Name: Nicht-virales Engineering von primären humanen T-Zellen durch Homologie-vermittelte Endverknüpfung und gezielte Integration großer DNA-Templates (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-09T14:50:00.000+00:00
Duration: 6 min 10 s
Description: Erfahren Sie die nicht-virale CRISPR/Cas9-basierte T-Zell-Engineering-Methode für Immuntherapieanwendungen mit primären humanen T-Zellen. Dieses Protokoll ermöglicht effiziente Integration großer DNA-Templates bei erhaltener Funktionalität.

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<ol><li>Sun, L., Su, Y., Jiao, A., Wang, X., Zhang, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cells+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">T cells in health and disease.</a> Signal Transduct Target Ther. 8 (1), 235(2023).</li>
<li>Takahama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Journey+through+the+thymus%3A+stromal+guides+for+T-cell+development+and+selection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Immunology%22%5BJournal%5D)">Journey through the thymus: stromal guides for T-cell development and selection.</a> Nature reviews. Immunology. 6 (2), 127-135 (2006).</li>
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<li>DeRenzo, C., Gottschalk, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+modification+strategies+to+enhance+CAR+T+cell+persistence+for+patients+with+solid+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Genetic modification strategies to enhance CAR T cell persistence for patients with solid tumors.</a> Front Immunol. 10, 218(2019).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+chimeric+switch-receptor+targeting+PD1+augments+the+efficacy+of+second-generation+CAR+T+cells+in+advanced+solid+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A chimeric switch-receptor targeting PD1 augments the efficacy of second-generation CAR T cells in advanced solid tumors.</a> Cancer Res. 76 (6), 1578-1590 (2016).</li>
<li>Yeku, O. O., Purdon, T. J., Koneru, M., Spriggs, D., Brentjens, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Armored+CAR+T+cells+enhance+anti-tumor+efficacy+and+overcome+the+tumor+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Armored CAR T cells enhance anti-tumor efficacy and overcome the tumor microenvironment.</a> Sci Rep. 7 (1), 10541(2017).</li>
<li>Schober, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+replacement+of+T-cell+receptor+%CE%B1-+and+%CE%B2-chains+with+preservation+of+near-physiological+T-cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Orthotopic replacement of T-cell receptor α- and β-chains with preservation of near-physiological T-cell function.</a> Nat Biomed Eng. 3 (12), 974-984 (2019).</li>
<li>Roth, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reprogramming+human+T+cell+function+and+specificity+with+non-viral+genome+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Reprogramming human T cell function and specificity with non-viral genome targeting.</a> Nature. 559 (7714), 405-409 (2018).</li>
<li>Chandran, S. S., Klebanoff, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+receptor-based+cancer+immunotherapy%3A+Emerging+efficacy+and+pathways+of+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">T cell receptor-based cancer immunotherapy: Emerging efficacy and pathways of resistance.</a> Immunol Rev. 290 (1), 127-147 (2019).</li>
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<li>Campoli, M., Ferrone, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HLA+antigen+and+NK+cell+activating+ligand+expression+in+malignant+cells%3A+a+story+of+loss+or+acquisition%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">HLA antigen and NK cell activating ligand expression in malignant cells: a story of loss or acquisition.</a> Semin Immunopathol. 33 (4), 321-334 (2011).</li>
<li>Walther, W., Stein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+vectors+for+gene+transfer%3A+a+review+of+their+use+in+the+treatment+of+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Drugs%22%5BJournal%5D)">Viral vectors for gene transfer: a review of their use in the treatment of human diseases.</a> Drugs. 60 (2), 249-271 (2000).</li>
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<li>Johnson, M. J., Laoharawee, K., Lahr, W. S., Webber, B. R., Moriarity, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+of+primary+human+B+cells+with+CRISPR%2FCas9+targeted+nuclease%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Engineering of primary human B cells with CRISPR/Cas9 targeted nuclease.</a> Sci Rep. 8 (1), 12144(2018).</li>
<li>Nguyen, D. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymer-stabilized+Cas9+nanoparticles+and+modified+repair+templates+increase+genome+editing+efficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Polymer-stabilized Cas9 nanoparticles and modified repair templates increase genome editing efficiency.</a> Nat Biotechnol. 38 (1), 44-49 (2020).</li>
<li>Lock, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated%2C+scaled%2C+transposon-based+production+of+CAR+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother+Cancer%22%5BJournal%5D)">Automated, scaled, transposon-based production of CAR T cells.</a> J Immunother Cancer. 10 (9), e005189(2022).</li>
<li>Semenova, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+cytosolic+DNA+sensors+bind+plasmid+DNA+after+transfection%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Multiple cytosolic DNA sensors bind plasmid DNA after transfection.</a> Nucleic Acids Res. 47 (19), 10235-10246 (2019).</li>
<li>Wimberger, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+inhibition+of+DNA-PK+and+Pol%CF%B4+improves+integration+efficiency+and+precision+of+genome+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Comm%22%5BJournal%5D)">Simultaneous inhibition of DNA-PK and Polϴ improves integration efficiency and precision of genome editing.</a> Nat Comm. 14 (1), 4761(2023).</li>
<li>Monjezi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+CAR+T-cell+engineering+using+non-viral+Sleeping+Beauty+transposition+from+minicircle+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Enhanced CAR T-cell engineering using non-viral Sleeping Beauty transposition from minicircle vectors.</a> Leukemia. 31 (1), 186-194 (2017).</li>
<li>Kay, M. A., He, C. -Y., Chen, Z. -Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+system+for+production+of+minicircle+DNA+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A robust system for production of minicircle DNA vectors.</a> Nat Biotechnol. 28 (12), 1287-1289 (2010).</li>
<li>Webber, B. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cas9-induced+targeted+integration+of+large+DNA+payloads+in+primary+human+T+cells+via+homology-mediated+end-joining+DNA+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Cas9-induced targeted integration of large DNA payloads in primary human T cells via homology-mediated end-joining DNA repair.</a> Nat Biomed Eng. 8, 1553-1570 (2024).</li>
<li>Williams, J. A., Paez, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+cell+and+gene+therapy+safety+and+performance+using+next-generation+Nanoplasmid+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Nucleic+Acids%22%5BJournal%5D)">Improving cell and gene therapy safety and performance using next-generation Nanoplasmid vectors.</a> Mol Ther Nucleic Acids. 32, 494-503 (2023).</li>
<li>Wierson, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+targeted+integration+directed+by+short+homology+in+zebrafish+and+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Efficient targeted integration directed by short homology in zebrafish and mammalian cells.</a> eLife. 9, 53968(2020).</li>
<li>Hendel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemically+modified+guide+RNAs+enhance+CRISPR-Cas+genome+editing+in+human+primary+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Chemically modified guide RNAs enhance CRISPR-Cas genome editing in human primary cells.</a> Nat Biotechnol. 33 (9), 985-989 (2015).</li>
<li>Moretti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+past%2C+present%2C+and+future+of+non-viral+CAR+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">The past, present, and future of non-viral CAR T cells.</a> Front Immunol. 13, 867013(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Essigsäure</td><td>Millipore Sigma</td><td>A6283</td><td></td></tr><tr><td>1x DPBS, kein Calcium, kein</td><td>Magnesium Thermo Fisher Scientific</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>2,5% CTS Immunzell-Serumersatz</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A2596101</td><td></td></tr><tr><td>Amaxa P3 Primärzelle 4D-Nukleofaktor X Kit L</td><td>Lonza</td><td>V4XP-3024</td><td></td></tr><tr><td>Amaxa P3 Primärzelle 4D-Nukleofaktor X Kit S</td><td>Lonza</td><td>V4XP-3032</td><td></td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15561020</td><td></td></tr><tr><td>chemisch modifizierte Guide-RNAs</td><td>Integrierte DNA-Technologien</td><td>na</td><td>Kundenspezifisches Design</td></tr><tr><td>CleanCap Cas9 mRNA</td><td>Trilink</td><td>L-7206</td><td></td></tr><tr><td>CTS OpTmizer T-Zell-Expansionsmedium SFM +OpTmizer T-Zell-Expansionsergänzung</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A1048501</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>07900</td><td></td></tr><tr><td>Dynabeads Humaner T-Aktivator CD3/CD28&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11141D</td><td></td></tr><tr><td>DynaMag-2</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12321D</td><td></td></tr><tr><td>Human IL15</td><td>PeproTech</td><td>200-15</td><td></td></tr><tr><td>Human IL2</td><td>PeproTech</td><td>200-02&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Humanes IL7</td><td>PeproTech</td><td>200-07</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Thermo Scient.&nbsp;</td><td></td><td></td>25030081</tr><tr><td>Lonza 4D Nucelofektor&nbsp; Core</td><td>Lonza</td><td>AAF-1003B</td><td></td></tr><tr><td>Lonza 4D Nucelofektor&nbsp; X Unit</td><td>Lonza</td><td>AAF-1003X</td><td></td></tr><tr><td>Minicircle</td><td>System Biosciences</td><td>MN910A-1</td><td>Kundenspezifisches</td></tr><tr><td>Design N-Acetyl-L-Cystein</td><td>MiliporeSigma</td><td>A9165</td><td></td></tr><tr><td>Nanoplasmid</td><td>Aldevron</td><td>na</td><td>Kundenspezifisches Design</td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15-140-122</td><td></td></tr></tbody></table>

nicht-virales engineering von primären humanen t-zellen durch homologie-vermittelte endverknüpfung und gezielte integration großer dna-templates

Non-Viral Engineering of Primary Human T Cells via Homology-Mediated End-Joining Targeted Integration of Large DNA Templates

Hier wurde ein großes (&gt;6,3 kb) multicistronisches Template namens "Giant Minicircle"-Konstrukt mittels CRISPR/Cas9-Editierung in den TRAC-Locus in primären menschlichen T-Zellen integriert; eine TRAC-spezifische gRNA (TCTCTCAGCTGGGGC), die UgRNA und HMEJ-Nanoplasmid (Abbildung 2A) mit einer Erkrankung ohne TRAC-spezifische gRNA, die universelle gRNA und Cas9-mRNA, die als Negativkontrolle verwendet wurde. Proben, die das Giant Minicircle-Konstrukt, TRAC-spezifische gRNA, die universelle gRNA und Cas9-mRNA enthalten, hatten eine durchschnittliche Knock-in-Rate von 23,35 % bei der Messung der GFP-Expression (23,5 % ± 5,247), während die Negativkontrolle keine GFP-Expression zeigte (Abbildung 2B). Es gab keine signifikanten Unterschiede in der Faltenausdehnung (Abbildung 2C) und der Lebensfähigkeit (Abbildung 2D) zwischen den experimentellen Bedingungen. Diese Ergebnisse zeigen einen hocheffizienten Knock-in eines sehr großen Templates bei gleichzeitiger Beibehaltung einer hervorragenden Zellviabilität und Zellexpansion.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68150/68150fig01.jpg"> Abbildung 1: Schematische Darstellung des HMEJ-Konstruktdesigns. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68150/68150fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68150/68150fig02.jpg"> Abbildung 2: Charakterisierung von T-Zellen, die mit dem riesigen Minikreis-Konstrukt elektroporiert wurden. (A) Schematische Darstellung des Riesen-Minicircle-Konstrukts, einer großen (&gt;6,3 kb) multicistronischen Vorlage, die ein Anti-Mesothelin-CAR und RQR8 unter dem TRAC-Promotor mit einem GSG-Linker, einem Anti-CD19-CAR und einem DHFR-Mutein und eGFP unter dem MND-Promotor kodiert. (B) RQR8-Expressionsprozentsatz, (C) Faltenexpansion und (D) Lebensfähigkeit von T-Zellen neun Tage nach der Elektroporation mit dem Giant Minicircle-Konstrukt und CRISPR-Cas9-Reagenzien, verglichen mit einer negativen Kontrolle, die mit dem Giant Minicircle ohne CRISPR-Cas9-Reagenzien elektroporiert wurde. (***p &lt; 0,001). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68150/68150fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Plattengröße</td>
			<td>Volumen der Küvette</td>
			<td>Zellen/Vertiefung</td>
			<td>Volumen des Wiederherstellungsmediums</td>
			<td>Volumen von 1x TCM mit NAC</td>
			<td>Gesamtes Endvolumen</td>
		</tr><tr><td>24-Well-Platte</td>
			<td>22/22 μL</td>
			<td>1-3 x 106 cm</td>
			<td>300 μL</td>
			<td>680 μL</td>
			<td>1 mL</td>
		</tr><tr><td>6-Well-Platte</td>
			<td>100/110 μL</td>
			<td>4-20 x 106 cm</td>
			<td>1 mL</td>
			<td>2,9 mL</td>
			<td>4 mL</td>
		</tr><tr><td>24-Well-G-Rex-Platte</td>
			<td>20-110 μL</td>
			<td>1-20 x 106 cm</td>
			<td>400 μL</td>
			<td>5,6 mL</td>
			<td>6 mL</td>
		</tr></tbody></table>Tabelle 1: Zellkonzentrationen für Küvetten und Rückgewinnungsplatten.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Größe der Küvette</td>
			<td>Vorlage Plasmid</td>
			<td>gRNA an der Zielstelle</td>
			<td>Plasmid-Linearisierung gRNA</td>
			<td>Cas9-mRNA</td>
		</tr><tr><td>ca. 20 μl</td>
			<td>1-2 μg (1 μg)</td>
			<td>1-3 μg (1 μg)</td>
			<td>1-3 μg (1 μg)</td>
			<td>1-3 μg (1,5 μg)</td>
		</tr><tr><td>100 μL</td>
			<td>5-10 μg (5 μg)</td>
			<td>5-15 μg (5 μg)</td>
			<td>5-15 μg (5 μg)</td>
			<td>5-15 μg (5 μg)</td>
		</tr></tbody></table>Tabelle 2: Menge der benötigten CRISPR/Cas9-Reagenzien und DNA-Vorlage.

Nicht-virales Engineering von primären humanen T-Zellen durch Homologie-vermittelte Endverknüpfung und gezielte Integration großer DNA-Templates

Many current adoptive cellular therapies rely on lenti- or retroviral vectors to engineer T cells for the expression of a chimeric antigen receptor (CAR) ...

non-viral-engineering-primary-human-t-cells-via-homology-mediated-end

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Eine schnelle, einfache und kostengünstige Protokoll für die Erzeugung von Spender-derived multivirus-spezifische CTLs (RCTL) zur Infusion einer allogenen hämatopoetischen Stammzelltransplantation (HSCT) Empfänger die Gefahr der Entwicklung CMV, Adv. oder EBV-Infektionen. Dieses Herstellungsverfahren ist GMP-konform und sollte die breitere Umsetzung von T-Zell-Immuntherapie über spezialisierte Zentren zu gewährleisten.

Generierung von Multivirus-spezifischen T-Zellen zu verhindern / zu behandeln virale Infektionen nach allogenen hämatopoetischen Stammzelltransplantation

Gen-Targeting-Methoden können verwendet werden, um transgene Mäuse mit Knockout-, Knock-in- und getaggten Allelen zu erzeugen.  Hier beschreiben wir eine verbesserte Methode der Rekombination in E. coli, die wir als "Subklonierung plus Insertion" bezeichnen und die zur schnellen Generierung benutzerdefinierter Gen-Targeting-Vektoren verwendet werden kann.

Subklonierung Plus-Insertion (SPI) - A Novel Recombineering Verfahren zur schnellen Bau der Gene Targeting Vektoren

Dieses Protokoll beschreibt die effiziente Induktion von hämogenem Endothel und multipotenten hämatopoetischen Vorläuferzellen aus menschlichen pluripotenten Stammzellen durch die erzwungene Expression von Transkriptionsfaktoren.

Direkte Induktion von Hemogenic Endothel und das Blut durch die Überexpression von Transkriptionsfaktoren in der Personal pluripotenten Stammzellen

Wir beschreiben ein Protokoll zur Amplifikation retroviraler Integrationsstellen aus der genomischen DNA infizierter Zellen, zur Sequenzierung der amplifizierten Virus-Wirt-Verbindungen und zur anschließenden Kartierung dieser Sequenzen auf ein Referenzgenom. Wir beschreiben auch Techniken zur Quantifizierung der Verteilung von Integrationsstellen relativ zu verschiedenen genomischen Annotationen mit Hilfe von BEDTools.

Amplification, Next-Generation-Sequenzierung und genomischer DNA Mapping von Retrovirale Integration Seiten

Wir beschreiben hier ein neues Verfahren antigen-spezifische T-Zell-Rezeptoren (TCRs) durch Paarung der TCR &amp; agr; oder TCR &amp; bgr; TCR eines bestehenden, besitzen die Antigen-Spezifität von Interesse, mit komplementären hemichain der peripheren T-Zell-Rezeptor-Repertoire zu erzeugen. Die de novo erzeugt TZR behalten Antigen-Spezifität mit Affinität zu variieren.

Generieren<em&gt; De Novo</em&gt; Antigen-spezifische Zellrezeptoren humanen T von Retrovirale Transduktion von Centric Hemichain

Dieses Manuskript beschreibt die experimentelle Prozedur und Softwareanalyse für einen bidirektionalen Integrationsort-Assay, der gleichzeitig stromaufwärts und nachgeschaltete Vektor-Host-Junction-DNA analysieren kann. Bidirektionale PCR-Produkte können für jede nachgeschaltete Sequenzplattform eingesetzt werden. Die resultierenden Daten sind nützlich für einen hochdurchsatzreichen, quantitativen Vergleich von integrierten DNA-Targets.

Bidirektionale Retrovirale Integrationsstelle PCR Methodik und quantitative Datenanalyse Workflow

Dieses Protokoll beschreibt einen detaillierten Workflow für die Generierung und ex-Vivo Charakterisierung von onkolytische Viren für den Ausdruck von Immunmodulatoren, Masern-Viren Codierung bispezifische T Zelle Engagers als Beispiel verwenden. Anwendung und Anpassung an andere Vektor-Plattformen und transgene beschleunigt die Entwicklung von neuartigen Immunovirotherapeutics für klinische Übersetzung.

Paramyxoviruses für Tumor-gezielte Immunmodulation: Gestaltung und Evaluation Ex Vivo

Hier stellen wir ein detailliertes, schrittweises Protokoll für die CRISPR/Cas9-basierte Genom-Engineering von primären menschlichen B-Zellen für Gen Knockout (KO) und Knock-in (KI) zur Untersuchung der biologischen Funktionen von Genen in B-Zellen und der Entwicklung von B-Zell-Therapeutika zur Verfügung.

Genom-Engineering von primären menschlichen B-Zellen mit CRISPR/Cas9

Neue Strategien zur getreuen Modellierung somatischer Mutationen in hämatopoetischen Stamm- und Vorläuferzellen (HSPCs) sind notwendig, um die hämatopoetische Stammzellbiologie und hämatologische Malignome besser zu untersuchen. Hier wird ein Protokoll zur Modellierung heterozygoter Gain-of-Function-Mutationen in HSPCs durch Kombination der Verwendung von CRISPR/Cas9 und dualer rAAV-Donortransduktion beschrieben.

Entwicklung onkogener heterozygoter Gain-of-Function-Mutationen in humanen hämatopoetischen Stamm- und Vorläuferzellen

Large-Scale-Bildschirme von Metagenombanken

Erfahren Sie die nicht-virale CRISPR/Cas9-basierte T-Zell-Engineering-Methode für Immuntherapieanwendungen mit primären humanen T-Zellen. Dieses Protokoll ermöglicht effiziente Integration großer DNA-Templates bei erhaltener Funktionalität.

Nicht-virales Engineering von primären humanen T-Zellen durch Homologie-vermittelte Endverknüpfung und gezielte Integration großer DNA-Templates (Video) | JoVE Journal

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