Name: In Ovo Xenotransplantation von patienteneigenen Zellen der akuten lymphatischen Leukämie (ALL) (PDX-ALL) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 48 s
Description: Erfahren Sie die In-Ovo-Xenotransplantation von patienteneigenen ALL-Zellen für präklinische Leukämieforschung. Diese Methode ermöglicht schnelle Untersuchungen zur Medikamentenreaktion und personalisierten Medizin.

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<ol><li>Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+the+evidence+that+tumors+are+angiogenesis+dependent%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">What is the evidence that tumors are angiogenesis dependent.</a> J Natl Cancer Inst. 82 (1), 4-6 (1990).</li>
<li>Hagedorn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accessing+key+steps+of+human+tumor+progression+in+vivo+by+using+an+avian+embryo+model%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Accessing key steps of human tumor progression in vivo by using an avian embryo model.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (5), 1643-1648 (2005).</li>
<li>Dumartin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Netrin-1+mediates+early+events+in+pancreatic+adenocarcinoma+progression%2C+acting+on+tumor+and+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Netrin-1 mediates early events in pancreatic adenocarcinoma progression, acting on tumor and endothelial cells.</a> Gastroenterology. 138 (5), 1595-1606 (2010).</li>
<li>Aguirre-Ghiso, J. A., Estrada, Y., Liu, D., Ossowski, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ERK+activity+as+a+determinant+of+tumor+growth+and+dormancy%3A+Regulation+by+p38%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">ERK activity as a determinant of tumor growth and dormancy: Regulation by p38.</a> Cancer Res. 63 (7), 1684-1695 (2003).</li>
<li>Baroni, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ribonomic+and+short+hairpin+RNA+gene+silencing+methods+to+explore+functional+gene+programs+associated+with+tumor+growth+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Ribonomic and short hairpin RNA gene silencing methods to explore functional gene programs associated with tumor growth arrest.</a> Methods Mol Biol. 383, 227-244 (2007).</li>
<li>Lopez-Rivera, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+nitric+oxide+synthase+drives+mTOR+pathway+activation+and+proliferation+of+human+melanoma+by+reversible+nitrosylation+of+TSC2%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Inducible nitric oxide synthase drives mTOR pathway activation and proliferation of human melanoma by reversible nitrosylation of TSC2.</a> Cancer Res. 74 (4), 1067-1078 (2014).</li>
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<li>Balke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphologic+characterization+of+osteosarcoma+growth+on+the+chick+chorioallantoic+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Res+Notes%22%5BJournal%5D)">Morphologic characterization of osteosarcoma growth on the chick chorioallantoic membrane.</a> BMC Res Notes. 3, 58(2010).</li>
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<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Chick+Chorioallantoic+Membrane+%28CAM%29+assay+as+an+efficient+xenograft+model+of+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The Chick Chorioallantoic Membrane (CAM) assay as an efficient xenograft model of hepatocellular carcinoma.</a> J Vis Exp. (104), e52411(2015).</li>
<li>Pontel, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+lymphoblastic+leukemia+necessitates+GSH-dependent+ferroptosis+defenses+to+overcome+FSP1-epigenetic+silencing%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biol%22%5BJournal%5D)">Acute lymphoblastic leukemia necessitates GSH-dependent ferroptosis defenses to overcome FSP1-epigenetic silencing.</a> Redox Biol. 102408, (2022).</li>
<li>Oriol, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outcome+after+relapse+of+acute+lymphoblastic+leukemia+in+adult+patients+included+in+four+consecutive+risk-adapted+trials+by+the+PETHEMA+Study+Group%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Outcome after relapse of acute lymphoblastic leukemia in adult patients included in four consecutive risk-adapted trials by the PETHEMA Study Group.</a> Haematologica. 95 (4), 589-596 (2010).</li>
<li>Xin, Q., Chen, Z., Wei, W., Wu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+acute+lymphoblastic+leukemia%3A+Recapitulating+the+human+disease+to+evaluate+drug+efficacy+and+discover+therapeutic+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Animal models of acute lymphoblastic leukemia: Recapitulating the human disease to evaluate drug efficacy and discover therapeutic targets.</a> Biochem Pharmacol. 198, 114970(2022).</li>
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<li>Boyer, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+to+estimate+leukemia+stem+cells+in+primary+acute+myeloid+leukemia+and+in+patient-derived+xenografts%2C+at+diagnosis+and+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry to estimate leukemia stem cells in primary acute myeloid leukemia and in patient-derived xenografts, at diagnosis and follow-up.</a> J Vis Exp. (133), e56976(2018).</li>
<li>Kang, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+loss-of-function+genetic+screening+identifies+opioid+receptor+mu1+as+a+key+regulator+of+L-asparaginase+resistance+in+pediatric+acute+lymphoblastic+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Genome-wide loss-of-function genetic screening identifies opioid receptor mu1 as a key regulator of L-asparaginase resistance in pediatric acute lymphoblastic leukemia.</a> Oncogene. 36 (42), 5910-5913 (2017).</li>
<li>Lee, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HAP1+loss+confers+L-asparaginase+resistance+in+ALL+by+downregulating+the+calpain-1-Bid-caspase-3%2F12+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">HAP1 loss confers L-asparaginase resistance in ALL by downregulating the calpain-1-Bid-caspase-3/12 pathway.</a> Blood. 133 (20), 2222-2232 (2019).</li>
<li>Kalina, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EuroFlow+standardization+of+flow+cytometer+instrument+settings+and+immunophenotyping+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">EuroFlow standardization of flow cytometer instrument settings and immunophenotyping protocols.</a> Leukemia. 26 (9), 1986-2010 (2012).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>34 G Nadeln</td><td>BD Perisafe</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Attune NxT Durchflusszytometer</td><td>Thermo Fischer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD Perisafe Spritze (32 g)</td><td>BD Perisafe</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin (BSA)</td><td>Millipore Sigma</td><td>Nr. A9647</td><td></td></tr><tr><td>Medium zum Einfrieren von Zellen</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>12648010</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifuge (Allegra X-22R Zentrifuge )</td><td>Beckman Coulter&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Einweg-Handschuhe</td><td>Royal Touch300 Nitril-Untersuchungshandschuhe</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Präpariermikroskop</td><td>Leica MZ16FA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Invitrogen, ThermoFisher Scientific</td><td>Nr. D12345</td><td></td></tr><tr><td>Brutkasten für Eier, Vevitts 120 Inkubator mit Rollen</td><td>Vixest Trading Co.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ethylalkohol (95%)</td><td>VWR Deutschland</td><td>BDH1158-4LP</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum (FBS)</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>26140079</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll-Lösung (Ficoll?? Paque Plus)</td><td>MilliporeSigma</td><td>GE17-1440-02</td><td></td></tr><tr><td>FITC-CD10 Antikörper</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>sc-46656 FITC</td><td></td></tr><tr><td>FITC-CD4 Antikörper</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>sc-19641 FITC</td><td></td></tr><tr><td>Fluoreszenzmikroskop&nbsp;</td><td>Leica Mikrosysteme</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Handbohrmaschine (Dremel3000)</td><td>Bosch</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HEK293T&nbsp;</td><td>ATCC, VA, VEREINIGTE STAATEN VON AMERIKA</td><td>CRL-3216</td><td></td></tr><tr><td>Hämozytometer</td><td>VWR international, Hausser Scientific</td><td>15170-263</td><td></td></tr><tr><td>Heparin-Natriumsalz aus der Darmschleimhaut von Schweinen</td><td>Millipore Sigma</td><td>Nr. H3149</td><td></td></tr><tr><td>Heparinisierte Reagenzgläser</td><td>BD Vacutainer&nbsp;</td><td>BD 366480</td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamin 3000</td><td>Invitrogen, ThermoFisher Scientific</td><td>L3000008</td><td></td></tr><tr><td>Multiplex-Lentivirus-Titer-Kit (qPCR-Lentivirus-Titer-Kit)</td><td>Abm</td><td>LV900</td><td></td></tr><tr><td>NH4Cl (Ammonium chloride_</td><td>Millipore Sigma</td><td>Nr. A9434</td><td></td></tr><tr><td>Olympus IX71 inverses Mikroskop</td><td>Olymp</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PE-CD19 Antikörper</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>sc-19650 PE</td><td></td></tr><tr><td>PE-CD8 Antikörper</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>sc-1177 PE</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin (10.000 U/ml) &nbsp;</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)</td><td>Sigma</td><td>Nr. P3813</td><td></td></tr><tr><td>Pipetten (einstellbares Volumen)</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Puromycin</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>A1113803</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>Scotch Cellotape</td><td>3M</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sterile 6-Well-Platten</td><td>VWR international, Corning</td><td>22250-140</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Zentrifugenröhrchen</td><td>Axygen Inc, Corning</td><td>AXYMCT-150-C-S</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Kulturflaschen (75T)</td><td>VWR Deutschland</td><td>10062-872</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Falcon-Röhrchen (15 mL)</td><td>SARSTEDT</td><td>62.554.502</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Falcon-Röhrchen (50 mL)</td><td>SARSTEDT</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>Sterilfilter (0,45 &Mikro; m Filter)</td><td>VWR Deutschland</td><td>76778-974</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Pinzette</td><td>VWR Deutschland</td><td>82027-404</td><td></td></tr><tr><td>Objektträger aus sterilem Glas</td><td>VWR Deutschland</td><td>48300-031</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Pipettenspitzen</td><td>VWR Deutschland</td><td>76322-136, 76322-134, 76322-154</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Spritzen</td><td>BD-Spritze</td><td>309628?</td><td></td></tr><tr><td>Trypan-Blau</td><td>Invitrogen, ThermoFisher Scientific</td><td>Nr. T10282</td><td></td></tr></tbody></table>

in ovo xenotransplantation von patienteneigenen zellen der akuten lymphatischen leukämie (all) (pdx-all)

In Ovo Xenografting of Patient-Derived Acute Lymphoblastic Leukemia (ALL) Cells (PDX-ALL)

Um festzustellen, ob die Transplantation von humanen ALL-Zellen in die Entwicklung von Hühnerembryonen erfolgreich war, wurden replikationsinkompetente Lentiviren der 2. Generation, die mCherry trugen, amplifiziert und zur Markierung von B- und T-ALL-Zelllinien, SEM bzw. MOLT316,17 verwendet. Wie in Abbildung 1A gezeigt, wurden ~50 % der Zellen B-(oben links, zwei Felder) und T-(oben rechts, zwei Felder) ALLER Zellen mit m...

In Ovo Xenotransplantation von patienteneigenen Zellen der akuten lymphatischen Leukämie (ALL) (PDX-ALL)

This study introduces a rapid, cost-effective, and efficient method for in ovo xenografting of patient-derived acute lymphoblastic leukemia (ALL) cells, ...

in-ovo-xenografting-patient-derived-acute-lymphoblastic-leukemia-all

Research

Forschung

JoVE Journal

Cancer Research

Krebsforschung

Dieses Video beschreibt die Technik zur Erstellung eines von Zebrafisch-Patienten abgeleiteten Xenotransplantat-Modells. Im Probenprotokoll beurteilen wir die Wirksamkeit der Medikamente Gemcitabin und Navitoclax am Xenotransplantatmodell des Pankreastumors.

Zebrafisch-Xenotransplantat (zPDX): Ein Krebsmodell

Hier beschrieben ist eine Methode zur Herstellung von exogenem Cytokin in Patienten-abgeleiteten Xenotransplantat (PDX) -Mäusen über eine wöchentliche intraperitoneale Injektion einer Cytokin-transduzierten Stromazellenlinie. Diese Methode erweitert den Nutzen von PDX und bietet die Möglichkeit für transiente oder nachhaltige exogene Cytokin-Zustellung in einer Vielzahl von PDX-Modellen.

Expression von exogenem Cytokin in Patient-abgeleiteten Xenotransplantaten über Injektion mit einer Cytokin-transduzierten Stromzelllinie

Wir skizzieren ein Protokoll zur gleichzeitigen Ausdruck der Leukämie Stammzell-Marker auf primäre akute myeloische Leukämie-Zellen durch Durchflusszytometrie zu erkennen. Wir zeigen, wie Sie drei Vorläuferzellen Populationen und eine vermeintliche LSC Bevölkerung mit zunehmendem Grad der Reifung zu quantifizieren. Wir bestätigte das Vorhandensein dieser Populationen in entsprechenden Patienten-abgeleitet-Xenotransplantate.

Flow Cytometry um Leukämie-Stammzellen in primäre akute myeloische Leukämie und Patienten-abgeleitet-Xenotransplantate bei Diagnose und folgen bis zu schätzen

Hier präsentieren wir ein Protokoll für die Vorbereitung und der stereotaktischen Verwaltung der allogenen menschlichen Lymphozyten in immungeschwächte Mäuse tragen orthotopen menschlichen primären Hirntumoren. Diese Studie liefert eine Machbarkeitsstudie für die Machbarkeit und die Antitumor-Wirksamkeit von zellulären Immuntherapien Intrabrain geliefert.

Stereotaktische Adoptiv Übertragung von zytotoxischen Immunzellen in murinen Modellen der Orthotopen Human Glioblastoma Multiforme Xenotransplantate

Dieses Protokoll beschreibt Optimierungsverfahren in einem virusbasierten Dual-Fluoreszenz-markierten Tumor-Xenograft-Modell unter Verwendung von Larvenzebrafischen als Wirte. Dieses heterogene Xenograft-Modell imitiert die Gewebezusammensetzung der Mikroumgebung von Bauchspeicheldrüsenkrebs in vivo und dient als präziseres Werkzeug zur Beurteilung von Arzneimittelreaktionen in personalisierten zPDX-Modellen (Zebrafish Patient-derived xenograft).

Patientenabgeleitetes heterogenes Xenograft-Modell von Bauchspeicheldrüsenkrebs mit Zebrafischlarven als Wirte für vergleichende Arzneimittelbewertung

Wir beschreiben eine menschliche periphere Mononuklezelle (PBMC) – basierendes humanisiertes Xenograft-Mausmodell für translationale Immunonkologieforschung. Dieses Protokoll könnte als allgemeine Leitlinie für die Erstellung und Charakterisierung ähnlicher Modelle für die Bewertung von I-O-Therapien dienen.

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research

Hier stellen wir ein Protokoll vor, um die Wirksamkeit gezielter Therapien zu testen, die auf der Grundlage der genomischen Zusammensetzung eines Tumors ausgewählt wurden. Das Protokoll beschreibt die Identifizierung und Validierung struktureller DNA-Umlagerungen, die Einplage von Patiententumoren in Mäuse und die Erprobung von Reaktionen auf entsprechende Medikamente.

Testen von gezielten Krebstherapien mit struktureller DNA-Alterationsanalyse und patientenabgeleiteten Xenografts

In dieser Arbeit beschreiben wir ein Protokoll, in dem ein von Patienten mit akuter lymphatischer Leukämie abgeleitetes Xenograft-Modell als Strategie zur Bewertung und Überwachung von CD19-gerichteten chimären Antigenrezeptor-T-Zell-assoziierten Toxizitäten verwendet wird.

Bewertung der chimären Antigenrezeptor-T-Zell-assoziierten Toxizität unter Verwendung eines Xenograft-Mausmodells für Patienten mit akuter lymphatischer Leukämie

Dieses Protokoll enthält Schritt-für-Schritt-Anleitungen für die Generierung und Fehlerbehebung von Xenotransplantaten der akuten lymphatischen Leukämie (ALL) beim Menschen aus Zelllinien und frischem Patientenmaterial in transient immunsupprimierten Zebrafischembryonen sowie Richtlinien für die Beurteilung des Ansprechens auf das Arzneimittel mittels Durchflusszytometrie. Die experimentelle Pipeline kann auch für solide Tumore angepasst werden.

Schnelle in vivo Vorhersage des Ansprechens auf Medikamente mit Hilfe von Leukämiezelltransplantaten in Zebrafischembryonen

Dieses Protokoll beschreibt eine effiziente, nicht-chirurgische Methode zur orthotopen Implantation von Xenotransplantaten von Brustkrebspatientinnen bei Mäusen. Die Technik beinhaltet eine enzymatische Tumordissoziation, gefolgt von einer direkten Injektion in die Brustfettpolster, was eine Hochdurchsatzimplantation ermöglicht. Die umfassende Validierung gewährleistet die Modelltreue und ermöglicht strenge Studien über verschiedene Brustkrebs-Subtypen hinweg.

Hochdurchsatz-Dissoziation und orthotope Implantation von Xenotransplantaten von Brustkrebspatientinnen

Hier wird eine auf Phosphoflow-Zytometrie basierende Methode zur Analyse der Signalwege stromabwärts der mTORC1-, JAK/STAT5- und MAPK-Signalwege in akuten humanen myeloischen Leukämiezellen beschrieben, die in Mäuse xenotransplantiert und aus Knochenmarkaspiraten gewonnen wurden. Die Werte von p-STAT5, p-4EBP1, p-RPS6 und p-ERK1/2 werden gleichzeitig mit einem spektralen Durchflusszytometer der nächsten Generation mit hoher Empfindlichkeit gemessen.

Intrazelluläre Phosphoflow-Zytometrie von Xenotransplantaten bei akuter myeloischer Leukämie

Erfahren Sie die In-Ovo-Xenotransplantation von patienteneigenen ALL-Zellen für präklinische Leukämieforschung. Diese Methode ermöglicht schnelle Untersuchungen zur Medikamentenreaktion und personalisierten Medizin.

In Ovo Xenotransplantation von patienteneigenen Zellen der akuten lymphatischen Leukämie (ALL) (PDX-ALL)

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