Name: Iteratives Bleaching erweitert die Multiplizität durch den Einsatz von Färbeautomatisierung für Core-Anlagen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 52 s
Description: Lernen Sie die IBEX-Methode für verbesserte Gewebebildgebung in der Neurowissenschaft mit automatisierten Färbeautomaten. Diese Technik optimiert Tyramid-Signalverstärkung und steigert Reproduzierbarkeit sowie Nachweisempfindlichkeit erheblich.

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<ol><li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IBEX%3A+an+iterative+immunolabeling+and+chemical+bleaching+method+for+high-content+imaging+of+diverse+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protoc%22%5BJournal%5D)">IBEX: an iterative immunolabeling and chemical bleaching method for high-content imaging of diverse tissues.</a> Nature Protoc. 17 (2), 378-401 (2022).</li>
<li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IBEX%3A+A+versatile+multiplex+optical+imaging+approach+for+deep+phenotyping+and+spatial+analysis+of+cells+in+complex+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">IBEX: A versatile multiplex optical imaging approach for deep phenotyping and spatial analysis of cells in complex tissues.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 117 (52), 33455-33465 (2020).</li>
<li>Prichard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+automated+immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Pathol+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">Overview of automated immunohistochemistry.</a> Arch Pathol Lab Med. 138, 1578-1582 (2014).</li>
<li>Stack, E. C., Wang, C., Roman, K. A., Hoyt, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+immunohistochemistry%2C+imaging%2C+and+quantitation%3A+a+review%2C+with+an+assessment+of+Tyramide+signal+amplification%2C+multispectral+imaging+and+multiplex+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Multiplexed immunohistochemistry, imaging, and quantitation: a review, with an assessment of Tyramide signal amplification, multispectral imaging and multiplex analysis.</a> Methods. 70, 46-58 (2014).</li>
<li>Speranza, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+differences+in+immune+dynamics+during+SARS-CoV-2+infection+in+rhesus+macaques%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci+Alliance%22%5BJournal%5D)">Age-related differences in immune dynamics during SARS-CoV-2 infection in rhesus macaques.</a> Life Sci Alliance. 5, 4(2022).</li>
<li>Parra, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procedural+requirements+and+recommendations+for+multiplex+immunofluorescence+tyramide+signal+amplification+assays+to+support+translational+oncology+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Procedural requirements and recommendations for multiplex immunofluorescence tyramide signal amplification assays to support translational oncology studies.</a> Cancers (Basel). 12 (2), 255(2020).</li>
<li>Hoyt, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+immunofluorescence+and+multispectral+imaging%3A+forming+the+Basis+of+a+clinical+test+platform+for+immuno-oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Biosci%22%5BJournal%5D)">Multiplex immunofluorescence and multispectral imaging: forming the Basis of a clinical test platform for immuno-oncology.</a> Front Mol Biosci. 8, 674747(2021).</li>
<li>Bankhead, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((QuPath%3A+Open+source+software+for+digital+pathology+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">QuPath: Open source software for digital pathology image analysis.</a> Sci Rep. 7, 16878(2017).</li>
<li>Feng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+analysis+with+SPIAT+and+spaSim+to+characterize+and+simulate+tissue+microenvironments%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Spatial analysis with SPIAT and spaSim to characterize and simulate tissue microenvironments.</a> Nat Commun. 14, 2697(2023).</li>
<li>Meyer, L., Eling, N., Bodenmiller, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cytoviewer%3A+an+R%2FBioconductor+package+for+interactive+visualization+and+exploration+of+highly+multiplexed+imaging+data%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">cytoviewer: an R/Bioconductor package for interactive visualization and exploration of highly multiplexed imaging data.</a> BMC Bioinformatics. 25, 9(2024).</li>
<li>Windhager, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+end-to-end+workflow+for+multiplexed+image+processing+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">An end-to-end workflow for multiplexed image processing and analysis.</a> Nat Protoc. 18 (11), 3565-3613 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Verfärbungsreagenz Alexa TSA-Kits</td><td>ThermoFisher</td><td></td><td>Alternative TSA-Farbstoffe, falls Opalmikroskopiefilter nicht verfügbar sind. Dazu gehören Alexa Fluor 488 (blau/grüner Kanal), Alexa Fluor 555 oder 568 (roter Kanal), Alexa Fluor 647 (fernroter Kanal), Alexa Fluor 750 (nahe infrarot, wenn mit geeigneten Filtern ausgestattet).</td></tr><tr><td>Antikörper Arg1</td><td>Zellsignalübertragung</td><td>93668</td><td>Verwendet in Abbildung 4 bei 1:100</td></tr><tr><td>Material Klingen</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>Oder ähnlich: Hoch- oder Niedrigprofil hängt vom Gewebetyp ab</td></tr><tr><td>Antikörper CD11b</td><td>Abcam</td><td>ab133357</td><td>Verwendet in Abbildung 4 bei 1:2000</td></tr><tr><td>Antikörper CD163</td><td>Abcam</td><td>ab182422</td><td>Verwendet in Abbildung 4 bei 1:500</td></tr><tr><td>Antikörper CD31</td><td>Zellsignalübertragung</td><td>77699S</td><td>Verwendet in Abbildung 2 bei 1:100</td></tr><tr><td>Antikörper CD3e</td><td>Dako</td><td>A045201-2</td><td>Verwendet in Abbildung 1 bei 1:100</td></tr><tr><td>Tool Coplin Jar</td><td>Fischer Scientific</td><td>01-816-21</td><td>Oder Ähnliches</td></tr><tr><td>Material Deckblätter</td><td>VWR</td><td>v48393-026</td><td>Oder Ähnliches</td></tr><tr><td>Antikörper CX3CR1</td><td>Abcam</td><td>ab308613</td><td>Verwendet in Abbildung 4 bei 1:450</td></tr><tr><td>Stain DAPI</td><td>Akoya</td><td>FP1490</td><td></td></tr><tr><td>Software FIJI</td><td></td><td></td><td>Verwendet zur Messung der Signalintensität</td></tr><tr><td>Slide Fisher Superfront Slides</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-037-246</td><td>Oder ähnlich</td></tr><tr><td>Software HALO</td><td>Indica Labs</td><td></td><td>Beispiel für kommerziell verfügbare Bildanalyse-Software. Wird verwendet, um Bilder auszurichten und zu analysieren.</td></tr><tr><td>Antikörper Iba1</td><td>Zellsignalübertragung</td><td>17191</td><td>Verwendet in Abbildung 4 bei 1:800</td></tr><tr><td>Software inForm</td><td>Akoya</td><td></td><td>Verwendet zur Messung der Signalintensität</td></tr><tr><td>Antikörper iNOS</td><td>Abcam</td><td>ab283655</td><td>Verwendet in Abbildung 4 bei 1:400</td></tr><tr><td>Instrument Leica Bond Rx (oder RXm)</td><td>Leica Biosystems</td><td>21.2201</td><td>Im Text als "Autostainer 1" bezeichnet. Stellen Sie sicher, dass alle zugehörigen Reagenzien ebenfalls verfügbar sind, einschließlich Färbungsboxen und Massenlösungen.&nbsp;</td></tr><tr><td>Reagenz LiBH4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>62460-5G-F</td><td>In einer wasserfreien Umgebung halten</td></tr><tr><td>Instrument Mantra Snap</td><td>Akoya</td><td></td><td>Ein multispektrales Mehlzenzmikroskop ist erforderlich, um die Farbstoffe zu erkennen. Beispiel-Mikroskop, mit dem Opalfarben nachgewiesen werden kann.</td></tr><tr><td>Tool Microtome</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>Oder ähnlich mit bevorzugtem Zubehör wie Pinseln</td></tr><tr><td>Färbereagenz Opal IHC 480 Kit</td><td>Akoya</td><td>FP1500001KT</td><td>Verwendet in Abbildung 4</td></tr><tr><td>Färbereagenz Opal IHC 6-plex Plex Kit</td><td>Akoya</td><td>NEL821001KT</td><td>520 und 620 werden nicht gebleicht, wie sie in Abbildung 1, 2 und 4 verwendet werden</td></tr><tr><td>Färbereagenz Opal IHC 780 Kit</td><td>Akoya</td><td>FP1501001KT</td><td>Verwendet in Abbildung 4</td></tr><tr><td>Tool Ofen</td><td>Millipore Sigma</td><td>Z683329</td><td>Oder Ähnliches, das kann auch mit Autostainer gemacht werden</td></tr><tr><td>Antikörper Pancytokeratin</td><td>Abcam</td><td>ab9377</td><td>Verwendet in Abbildung 4 bei 1:50</td></tr><tr><td>Reagenz PBS (optional)</td><td>Fisher Scientific</td><td>AAJ61196AP</td><td></td></tr><tr><td>Instrument PhenoImager</td><td>Akoya</td><td></td><td>Multispektrale Gesamtbildabbildung mit integrierter spektraler Entmischung in der Software enthalten</td></tr><tr><td>Reagenz ProLong Gold Antifade</td><td>Fisher Scientific</td><td>P36961</td><td>Oder ähnliche wässrige Montagemedien</td></tr><tr><td>Antikörper ProSP-C n-terminal (ProSPC)</td><td>Seven Hills Bioreagenzien</td><td>WRAB-9337</td><td>Verwendet in Abbildung 4 bei 1:250</td></tr><tr><td>Antikörper RAGE</td><td>R& D</td><td>MAB1179</td><td>Verwendet in Abbildung 1 und 2 bei 1:50</td></tr><tr><td>Reagenz Reaktionspuffer</td><td>Roche</td><td>NC1895692</td><td>Zur Verwendung mit Ventana Autostainer</td></tr><tr><td>Antikörper SARS-CoV-2-N</td><td>Zellsignalübertragung</td><td>68344</td><td>Verwendet in Abbildung 2 bei 1:1000</td></tr><tr><td>Slide TOMO Adhesion CC Microscope Slides-WH</td><td>Avantik</td><td>SKUSL6519-1</td><td>Ob Gewebehaftung ein Problem ist</td></tr><tr><td>Instrument Ventana Discovery Ultra</td><td>Roche</td><td></td><td>Im Text als "Autostainer 2" bezeichnet. Stellen Sie sicher, dass alle zugehörigen Reagenzien ebenfalls verfügbar sind, einschließlich Färbungsboxen und Massenlösungen.&nbsp;</td></tr><tr><td>Reagenz Waschpuffer</td><td>Leica Biosystems</td><td>AR9590</td><td>Zur Verwendung mit Leica Bond Autostainer</td></tr><tr><td>Reagenz Wasser</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-230-147</td><td>DI ist am besten, nicht Millipore</td></tr><tr><td>Tool Wasserbad</td><td>Leica Biosystems</td><td>140607020C1</td><td>Oder Ähnliches</td></tr></tbody></table>

iteratives bleaching erweitert die multiplizität durch den einsatz von färbeautomatisierung für core-anlagen

Iterative Bleaching Extends Multiplicity with Use of Staining Automation for Core Facilities

Iteratives Bleaching erweitert die Multiplizität durch den Einsatz von Färbeautomatisierung für Core-Anlagen

Iterative Bleaching Extends Multiplicity (IBEX) is a highly sensitive tyramide signal amplification (TSA)-based multi-round fluorescence imaging technique ...

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Iteratives Bleaching erweitert die Multiplizität durch den Einsatz von Färbeautomatisierung für Core-Anlagen

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