td>untertauchtDental-Pick-Werkzeug</td><td>Elektronenmikroskopie Wissenschaften</td><td></td><td>Chirurgisches Zubehör</td></tr><tr><td>Ethylalkohol reines 200-prozentiges ACS-Reagenz >99,5 %</td><td>Sigma Aldrich</td><td>SIAL-459844-500ML</td><td>Sterilisationszwecke</td></tr><tr><td>Drehpunktstift</td><td>Fathom N</td><td>/A</td><td>Hergestellt durch direktes 3D-Lasersintern von Edelstahl (PH1-Legierung) aus 3D-SolidWorks STL-Dateien. Ursprünglicher Lieferant war GPI Prototype & Manufacturing Services, Inc., das jetzt von FATHOM übernommen wurde, enthält das zuvor veröffentlichte Dokument</td></tr><tr><td>High resolution and speed USB220 output kit</td><td>FUTEK Advanced Sensor Technology, Inc.</td><td>717435</td><td>Wird verwendet, um eine Wägezelle mit einem Laptop</td></tr><tr><td>zu verbinden ImageJ 1.53t mit Java 1.8.0_172 (für Windows 64-bit)</td><td>NIH</td><td>N/A</td><td>Hier installieren https://imagej.nih.gov/ij/</td></tr> <tr><td>Isofluran</td><td>Piramal Critical Care</td><td>66794-013-25</td><td>100% Inhalationsdampf</td></tr><tr><td>Flüssigkeit Ladehalterung</td><td>Fathom</td><td>N/A</td><td>Hergestellt durch direktes 3D-Lasersintern von Edelstahl (PH1-Legierung) aus 3D-SolidWorks STL-Dateien. Ursprünglicher Lieferant war GPI Prototype & Manufacturing Services, Inc., das jetzt von FATHOM übernommen wurde, enthält das zuvor veröffentlichte Dokument</td></tr><tr><td>MATLAB R2019a</td><td>MathWorks</td><td></td><td>Für den Betrieb des Ladegeräts</td></tr><tr><td>Matrx VIP 3000 Verdampfer gut füllen Isofluran</td><td>Butler Schein Animal Health</td><td>14309</td><td>Verdampfer für Anästhetikum</td></tr><tr><td>Nonin Pulsoximeter Modell 2500A Vet</td><td></td><td>2500A Vet</td><td></td></tr><tr><td>Piezo Servo Controller</td><td>PI-USA</td><td>E-625</td><td>Elektronisches Bauteil, das von der Firma für die Verwendung mit dem Aktuator</td></tr><tr><td>PiezoMove empfohlen wird Linearer Piezo-Aktuator mit hoher Steifigkeit</td><td>PI-USA</td><td>P-602.5SL</td><td>Aktuator für die Ladevorrichtung</td></tr><tr><td>Skalpellklingen, Nr. 10 für Griff Nr. 3, Packung mit 100</td><td>Stück Elektronenmikroskopie Sciences</td><td>72044-10</td><td>Chirurgisches Zubehör</td></tr><tr><td>Pinzette aus Edelstahl mit scharfen, feinen Spitzen. Länge: 120 mm</td><td>Elektronenmikroskopie Sciences</td><td>78326-42</td><td>Chirurgisches Zubehör</td></tr><tr><td>Thorlabs Bergamo Multiphotonenmikroskop</td><td>ThorLabs</td><td>N/A</td><td>Dies ist nur das Bildgebungssystem und der Laser ist nicht im Lieferumfang enthalten, obwohl ThorLabs auf Wunsch Laseroptionen anbietet</td></tr><tr><td>Titan-Saphire Chamäleon Discovery NX mit Total Power Control (TPC)</td><td>Coherent</td><td>N/A</td><td>Dieses System besteht technisch gesehen aus zwei Lasern, einem abstimmbaren und einem festen Laser. Für das Protokoll wird jedoch nur das Abstimmbare benötigt.&nbsp;</td></tr><tr><td>Vannas Federschere - 4 mm Schneide</td><td>Fine Science Tools</td><td>15018-10</td><td>Chirurgisches Zubehör</td></tr><tr><td>Wasserbad</td><td>Fathom</td><td>N/A</td><td>Hergestellt durch direktes 3D-Lasersintern von Edelstahl (PH1-Legierung) aus 3D-SolidWorks STL-Dateien. Ursprünglicher Lieferant war GPI Prototype & Manufacturing Services, Inc., das jetzt von FATHOM übernommen wurde, werden in dem zuvor veröffentlichten Dokument</td></tr></tbody></table>

ein fluoreszierender intravital-bildgebungsansatz zur untersuchung der belastungsinduzierten kalzium-signaldynamik in maus-osteozyten

A Fluorescent Intravital Imaging Approach to Study Load-Induced Calcium Signaling Dynamics in Mouse Osteocytes

Hier berichten wir über eine Methodik zur Untersuchung des Kalzium-Signalwegs in eingebetteten Osteozyten in vivo unter Verwendung von akuter chirurgischer Vorbereitung und Multiphotonen-Fluoreszenzbildgebung. Ein grün fluoreszierendes Signal kann von genetisch kodierten Calciumindikatoren in Osteozyten über die DMP1-Cre-Expression beobachtet werden. Abbildung 4 ist ein Einzelebenenbild von eingebetteten Osteozyten. Beachten Sie, dass alle Zellen markiert sind und grüne Flu...

Ein fluoreszierender Intravital-Bildgebungsansatz zur Untersuchung der belastungsinduzierten Kalzium-Signaldynamik in Maus-Osteozyten

Bone tissue is exquisitely sensitive to differences in mechanical load magnitude. Osteocytes, dendritic cells that form a syncytium throughout the bone, ...

a-fluorescent-intravital-imaging-approach-to-study-load-induced

Research

Forschung

JoVE Journal

Bioengineering

Biotechnik

Um zu verstehen, Netzwerk-Dynamik Mikroschaltungen in den Neocortex, ist es wichtig, gleichzeitig aufzeichnen die Aktivität einer großen Anzahl von Neuronen. In-vivo Zwei-Photonen-Kalzium-Imaging ist die einzige Methode, dass man, um die Aktivität eines dichten neuronalen Population mit Single-Cell-Auflösung aufzeichnen können.

In Vivo 2-Photon Calcium Imaging in Layer 2 / 3 der Mäuse

Fluoreszenz-basierte Messung von Calcium-Shop-Eintrag in lebenden Zellen: aus kultivierten Krebszelle zu Skelettmuskelfaser

Quelle: Heredia, D. J., et. al. ex vivo Bildgebung des zellspezifischen Calcium-Signalwegs an der dreigliedrigen Synapse des Maus-Zwerchfells. J. Vis. Exp. (2018) Dieses Video zeigt die Fluoreszenzbildgebung der Calciumdynamik an neuromuskulären Junktionen (NMJs) in einer transgenen Maus, die genetisch kodierte Calciumindikatoren exprimiert. Eine NJM wird durch fluoreszenzmarkierte Acetylcholinrezeptoren im Zwerchfell mit dem Nervus phrenicus identifiziert. Ein Bildsplitter wird verwendet, um...

Fluoreszenzbildgebung der Kalziumdynamik an neuromuskulären Verbindungen im Zwerchfell einer transgenen Maus

Gezielte-Esterase-induzierten Farbstoff Belastung (TED) unterstützt die Analyse der intrazellulären Kalzium-Speicher der Dynamik von Fluoreszenz-Bildgebung. Das Verfahren stützt sich auf Targeting eines rekombinanten Carboxylesterase zum Endoplasmatischen Retikulum (ER), wo es verbessert die lokale Entlarvung von synthetischen niedriger Affinität...

Direct Imaging von Calcium ER mit Targeted-Esterase Induzierte Dye Loading (TED)

Hier präsentieren wir Techniken zur Abbildung lokaler IP3-vermittelter Ca2+-Ereignisse mittels Fluoreszenzmikroskopie in intakten Säugetierzellen, die mit Ca2+-Indikatoren beladen sind, zusammen mit einem Algorithmus, der die Identifizierung und Analyse dieser Ereignisse automatisiert.

Imaging Lokale Ca<sup&gt; 2+</sup&gt; Signale in kultivierten Säugetierzellen

Hier präsentieren wir ein Protokoll zum Bild Kalzium signalisieren in den Populationen der einzelnen Zelltypen bei der murinen neuromuskulären Synapse.

Ex-Vivo Bildgebung von zellspezifische Kalzium Signalisierung an den dreigliedrigen Synapse der Maus Membran

Wir stellen die Methodik zur Isolierung von murinen Myozyten vor und wie Spannungs- oder Kalziumspuren gleichzeitig mit Sarcomere-Verkürzungsspuren mittels Fluoreszenzphotometrie mit gleichzeitigen Messungen der digitalen Zellgeometrie erhalten werden können.

Optische Bildgebung von isolierten ventrikulären Myozyten

Wir präsentieren ein Protokoll, um das Hirnstamm der erwachsenen Maus von der ventralen Seite zu entlarven. Durch die Verwendung einer Gradienten-Refraktiven Indexlinse mit einem Miniaturmikroskop kann die Kalzium-Bildgebung verwendet werden, um die Aktivität von minderwertigen oliv-neuralen Somata nin vivo zu untersuchen.

In vivo Calcium Imaging in Maus Inferior Olive

Es werden zwei verwandte Methoden beschrieben, um subzelluläre Ereignisse zu visualisieren, die für die synaptische Übertragung erforderlich sind. Diese Protokolle ermöglichen die Echtzeitüberwachung der Dynamik des präsynaptischen Kalziumeinflusses und der synaptischen Vesikelmembranfusion mittels Lebendzellbildgebung von in vitro kultivierten Neuronen.

Echtzeit-Fluoreszenzmessung synaptischer Funktionen in Modellen der amyotrophen Lateralsklerose

Das Protokoll beschreibt die Methode, einen fluoreszierenden Kalziumfarbstoff durch den geschnittenen Nerv in die motorischen Nervenenden der Maus zu laden. Darüber hinaus wird eine einzigartige Methode zur Erfassung schneller Kalziumtransienten in den peripheren Nervenenden mittels konfokaler Mikroskopie vorgestellt.

Registrierung von Kalziumtransienten in neuromuskulären Verbindungen von Mäusen mit hoher zeitlicher Auflösung mittels konfokaler Mikroskopie

In dieser Studie wird die Methode zur Visualisierung und Entwicklung dreidimensionaler (3D) Modelle von Osteozyten innerhalb des lakunar-kanalikulären Netzwerks (LCN) für die CFD-Analyse (Computational Fluid Dynamics) beschrieben. Die mit dieser Methode generierten Modelle helfen, die Mechanoempfindung von Osteozyten in gesunden oder kranken Knochen zu verstehen.

Analyse und Bildgebung von Osteozyten

Erfahren Sie die intravitalen Bildgebung von Osteozyten in vivo mit Zweiphotonenmikroskopie. Diese Methode ermöglicht die Echtzeitbeobachtung der Kalzium-Signaldynamik unter mechanischer Belastung in Mäusen.

Ein fluoreszierender Intravital-Bildgebungsansatz zur Untersuchung der belastungsinduzierten Kalzium-Signaldynamik in Maus-Osteozyten (Video) | JoVE Journal

Ein fluoreszierender Intravital-Bildgebungsansatz zur Untersuchung der belastungsinduzierten Kalzium-Signaldynamik in Maus-Osteozyten

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