Name: Sojabohnen-Haarwurzeltransformation zur Analyse der Genfunktion (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-05T14:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 34 s
Description: Erfahren Sie die Haarwurzeltransformation von Sojabohnen zur Analyse von Genfunktionen. Diese Methode ermöglicht die gleichzeitige Untersuchung mehrerer Gene und polygener Netzwerke in Glycine max.

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Diese Forschung wurde durch den Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada (NSERC) mit der Fördernummer RGPIN-2020-06111 und durch eine großzügige Spende von Brad Lace finanziert. Wir danken Wayne Parrott (University of Georgia) für das K599 Agrobacterium und das vorläufige Protokoll sowie dem Labor Nakagawa & Hachiya (Shimane University) für die leeren Vektoren pGWB2, pGWB6 und pANDA35HK.

Anmerkungen: Es wird empfohlen, alle weiteren Schritte unter sterilen Bedingungen durchzuführen.
1. Sterilisation von Sojabohnensamen
<ol><li>Legen Sie in einer Biosicherheitswerkbank 16-20 runde Williams 82-Sojabohnensamen in makellosem Zustand (d. h. ohne Risse oder Schönheitsfehler) in ein 50-ml-Zentrifugenröhrchen.</li>
	<li>Fügen Sie 30 ml 70%igen Isopropylalkohol hinzu, schütteln Sie ihn 30 Sekunden lang vorsichtig und dekantieren Sie dann den Alkohol.</li>
	<li>Schütteln Sie die Samen vorsichtig mit 30 ml 10%iger Bleichmittel für 10 s und lassen Sie die Samen 5 Minuten lang bei Raumtemperatur (RT, 25 °C) in der Lösung ruhen. Nach 5 Minuten das Bleichmittel abtropfen lassen.</li>
	<li>Wiederholen Sie das Schütteln dreimal mit 30 ml sterilem hochreinem H2O für 1 Minute pro Spülgang und entsorgen Sie dasH2Ozwischen jedemSpülgang.</li>
	<li>Legen Sie die sterilisierten Samen auf Filterpapier, das mit 5 ml Keimungs- und Cokultivierungsmedium (GC) (Autoklav, halbstarke Flüssigkeit, Murashige- und Skoog [MS]-Medium mit 1% Saccharose [pH = 5,8] getränkt ist, und fügen Sie dann 2,5 ml/l Vitamine) in sterile Petrischalen hinzu.</li>
	<li>Stellen Sie die Platten 3 Tage lang bei RT (25 °C) im Dunkeln, bevor Sie die Platten bei 22 °C unter 16 h kaltweißer T5-Leuchtstoffröhre (100 μE m-2·s-1) für 4 Tage umfüllen, damit die Samen keimen können. Anmerkungen: Entsorgen Sie zerknitterte oder rissige Samen. Die besten Samen sind diejenigen, die groß und gleichmäßig gelb sind. Sterilisieren Sie mindestens die doppelte Anzahl von Samen, die für das Experiment erforderlich sind, um Samen von guter Qualität auszuwählen, da einige Samen aufgrund von Schäden, Krankheiten oder Nichtkeimung möglicherweise nicht optimal sind.</li>
</ol>2. Infektion der Keimblätter mit K599
HINWEIS: Verwenden Sie Vektoren der pGWB-Serie, da deren duale Selektion die genomische Integration der gesamten T-DNA-Kassette gewährleistet. Mittels Elektroporation wurde ein binärer Vektor, der das interessierende Gen enthält , in A. rhizogenes pRi2659 umgewandelt18.
<ol><li>Basierend auf der Sequenz des Plasmids18 von A. rhizogenes pRi2659 wurden Primer zum Nachweis des Ti-Plasmidgens VirD2 (VirD2 forward: 5'-CCCGATCGAGCTCAAGTTAT-3'; VirD2 umgekehrt: 5'-TCGTCTGGCTGACTTTCGT-3'; Erwartete Verstärkungsgröße: 221 bp). Nach der Transformation werden die Agrobacterium-Kolonien mit einem PCR-Kit auf die Retention von VirD2 mittels Polymerase-Kettenreaktion (PCR) getestet (siehe Materialtabelle). PCR-Zyklus: 94 °C für 3 min; 35 Zyklen (94 °C für 1 Minute, 58 °C für 30 Sek., 72 °C für 1 Minute); und 72 °C für 10 min.</li>
	<li>Nach der Auswahl der A. rhizogenes-Kolonie , die sowohl VirD2 als auch das interessierende Gen (GOI) enthält, werden einige Platten auf Luria-Bertani (LB)-Platten, die die entsprechenden Antibiotika (50 mg/L) für das interessierende Plasmid enthalten, gestreift und über Nacht bei 30 °C inkubiert. Wenn Sie Spectinomycin verwenden, fügen Sie eine Konzentration von 100 mg/l hinzu.</li>
	<li>Verwenden Sie eine P200-Pipettenspitze, um eine ~1,5 cm lange Länge des K599 Agrobacterium von den LB-Platten abzukratzen, und resuspendieren Sie die Zellen in 1 ml Phosphatpuffer (PB; 0,01 M Na2HPO4, 0,15 M NaCl, pH 7,5).</li>
	<li>Das Agrobakterium wird in sterilisiertem, hochreinemH2O(v/v = 1:1) und Acetosyringon (AS; 100 mM Vorrat an Dimethylsulfoxid [DMSO], v/v = 1:1000) verdünnt. Messen Sie die Absorption mit einer Küvettenröhre bei einer optischen Dichte von 600 nm (OD600). Der erwartete optimale Bereich liegt zwischen 0,5 und 0,8.</li>
	<li>Tauchen Sie in einer Biosicherheitswerkbank ein sterilisiertes Skalpell in die K599 Agrobacterium-Lösung und machen Sie mehrere 1 mm tiefe Schnitte entlang der Innenfläche (adaxial, flache Seite) des Keimblatts. Verwenden Sie während der Impfung eine sterilisierte Pinzette, um das Keimblatt zu stabilisieren.</li>
	<li>Legen Sie etwa 6-8 Keimblätter mit der Schnittseite nach unten auf eine Petrischale mit Filterpapier, das mit GC-Medium mit AS getränkt ist. Anmerkungen: Für die Herstellung von 6 Platten sind 50 ml GC-Medium und 50 μl 100 mM AS ausreichend, um eine Endkonzentration von 100 μM zu erreichen.</li>
	<li>Inkubieren Sie die Platten bei RT (25 °C) für 3 Tage unter einer 16-stündigen Photoperiode (~65 μE).</li>
	<li>Übertragen Sie die infizierten Keimblätter auf haarige Wurzelwachstumsplatten (HRG) (Autoklav halbstarke MS mit 3% Saccharose [pH = 5,8] und 2,6 g/L Gelzan, dann 2,5 ml/l Vitaminmischung und 500 mg/L Timentin). HINWEIS: Es gab einige Probleme mit Timentin von einigen alternativen Anbietern, von denen der K599 nicht beseitigt wurde. Es wird empfohlen, höhere Petrischalen (100 mm x 25 mm) für HRG-Medium zu verwenden.</li>
	<li>Inkubieren Sie die HRG-Platten bei 22 °C in einer Wachstumskammer mit den Parametern auf 100 μE Licht bei einer 16-stündigen Photoperiode, bis Primärwurzeln mit Sekundärwurzeln von 2-3 cm Länge beobachtet werden (~3-4 Wochen).</li>
</ol>3. Auswahl und Ernte von HRs
<ol><li>Ernten Sie Primärwurzeln (5-7 cm lang), die aus der Hornhaut wachsen und Sekundärwurzeln (2-3 cm lang) enthalten, mit einem sterilen Skalpell und einer Pinzette. Übertragen Sie auf ausgewählte HRG-Platten, die die entsprechenden Antibiotika enthalten. Lassen Sie die HRs noch 5 Tage auf den ausgewählten HRG-Platten wachsen. HINWEIS: Kanamycin (50 mg/l), Hygromycin (50 mg/l) oder Phosphinothricin (10 mg/l) werden in der Regel zur Auswahl verwendet. Für Expressionsvektoren wird pGWB2 für die Überexpression, pANDA35HK für das RNAi-Silencing, pGWB6 für die subzelluläre Lokalisation und pMDC7 für die induzierbare Expression verwendet.</li>
	<li>Ernten Sie an Tag 5 transgene HRs mit Sekundärwurzeln von 3-6 cm Länge. Bei der Beobachtung fluoreszierender Proteine weisen die Sekundärwurzeln wenig Autofluoreszenz auf. Wenn Sie Elizitor oder chemische Behandlungen durchführen, schneiden Sie die Sekundärwurzeln in 1 cm große Stücke und legen Sie ~100 mg auf HRG-Agar auf einen Haufen. Tränken Sie dann die Stapel mit 80 μl der entsprechenden Behandlung und lassen Sie die Platten bei RT (25 °C) inkubieren.</li>
	<li>Fahren Sie nach der gewünschten Behandlungszeit mit der Extraktion von RNA oder Metaboliten fort.</li>
	<li>Für RNA tupfen Sie die Wurzeln schnell auf einem sterilisierten Papiertuch trocken und ernten Sie sie direkt in ein 2-ml-Mikrozentrifugenröhrchen.</li>
	<li>Versiegeln Sie die Oberseite der Tube sofort mit Parafilm, bohren Sie zwei kleine Löcher mit einer spitzen Pinzette und tauchen Sie die Röhren in flüssigen Stickstoff. 3 Tage gefriertrocknen, dann die Proben bei -80 °C lagern. HINWEIS: Es ist wichtig, HRs auszuwählen, die weiß sind. Nach 5 Tagen Wachstum auf der selektiven Platte bleiben transgene HRs weiß, aber nicht-transgene Wurzeln werden braun.</li>
</ol>

Hocheffiziente Produktion von transgenen Sojabohnen-Haarwurzeln

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</ol>

Die Autoren haben nichts zu verraten.

In den letzten zehn Jahren wurde die HR-Methode der Sojabohne als leistungsfähiges Werkzeug entwickelt, um Gene zu untersuchen, die an der Stickstofffixierung 22,23, der biotischen und abiotischen Stresstoleranz 24,25 und den Biosynthesewegen von Metaboliten beteiligt sind 26,27. Das Wissen darüber, wie Pflanzen Metaboliten produzieren, hat eine F...

Sojabohnen (Glycine max) gehören zu den wertvollsten Nutzpflanzen in der Landwirtschaft. Es hat Tausende von kommerziellen und industriellen Verwendungszwecken, wie z. B. Lebensmittel, Tierfutter, Öl und als Rohstoffquelle für die Herstellung1. Seine Fähigkeit, eine symbiotische Beziehung mit stickstofffixierenden Bodenmikroorganismen, insbesondere Rhizobien, einzugehen, erhöht die Bedeutung der Untersuchung der Sojabohnengenetikweiter 2. So kann beispielsweise die Feinabstimmung der Stickstofffixierungseigenschaften in Sojabohnenwurzeln zu einer Verringerung der Kohlenstoffemissionen führen und den Bedarf an Stickstoffdünger erheblich senken3. Daher hat das Verständnis der Genetik, die insbesondere Aspekte der Biologie der Sojabohnenwurzel steuert, breite Anwendungen in der Landwirtschaft und Industrie. In Anbetracht dieser Vorteile ist es wichtig, ein zuverlässiges Protokoll zur Analyse der Funktion von Sojabohnengenen zu haben.
Agrobacterium tumefaciens ist vielleicht das am häufigsten verwendete Werkzeug für die genetische Transformation von Pflanzen, da es in der Lage ist, Transfer-DNA (T-DNA) in das Kerngenom vieler Pflanzenarten zu integrieren. Wenn Agrobacterium eine Pflanze infiziert, überträgt es das tumorinduzierende (Ti) Plasmid in das Wirtschromosom, was zur Bildung eines Tumors an der Infektionsstelle führt. Die Agrobacterium-vermittelte Transformation wird seit Jahrzehnten häufig für die Genfunktionsanalyse und zur Modifikation von Pflanzenmerkmalen eingesetzt4. Obwohl jedes interessierende Gen durch A. tumefaciens-vermittelte Transformation leicht in Wirtspflanzenzellen übertragen werden kann, hat diese Methode mehrere Nachteile. Es ist zeitaufwändig, teuer und erfordert für viele Pflanzenarten, wie z. B. Sojabohnen, umfangreiches Fachwissen. Obwohl einige Sojabohnensorten durch den Keimblattknotenansatz unter Verwendung von A. tumefaciens transformiert werden können, erfordert die Ineffizienz dieses Ansatzes die Notwendigkeit einer alternativen genetischen Transformationstechnologie, die schnell und hocheffizient ist 4,5. Auch ein Laie kann diese Agrobacterium rhizogenes-vermittelte Haarwurzel-Transformationsmethode (HR) anwenden, um diese Nachteile zu überwinden.
Die HR-Transformation ist ein relativ schnelles Werkzeug, nicht nur für die Analyse der Genfunktion, sondern auch für biotechnologische Anwendungen, wie die Herstellung von spezialisierten Metaboliten und Feinchemikalien sowie komplexer bioaktiver Glykoproteine6. Die Herstellung von Sojabohnen-HRs erfordert kein umfangreiches Fachwissen, da sie durch Verwundung der Oberflächen von Keimblättern und anschließender Inokulation mit Agrobacterium rhizogenes7 erzeugt werden können. A. rhizogenes exprimiert Virulenzgene (Vir), die durch sein Ti-Plasmid kodiert werden, das seinen T-DNA-Abschnitt in das Genom von Pflanzenzellen überträgt, trägt und integriert und gleichzeitig das Wachstum der ektopischen Wurzeln stimuliert8.
Im Vergleich zu anderen Genexpressionssystemen für Sojabohnen, wie z. B. der Biolistik oder der A. tumefaciens-basierten Transformation von Gewebe-, Zell- und Organkulturen, weist das HR-Expressionssystem mehrere Vorteile auf. Erstens sind HRs genetisch stabil und werden schnell auf hormonfreien Medien produziert 1,9,10. Darüber hinaus können HRs spezialisierte Metaboliten in Mengen produzieren, die den nativen Wurzeln entsprechen oder diese überschreiten11,12. Diese Vorteile machen HRs zu einem wünschenswerten biotechnologischen Werkzeug für Pflanzenarten, die mit A. tumefaciens nicht kompatibel sind oder die spezielle Gewebekulturbedingungen benötigen, um kompatible Gewebe zu bilden. Die HR-Methode ist ein effizienter Ansatz zur Analyse von Protein-Protein-Interaktionen, der subzellulären Lokalisierung von Proteinen, der rekombinanten Proteinproduktion, der Phytoremediation, der Mutagenese und genomweiten Effekten unter Verwendung der RNA-Sequenzierung13,14,15. Es kann auch verwendet werden, um die Produktion spezialisierter Metaboliten zu untersuchen, die in der Industrie von Wert sind, einschließlich Glyceollinen, die die Abwehr von Sojabohnen gegen den wichtigen mikrobiellen Krankheitserreger Phytophthora sojae behandeln und beim Menschen beeindruckende krebshemmende und neuroprotektive Wirkungen haben16,17.
Dieser Bericht demonstriert ein einfaches, effizientes Protokoll zur Herstellung von HRs für Sojabohnen. Im Vergleich zu früheren HR-Transformationsmethoden bietet dieses Protokoll eine signifikante (33%-50%) Verbesserung der HR-Bildung, indem A. rhizogenes-Transformanten vor der Inokulation von Sojabohnen-Keimblättern auf das Vorhandensein des Ti-Plasmids voruntersucht werden. Wir demonstrieren die Anwendbarkeit dieses Protokolls, indem wir mehrere binäre Vektoren transformieren, die Sojabohnen-Transkriptionsfaktor-Gene überexprimieren oder stilllegen.

<table><tbody><tr><td>Acetosyringon</td><td>Cayman</td><td>23224</td><td></td></tr><tr><td>Bleichmittel</td><td>lavo</td><td>21124</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Fisher Bioreagenzien</td><td>195679</td><td></td></tr><tr><td>Gelzan</td><td>Phytotech</td><td>HYY3251089A</td><td></td></tr><tr><td>Hygromycin</td><td>Phytotech</td><td>HHA0397050B</td><td></td></tr><tr><td>Isopropylalkohol</td><td>Fisher chemisches</td><td>206462</td><td></td></tr><tr><td>Kanamycin</td><td>Phytotech</td><td>SQS0378007G</td><td></td></tr><tr><td>LB Pulver</td><td>Fisher Bioreagenzien</td><td>200318</td><td></td></tr><tr><td>MS Pulver</td><td>Caisson Labore</td><td>2210001</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Fisher Bioreagenzien</td><td>194171</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher chemische</td><td>192946</td><td></td></tr><tr><td>Petrischalen</td><td>Fisherbrand</td><td>08-757-11</td><td>100 mm x 25 mm</td></tr><tr><td>Phosphinothricin</td><td>Cedarlan</td><td>P034-250MG</td><td></td></tr><tr><td>REDExtract-N-Amp PCR Kit</td><td>Sigma</td><td>R4775</td><td></td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>Bioshop</td><td>2D76475</td><td></td></tr><tr><td>Timentin</td><td>Caisson Labore</td><td>12222002</td><td></td></tr><tr><td>Vitamine</td><td>Caisson Labore</td><td>2211010</td><td></td></tr></tbody></table>

sojabohnen-haarwurzeltransformation zur analyse der genfunktion

Soybean Hairy Root Transformation for the Analysis of Gene Function

Sojabohnen (Glycine max) sind eine wertvolle Nutzpflanze in der Landwirtschaft, die Tausende von industriellen Anwendungen hat. Sojabohnenwurzeln sind der primäre Ort der Interaktion mit bodenbürtigen Mikroben, die eine Symbiose eingehen, um Stickstoff und Krankheitserreger zu fixieren, was die Erforschung der Sojabohnenwurzelgenetik von größter Bedeutung für die Verbesserung der landwirtschaftlichen Produktion macht. Die genetische Transformation von Sojabohnenwurzeln (HRs) wird durch den Agrobacterium rhizogenes-Stamm NCPPB2659 (K599) vermittelt und ist ein effizientes Werkzeug zur Untersuchung der Genfunktion in Sojabohnenwurzeln, das von Anfang bis Ende nur 2 Monate dauert. Hier stellen wir ein detailliertes Protokoll zur Verfügung, das die Methode zur Überexpression und zum Ausschalten eines Gens von Interesse in Sojabohnen-HRs beschreibt. Diese Methodik umfasst die Sterilisation von Sojabohnensaatgut, die Infektion von Keimblättern mit K599 sowie die Auswahl und Ernte genetisch transformierter HRs für die RNA-Isolierung und, falls erforderlich, Metabolitenanalysen. Der Durchsatz des Ansatzes reicht aus, um mehrere Gene oder Netzwerke gleichzeitig zu untersuchen und könnte die optimalen Engineering-Strategien bestimmen, bevor man sich auf langfristig stabile Transformationsansätze festlegt.

Die repräsentativen Ergebnisse stammen aus den veröffentlichten Daten19,20. Die Ergebnisse der Kolonie-PCR (cPCR) des transformierten K599 Agrobacterium sind in Abbildung 1 dargestellt. Wie die positiven Kolonien in Abbildung 1 zeigen, wurde das interessierende Gen mittels cPCR nachgewiesen (Abbildung 1A). Ein Drittel bis die Hälfte der Kolonien waren jedoch negativ...

Hier stellen wir ein Protokoll für die hocheffiziente Produktion von transgenen Sojabohnen-Haarwurzeln vor.

Sojabohnen-Haarwurzeltransformation zur Analyse der Genfunktion

Soybean (Glycine max) is a valuable crop in agriculture that has thousands of industrial uses. Soybean roots are the primary site of interaction with ...

Unsere Sojabohnen-Haarwurzel-Transformationsmethode reicht aus, um die Funktionen mehrerer Gene oder Netzwerke gleichzeitig zu untersuchen und könnte die optimalen Engineering-Strategien bestimmen, bevor man sich auf langfristig stabile Transformationsansätze festlegt. Die Behaarungswurzeltransformation von Sojabohnen ist ein nützliches Werkzeug für die Analyse der Genfunktion in Sojabohnenpflanzen. Zu den Technologien, die derzeit verwendet werden, gehören CRISPR-Cas9-Genomeditierung, RNA-Interferenz, Transkriptomik und Proteomik sowie Bildgebungstechnologien.Die größte Herausforderung im Modellzeitalter der funktionellen Genomik besteht darin, die Funktion zahlreicher Gene ausreichend zu analysieren. Die meisten Gene sind polygen und werden durch das Zusammenspiel vieler Gene erreicht. Unser Haarwurzel-Protokoll wird die Analyse von Genfunktionen mit ausreichendem Durchsatz ermöglichen, so dass polygene Netzwerke allmählich verstanden werden können.Wir haben die Bedeutung des Ti-Plasmids in Agrobacterium rhizogene Stämmen festgestellt. Wir fanden heraus, dass ohne Screening auf das Ti-Plasmid das Risiko für das transformierte Sojabohnenkeimblatt erhöht wurde, keine Farbstoffe zu

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Research

Forschung

JoVE Journal

Bioengineering

Biotechnik

Promoter-Expressionsanalysen sind entscheidend für besseres Verständnis der Genregulation und der raumzeitlichen Ausdruck der Zielgene. Hier präsentieren wir ein Protokoll, um zu identifizieren, zu isolieren und zu klonen einen Pflanzen-Promotor. Darüber hinaus beschreiben wir die Charakterisierung des Knötchen-spezifischen Promotors in den gemeinsamen Bohne behaarte Wurzeln.

Pflanzenanalysen Promoter: Identifizierung und Charakterisierung der Root Knoten bestimmten Promoter in die Gartenbohne

Wir entwickelten ein einfaches und effizientes Protokoll für die Herstellung großer Mengen von Soja Protoplasten, komplexe regulatorische und Signalisierung Mechanismen in lebenden Zellen zu studieren.

Eine einfache Methode zur Isolierung der Sojabohne Protoplasten und Anwendung auf vorübergehende Genexpressionsanalysen

Wir beschreiben eine Methode zur Induktion haariger Wurzeln von Agrobacterium rhizogenes-vermittelte Transformation in Tartary Buchweizen (Fagopyrum tataricum). Dies kann verwendet werden, um Genfunktionen und die Produktion von sekundären Metaboliten in Tartary Buchweizen zu untersuchen, für jede genetische Transformation angenommen werden, oder für andere Heilpflanzen nach Verbesserung verwendet werden.

Induzieren hairy Roots von Agrobacterium rhizogenes-Mediated Transformation in Tartary Buchweizen (Fagopyrum tataricum)

Hier stellen wir das detaillierte Protokoll einer einstufigen Transformationsmethode zur Verfügung, die durch Agrobacterium tumefaciens zur Herstellung von Mischpflanzen vermittelt wird.

Eine effiziente und reproduzierbare Methode zur Herstellung von Kompositpflanzen durch Agrobacterium rhizogenes-basierte Haarwurzeltransformation

Das Protokoll beschreibt die Induktion der Haarwurzel unter Verwendung von primären Arabidopsis-Blütenstandsstämmen und Brassica napus-Hypokotylen . Die Haarwurzeln können kultiviert und als Explantate zur Regeneration transgener Pflanzen verwendet werden.

Haarwurzeltransformation und -regeneration bei Arabidopsis thaliana und Brassica napus

Dies ist eine Schritt-für-Schritt-Anleitung zeigt den Zweck, den Betrieb und repräsentative Ergebnisse aus dem Roman Gravitationskraft Spektrometer.

Demonstration der Verwendung des neuartigen Gravitationskraft Spectrometer auf Stretch and Measure Faserproteinen

Dieser Artikel enthält ein Protokoll für die Kultivierung von Arabidopsis-Keimlinge in der RootChip, ein Mikrofluidik-Imaging-Plattform, die eine automatisierte Kontrolle der Wachstumsbedingungen kombiniert mit mikroskopischen Wurzel Überwachungs-und FRET-basierten Messung der intrazellulären Metaboliten.

Zeitraffer-Fluoreszenz-Imaging von Arabidopsis Wurzelwachstum mit Rapid Manipulation der Root-Umgebung mit dem RootChip

Ein Protokoll für Nanopartikel Tracking-Analyse (NTA) und High-Throughput-Durchflusszytometrie, polymere Gentransfer Nanopartikel evaluieren beschrieben. NTA eingesetzt wird, um die Nanopartikel Teilchengrößenverteilung und das Plasmid pro Teilchenverteilung charakterisieren. High-throughput Durchflusszytometrie erlaubt die quantitative Transfektion Wirksamkeitsnachweis für eine Bibliothek der Gentransfer Biomaterialien.

Evaluation von polymeren Gene Delivery-Nanopartikeln durch Nanopartikel Tracking-Analyse und High-throughput Durchflusszytometrie

Dieses Protokoll Bewertungen Elektro Zell-Substrat-Impedance Sensing, eine Methode zur Quantifizierung der Zellhaftung, Proliferation, Motilität und zellulären Antworten auf pharmakologische und toxische Stimuli erfassen und analysieren die Impedanzspektrum von adhärenten Zellen. Nachweis endothelialer Permeabilität und Bewertung der Zell-Zell-und Zell-Substrat-Kontakte sind hervorgehoben.

Elektro-Zell-Substrat-Impedance Sensing zur Quantifizierung der endothelialen Proliferation, Barrierefunktion und Beweglichkeit

Ein Doppelstrang-RNA-Interferenz (dsRNAi)-Technik wird eingesetzt, um nach unten zu regulieren den Mais Cinnamoyl Coenzym A-Reduktase (ZmCCR1)-Gen zu niedrigeren Pflanzen Ligningehalt. Lignin Down-Regulation aus der Zellwand wird durch mikroskopische Analysen visualisiert und durch die Klason Verfahren quantifiziert. Änderungen der Zusammensetzung in kristalliner Cellulose und Hemicellulose werden analysiert.

Lignin Herunterregulierung<em&gt; Zea mays</em&gt; Über dsRNAi und Klason Lignin Analyse

Erfahren Sie die Haarwurzeltransformation von Sojabohnen zur Analyse von Genfunktionen. Diese Methode ermöglicht die gleichzeitige Untersuchung mehrerer Gene und polygener Netzwerke in Glycine max.

Sojabohnen-Haarwurzeltransformation zur Analyse der Genfunktion

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