Name: Reproduzierbare Herstellung von SPOT als Gerüst-basierte Kulturplattform mit hohem Durchsatz (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 22 s
Description: Erfahren Sie die Herstellung der SPOT-Plattform für hochdurchsatzfähige Organoid-Kulturen. Dieses Protokoll demonstriert reproduzierbare Gerüst-basierte Kultursysteme mit automatisierten Liquid Handlern für verbesserte Arzneimittelscreenings.

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<ol><li>Antoni, D., Burckel, H., Josset, E., Noel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-Dimensional+Cell+Culture%3A+A+Breakthrough+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Three-Dimensional Cell Culture: A Breakthrough in vivo.</a> Int J Mol Sci. 16 (3), 5517-5527 (2015).</li>
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<li>Dean, T., Li, N. T., Cadavid, J. L., Ailles, L., McGuigan, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+TRACER+culture+invasion+assay+to+probe+the+impact+of+cancer+associated+fibroblasts+on+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+cell+invasiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Sci%22%5BJournal%5D)">A TRACER culture invasion assay to probe the impact of cancer associated fibroblasts on head and neck squamous cell carcinoma cell invasiveness.</a> Biomater Sci. 8 (11), 3078-3094 (2020).</li>
<li>Du, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+miniaturized+3D+organoid+culture+platform+for+ultra-high-throughput+screening%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Development of a miniaturized 3D organoid culture platform for ultra-high-throughput screening.</a> J Mol Cell Biol. 12 (8), 630-643 (2020).</li>
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</ol>

Trotz Fortschritten in der biomedizinischen Forschung bleibt die Entwicklung physiologisch relevanter In-vitro-Assays eine Herausforderung. Ein idealer Assay sollte eine Vielzahl von Zelltypen, Behandlungsformulierungen, Zeitskalen, kommerziellen Instrumenten und analytischen Messwerten berücksichtigen, um den Anforderungen von Forschern aus verschiedenen Disziplinen gerecht zu werden. Aufgrund des Mangels an geeigneten Werkzeugen verlassen sich Forscher jedoch oft auf vereinfachte Modelle, wie z. B. 2D-Monoschichten immortalisierter Zelllinien, die die Komplexität und klinische Relevanz nicht rekapitulieren, insbesondere in der Krebsforschung 1,2. Um dieses Problem zu lösen, haben groß angelegte Tumor-Biobanken und die Zusammenarbeit mit Klinikern die Entwicklung von hochgenauen In-vitro-Modellen wie patientenabgeleiteten Tumororganoiden (PDOs) vorangetrieben, die im Vergleich zu Zelllinien patientenspezifischere genetische und therapeutische Profile aufweisen 3,4,5. In der Zwischenzeit erfordern Fortschritte in der Laborautomatisierung und Wirkstoffforschung Plattformen, die sich nahtlos in Hochdurchsatz-Arbeitsabläufe integrieren lassen. Während bestehende Plattformen entweder biologische Genauigkeit oder Skalierbarkeit bieten, waren nur wenige in der Lage, beide Herausforderungen gleichzeitig zu lösen 6,7,8. Die Entwicklung automatisierter Hochdurchsatzmodelle, die wichtige Krankheitsmerkmale replizieren, ist entscheidend für die Weiterentwicklung der biomedizinischen Forschung und die Beschleunigung der Datengenerierung für translationale Anwendungen.
Zahlreiche neue Modelle zielen darauf ab, die Herausforderungen zu bewältigen, die mit der Kultivierung spezialisierter Zelltypen, wie z. B. PDOs, mit hohem Durchsatz verbunden sind (Abbildung 1). Standardplattformen, bei denen Organoide mit Hydrogel in 96- oder 384-Well-Platten gemischt werden, weisen mehrere Einschränkungen auf: (i) ein hohes Zell-Gel-Volumen führt zu einem inkonsistenten Nährstoffzugang, (ii) die Krümmung des Well-Meniskus führt zu bildgebenden Artefakten und zellulären Gradienten, (iii) die Hydrogel-Aussaat ist über Chargen und Personal hinweg nicht einheitlich, (iv) Inkompatibilität mit automatisierter Herstellung und automatisierter Mikroskopie und (v) die Verwendung von extrazellulärer Matrix (ECM), die in der Regel weich und zerbrechlich ist. Zerstörung bei physiologischen Gewebedichten oder Einbau kontraktiler Zelltypen 1,9. Gegenwärtig wird die Mehrzahl der plattenbasierten PDO-Studien entweder durch manuelles Aussäen des Zellgels in die Platte10,11 oder durch ein Gel-Overlay-Verfahren durchgeführt, bei dem das Hydrogel mit einem weniger viskosen Medium verdünnt wird und die Zellen bis zum Bohrlochboden zentrifugiert werden, um sie in der geeigneten optischen Ebenezu platzieren 12,13. Beide Ansätze bieten keine mechanische Unterstützung für eine langfristige Kultur. Basierend auf unseren früheren Beobachtungen (unveröffentlichte Daten) zieht sich kommerzielles Hydrogel, das mit Zellen in Standard-Well-Platten gemischt ist, in 9 von 12 Wells über einen Zeitraum von 12 Tagen von den Oberflächen des Wells zusammen, während bei der Gel-Overlay-Methode physiologische Zell-Matrix-Wechselwirkungen fehlen. Darüber hinaus können die resultierenden Kulturen aufgrund von Platzbeschränkungen innerhalb der Vertiefung nicht über lange Zeiträume aufbewahrt werden und sind nicht mit Assays kompatibel, die ein hohes Reagenzien-Zell-Medium-Verhältnis erfordern 14,15,16. Diese praktischen Hindernisse behindern die Einführung von 3D-Modellen und schränken die experimentelle Reproduzierbarkeit in der gesamten Praxis ein.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68405/68405fig1.jpg"> 
Abbildung 1: Bewertung von Kulturmodellen auf Basis von Skalierbarkeit und biologischer Relevanz. Die relative Positionierung verschiedener in vitro und in vivo Kultursysteme entlang der Skalierbarkeit (y-Achse), definiert durch den Plattendurchsatz, und der biologischen Relevanz (x-Achse), wobei die Kompromisse zwischen Durchsatzpotenzial und physiologischer Genauigkeit hervorgehoben werden. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68405/68405fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
Motiviert durch diese Herausforderungen wurden die hohe Porosität und die mechanische Verstärkung eines dünnen Zellulosegerüsts genutzt, um die Scaffold-supported Platform for Organoid-based Tissues (SPOT) zu entwickeln, die sowohl im 96- als auch im 384-Well-Format erhältlich ist. SPOT enthält ein polymer-vorstrukturiertes Gerüst unter Verwendung eines zuvor entwickelten Infiltrationsverfahrens17, das dem Plattenlayout entspricht, eine präzise Platzierung von Zell-Gel-Tröpfchen ermöglicht und eine strukturelle Unterstützung für die Hydrogelphase bietet (Abbildung 2A). Der Kapillartransport in das Gerüst leitet die Zell-Gel-Lösung und bildet ein mechanisch verstärktes Biokomposit-Netzwerk (Abbildung 2B). Aufgrund der porösen Struktur des Gerüsts infiltriert das Zellgel und bildet eine dünne Schicht (etwa 70 μm dick), wodurch eine zehnmal geringere Menge an Zellgel erforderlich ist, um den Boden der Vertiefung zu bedecken14. Die Verträglichkeit von SPOT mit der Aussaat von PDAC-PDOs (Pankreas-duktales Adenokarzinom) wurde ebenfalls durch die Beurteilung ihres Wachstums mit Hilfe von metabolischen Assays und bildbasierten Messungen nachgewiesen. Seit seiner Entwicklung hat SPOT eine erhebliche Vielseitigkeit und Benutzerfreundlichkeit für Forscher bewiesen, die sich mit Organoidkulturen beschäftigen. Darüber hinaus bietet das Design von SPOT eine benutzerfreundliche Skalierbarkeit mit reduzierten Reagenzienvolumina und verbesserten Bildgebungsmöglichkeiten durch seine flache, meniskusfreie Mikrogelgeometrie, die eine gleichmäßige Lichtdurchdringung und eine genaue High-Content-Bildgebung gewährleistet14 (Abbildung 2C,D). SPOT unterstützt auch die Co-Kultur mit anderen relevanten Zelltypen, wie z. B. Fibroblasten, um die Mikroumgebung des Tumors besser zu rekapitulieren18.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68405/68405fig2.jpg"> 
Abbildung 2: Überblick über das 96-SPOT-Gerät und den Arbeitsablauf für die Bildanalyse. (A) Schematische Darstellung der Herstellung von SPOT-Platten: Das Gerät wird zusammengebaut, indem eine handelsübliche Bottomless-Well-Platte (oben), ein Gerüst mit PMMA-Muster (in blau dargestellt) und eine Polycarbonatfolie (unten) unter Verwendung von Schichten aus doppelseitigem Polyacrylkleber (gelb dargestellt) zusammengebaut werden. (B) Aussaat der Zellen in die Vertiefung des Gerüsts: Die Zellen werden in einem nicht polymerisierten Hydrogel (rosa dargestellt) suspendiert und in jede Vertiefung pipettiert, wo es das Gerüst infiltriert. Das Hydrogel wird dann geliert, um die Zellen in dem gerüstgestützten Hydrogel einzukapseln. (C) Mikroskopie: Das resultierende Mikrogewebe kann mit Hilfe der automatisierten Weitfeldmikroskopie abgebildet werden. (D) Bildbasierte Analyse: Aufgenommene Bilder von fluoreszierenden Zellen (grün), die in Gel suspendiert sind, können mit Standard-Bildanalyse-Pipelines analysiert werden. Repräsentative Epifluoreszenzmikroskopie-Aufnahme von GFP-exprimierenden KP4-Zellen in einem 96-SPOT-Well. Die Maßstabsleiste beträgt 500 μm. Diese Zahl wurde von14 geändert. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68405/68405fig2large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
Ein weiterer Vorteil von SPOT besteht darin, dass das System in einen Open-Source-Liquid-Handler integriert werden kann, was die automatisierte, reproduzierbare Herstellung von PDO-Kulturen ermöglicht. Diese Weiterentwicklung reduziert die Variabilität der Anwender und unterstützt komplexe experimentelle Designs, einschließlich Hochdurchsatz-Wirkstoffscreening und personalisierter medizinischer Ansätze18. Es wurde bereits gezeigt, dass SPOT mit der einzelzellbasierten Multiplex-Charakterisierung zellulärer Phänotypen in heterogenen Tumorumgebungen und der Extraktion der Zellen bei Bedarf aus SPOT durch Verdau kompatibel ist18. Diese Eigenschaften positionieren SPOT als vielseitiges Werkzeug für Screening-Anwendungen, bei denen hochaufgelöste Längsschnittdaten für die Bewertung der Wirksamkeit von Arzneimitteln und des zellulären Verhaltens unter physiologisch relevanten Bedingungen unerlässlich sind14,18. Durch die Kombination dieser technischen Innovationen überwindet SPOT kritische Einschränkungen in herkömmlichen 3D-Kultursystemen.
Dieses Protokoll bietet einen umfassenden Leitfaden für die Herstellung von SPOT-Komponenten, die Montage von Platten und Aussaatmethoden für robuste und reproduzierbare 3D-Organoidkulturen. Es enthält detaillierte Anweisungen für die manuelle Plattenaussaat mit einer Mikropipette und automatisierte Seeding-Workflows mit einem Liquid Handler, der sowohl 96- als auch 384-Well-Formate unterstützt. Darüber hinaus beschreibt dieses Protokoll wesentliche Qualitätskontrollmaßnahmen, wie z. B. die Überprüfung der gleichmäßigen Gelverteilung und der Integrität des Gerüsts, um hohe experimentelle Standards aufrechtzuerhalten. Es werden auch Strategien zur Fehlerbehebung bereitgestellt, um häufige Probleme wie unvollständige Gelinfiltration, Verdunstung während der Aussaat und Gerüstablösung zu beheben und den Forschern praktische Lösungen an die Hand zu geben, um ihre Arbeitsabläufe zu optimieren und zuverlässige Ergebnisse zu erzielen.
SPOT wurde entwickelt, um die Lücken zu schließen, mit denen herkömmliche Organoid-Assays konfrontiert sind, einschließlich der Herausforderungen im Zusammenhang mit der Durchführung von Assays und Medienwechseln bei gleichzeitiger Wahrung der Gelintegrität 10,11,12,13. Das übergeordnete Ziel dieser Methode ist es, eine gerüstgestützte Plattform herzustellen, die die Organoidkultur über einen Zeitraum von 12 Tagen unterstützt. Darüber hinaus deckt diese Methode auch die Erzeugung von Gewebearrays in SPOT durch manuelles oder Liquid Handler-gestütztes Seeding ab, um den Anwendern die Durchführung nachgelagerter Störungen zu ermöglichen, einschließlich IC50-Assays für Medikamente und Screening kleiner Moleküle.

<table><tbody><tr><td>0,2 ml PCR-Röhrchen (Streifen mit 8 Stück) & nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>72.985.002</td><td></td></tr><tr><td>1,5 mL Zentrifugenröhrchen</td><td>FroggaBio</td><td>LMCT1.7B</td><td></td></tr><tr><td>1000-& mu; L Pipettenspitzen</td><td>Finsternis</td><td>4-1019-260-000</td><td></td></tr><tr><td>Serologische 10-ml-Pipetten</td><td>FroggaBio</td><td>394010</td><td></td></tr><tr><td>10-ml-Spritze</td><td>BD, Kanada</td><td>302995</td><td></td></tr><tr><td>10x Minimal essentielles Medium (MEM 10x)</td><td>Gibco</td><td>11430030</td><td></td></tr><tr><td>150-mm-Schüssel</td><td>Corning</td><td>430599</td><td></td></tr><tr><td>16-Gauge-Dosierkanülen mit Luer-Lock-Anschluss</td><td>McMaster-Carr, Illinois, Vereinigte Staaten von Amerika</td><td>Artikel-Nr.: 6699A2</td><td></td></tr><tr><td>20&Mikro; L Filterspitzen Racks</td><td>Opentrons</td><td>999-00099</td><td></td></tr><tr><td>200&Mikro; L Filterspitzen Racks</td><td>Opentrons</td><td>999-00081</td><td></td></tr><tr><td>200-& mu; L Pipettenspitzen</td><td>Finsternis</td><td>4-1030-260-000</td><td></td></tr><tr><td>20-Gauge-Dosierkanülen mit Luer-Lock-Anschluss</td><td>McMaster-Carr, Illinois, Vereinigte Staaten von Amerika</td><td>6699A4</td><td></td></tr><tr><td>384-Well-Well-Platte ohne Boden (schwarz)</td><td>Greiner</td><td>82051-544</td><td></td></tr><tr><td>3-ml-Spritze&nbsp;</td><td>BD, Kanada</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>Konisches Zentrifugenröhrchen aus Polypropylen / 50 ml</td><td>VWR</td><td>CA21008-940</td><td></td></tr><tr><td>Konisches Zentrifugenröhrchen aus Polypropylen / 50 ml</td><td>VWR</td><td>CA21008-940</td><td></td></tr><tr><td>96-Well-Well-Platte ohne Boden (schwarz)</td><td>Greiner</td><td>82050-714</td><td></td></tr><tr><td>Aceton</td><td>Fisher Scientific</td><td>Nr. A18-1</td><td></td></tr><tr><td>Analytische Waage</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>AxiDraw Erweiterung für Inkscape (https://wiki.evilmadscientist.com/Axidraw_Software_Installation)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>AxiDraw Python API (https://axidraw.com/doc/py_api/#installation)&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>AxiDraw V3 Persönliche Hochleistungs-Schreib- und Zeichenmaschine</td><td>Böse verrückte Wissenschaftler, USA</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Rinderkollagen (PureCol 3 mg/ml)</td><td>Fortschrittliche BioMatrix</td><td>5005</td><td></td></tr><tr><td>Zelllinie der Wahl</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Clip Easel (im Lieferumfang von AxiDraw V3 enthalten)</td><td>Böse verrückte Wissenschaftler, USA</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Nährmedien der Wahl</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Schutzband zum Auffangen von Schmutz</td><td>3M</td><td>6851 PN36851</td><td></td></tr><tr><td>Doppelseitiges Polyacryl-Klebeband (800 mm x 1200 mm)</td><td>Klebstoffforschung, ARcare</td><td>90106NB</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum (FBS)</td><td>Gibco</td><td>12483-020</td><td></td></tr><tr><td>Finum Teefilter XL&nbsp;</td><td>Riensch & Held GmbH & Co. KG, Hamburg, Deutschland</td><td>420.69.00</td><td></td></tr><tr><td>Flache Verschlüsse für 0,2 mL PCR-Röhrchen (Streifen mit 8 Stück)</td><td>Sarstedt</td><td>65.989.002</td><td></td></tr><tr><td>Robuste Federklemmen aus Kunststoff</td><td>BENCHMARK</td><td>1024-554</td><td></td></tr><tr><td>HEPA-Modul &ndash; Modell mit 110-130 V und 60 Hz</td><td>Opentrons</td><td>999-00109</td><td></td></tr><tr><td>Eisbeutel (gefroren, 1400 mm x 1800 mm)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Inkscape-Software</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Laserschneider</td><td>Universelles Lasersystem</td><td>VLS3.75</td><td></td></tr><tr><td>Miniaturschlauch aus Ethylvinylacetat (EVA) mit einem Außendurchmesser von 0,07 Zoll</td><td>McMaster-Carr, Illinois, Vereinigte Staaten von Amerika</td><td>Nr. 1883T3</td><td></td></tr><tr><td>Elektronische Mehrkanalpipette P20 (Gen2)</td><td>Opentrons</td><td>999-00005</td><td></td></tr><tr><td>Elektronische Mehrkanalpipette P300 (Gen2)</td><td>Opentrons</td><td>999-00006</td><td></td></tr><tr><td>Nagellack</td><td>Sally Hansen</td><td>SBS-006861</td><td>Optional, zum Pigmentieren von PMMA-Tinte</td></tr><tr><td>Opentrons OT-2</td><td>Opentrons</td><td>999-00111</td><td></td></tr><tr><td>P1000 Pipette</td><td>Gilson</td><td>FA10006M</td><td></td></tr><tr><td>P200 8-Kanal-Pipette</td><td>Gilson</td><td>F144072</td><td></td></tr><tr><td>P200 Pipette</td><td>Gilson</td><td>FA10005M</td><td></td></tr><tr><td>Papierhandtücher</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis Company, Inc.</td><td>52859-079</td><td></td></tr><tr><td>Pergamentpapier&nbsp; &nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Pasteur-Pipetten</td><td>VWR</td><td>14672-380</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin (P/S)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Nr. P4333</td><td></td></tr><tr><td>Poly(methylmethacrylat) (PMMA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>182230</td><td></td></tr><tr><td>Polycarbonat-Folie (760 mm x 1300 mm)</td><td>McMaster-Carr</td><td>Artikel-Nr.: 85585K102</td><td></td></tr><tr><td>Polydimethylsiloxan-Monomer und -Vernetzer (PDMS, 1500 mm x 2700 mm)</td><td>Ellsworth Klebstoffe</td><td>4019862</td><td></td></tr><tr><td>Präzisionsmesser</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Starre Acrylhalterung (Größe an der Unterseite der Well-Platte angebracht)</td><td>McMaster-Carr</td><td>Artikel-Nr.: 8560K239</td><td></td></tr><tr><td>Halterung aus starrem Karton</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Lineal</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Schere&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Natriumbicarbonat (0,8 M in destilliertem Wasser)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Nr. S6014</td><td></td></tr><tr><td>Temperaturdeck mit Aluminiumblöcken (Gen2)</td><td>Opentrons</td><td>999-00097</td><td></td></tr><tr><td>Tastrad&nbsp;</td><td>HEEPDD (Amazon)</td><td>B07YQWB284</td><td></td></tr><tr><td>Transparentes Klebeband&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Trypan-Blau</td><td>Gibco</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>Pinzette</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Vortex-Mischer&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr></tbody></table>

reproduzierbare herstellung von spot als gerüst-basierte kulturplattform mit hohem durchsatz

Reproducible Manufacturing of SPOT as a High-throughput Scaffold-based Culture Platform

Die PMMA-Strukturierung des Papiergerüsts dient als physische Barriere, um den Austausch von Inhalten zwischen Vertiefungen zu verhindern. Dieses Design ist entscheidend, um sicherzustellen, dass benachbarte Vertiefungen chemisch und biologisch isoliert bleiben, um eine unbeabsichtigte Diffusion von Medien, Arzneimitteln, sezernierten Faktoren oder sogar Zellen zu verhindern14. Die Einbeziehung von PMMA ermöglicht eine präzise Kompartimentierung, was SPOT zu einer zuverlässigen Plattform für Hochd...

Reproduzierbare Herstellung von SPOT als Gerüst-basierte Kulturplattform mit hohem Durchsatz

Patient-derived organoids (PDOs) are becoming increasingly used in the field of cancer research to model tumors. They combine the benefits of in vivo and ...

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Research

Forschung

JoVE Journal

Bioengineering

Biotechnik

In der Vergangenheit haben viele in-vitro-Kultur-Systeme - vor allem Monolayerkulturen - oft den Nachteil erlitten, dass differenzierte primären Zellen eine relativ kurze Lebensdauer hatten und während der Kultur de-differenziert. Als Folge davon wurden die meisten ihrer organ-spezifischen Funktionen verloren schnell. So, um bessere Bedingungen für diese Zellen in vitro zu vervielfältigen, haben Änderungen und Anpassungen zu herkömmlichen Monolayerkulturen worden.

Interview: Bioreaktoren und Aufgetaucht-Modified 3D-Gerüste für Stammzellforschung

Ein High-Throughput-, automatisierten Plattform zur Herstellung von Zelllinien-Entwicklung für die Herstellung von Protein-Therapeutika wird beschrieben. Implementierung von BD FACS Aria Cell Sorter hat CloneSelect Imager und Tecan Freedom EVO Liquid-Handling-System deutlich erhöht Verarbeitungskapazität in Zelllinien-Entwicklung mit verbesserten Zell-Linie Qualität und hohe Reproduzierbarkeit nachgewiesen.

Ein automatisiertes Hochdurchsatz-Plattform für die Entwicklung von Manufacturing Zelllinien für Protein Therapeutics

Die beschriebenen Protokolle ermöglichen es Laboren, skalierbare, adhärente Stammzellkulturen mit minimalem Arbeitsaufwand, Erfahrung und Ausrüstungsinvestitionen mit einem programmierbaren Liquid-Handling-Roboter und 96-Well-Platten durchzuführen.  iPSCs, die mehr als 20 Mal auf diesem System durchlaufen wurden, behielten die Pluripotenz bei, normalisierte Karyotypen und differenzierten sich zu Kardiomyozyten.

Scalable Platte mit 96 Vertiefungen Basierend iPSC Kultur und Produktion Mit einem Robotic Flüssigkeitshandhabungssystem

Dieser Artikel beschreibt die detaillierte Methode ein Array gemultiplext künstliche zellulären Mikroumgebung (MACME) Vorbereitung für Hochdurchsatz-Manipulation von physikalischen und chemischen imitiert in Vivo zellulären Mikroumgebungen Queues und Identifizieren Sie die optimale zelluläre Umgebung für menschliche pluripotenten Stammzellen (hPSCs) mit einzelligen profiling.

Herstellung eines Multiplex künstliche zellulären Mikroumgebung Arrays

Dieses Protokoll dient als umfassendes Tutorial für das standardisierte und reproduzierbare Mischen viskoser Materialien mit einer neuartigen Open-Source-Automatisierungstechnologie. Detaillierte Anleitungen zum Betrieb einer neu entwickelten Open-Source-Workstation, zur Verwendung eines Open-Source-Protokolldesigners sowie zur Validierung und Verifizierung zur Identifizierung reproduzierbarer Mischungen werden bereitgestellt.

Eine Open-Source-Technologieplattform zur automatisierten und standardisierten Herstellung von Hydrogel-basierten 3D-Kulturmodellen

Dreidimensionale Herzgewebe, die mit aus Stammzellen gewonnenen Kardiomyozyten biotechnologisch hergestellt wurden, haben sich als vielversprechende Modelle für die Untersuchung von gesundem und krankem menschlichem Myokard in vitro erwiesen und gleichzeitig Schlüsselaspekte der nativen Herznische rekapituliert. Dieses Manuskript beschreibt ein Protokoll zur Herstellung und Analyse von High-Content-Kardiomyozyten, die aus humanen induzierten pluripotenten Stammzellen erzeugt werden.

Entwicklung eines Bioreaktors zur Verbesserung der Datenerfassung und des Modelldurchsatzes von künstlich hergestelltem Herzgewebe

In dieser Arbeit wird ein Herstellungsprotokoll für eine neue Art von Kultursubstrat mit Hunderten von Mikrobehältern promm2 vorgestellt, in dem Organoide kultiviert und mittels hochauflösender Mikroskopie beobachtet werden können. Die Zellimpf- und Immunfärbungsprotokolle sind ebenfalls detailliert.

Eine Hochdurchsatzplattform für Kultur und 3D-Bildgebung von Organoiden

Hier stellen wir ein Protokoll für ein automatisiertes Zellkultursystem vor. Dieses automatisierte Kultursystem reduziert den Arbeitsaufwand und kommt den Anwendern zugute, einschließlich Forschern, die mit dem Umgang mit induzierten pluripotenten Stammzellen (iPS-Zellen) nicht vertraut sind, von der Wartung von iPS-Zellen bis hin zur Differenzierung in verschiedene Zelltypen.

Ein automatisiertes Kultursystem zur Erhaltung und Differenzierung von humanen induzierten pluripotenten Stammzellen

Dieses Protokoll bietet einen standardisierten Hochdurchsatz-Screening-Workflow für industrielle Mikroorganismen. Dabei wird eine mutierte Bibliothek mittels ARTP-Mutagenese erstellt, ein positives Tröpfchenscreening mit automatisierter Mikrofluidik durchgeführt und anschließend die Ergebnisse überprüft. Die Zuverlässigkeit des Workflows wurde durch das Screening von Hochleistungs-B . coagulans-Stämmen bestätigt.

Hochdurchsatz-Screening von L-Milchsäure-hyperproduzierenden Bacillus-Coagulans-Mutanten mittels einer automatisierten tropfen-mikrofluidischen Plattform

Traditional, zweidimensionalen Zellkultur-Techniken oft in veränderten Eigenschaften in Bezug auf die Differenzierung Marker, Zytokine und Wachstumsfaktoren führen. Dreidimensionale Zellkulturen in den rotierenden Zellkultursystem (RCCS) wiederherstellt Expression vieler dieser Faktoren, wie hier mit einem extravillösen Trophoblasten-Zelllinie gezeigt.

Rotierende Cell Culture Systems für Human Cell Culture: Human Trophoblastzellen als Modell

Erfahren Sie die Herstellung der SPOT-Plattform für hochdurchsatzfähige Organoid-Kulturen. Dieses Protokoll demonstriert reproduzierbare Gerüst-basierte Kultursysteme mit automatisierten Liquid Handlern für verbesserte Arzneimittelscreenings.

Reproduzierbare Herstellung von SPOT als Gerüst-basierte Kulturplattform mit hohem Durchsatz

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