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<ol><li>Knudsen, L., Ochs, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+micromechanics+of+lung+alveoli%3A+structure+and+function+of+surfactant+and+tissue+components%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The micromechanics of lung alveoli: structure and function of surfactant and tissue components.</a> Histochem Cell Biol. 150 (6), 661-676 (2018).</li>
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<li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+An+open-source+platform+for+biological-image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: An open-source platform for biological-image analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li>
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<li>Georas, S. N., Rezaee, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+barrier+function%3A+at+the+front+line+of+asthma+immunology+and+allergic+airway+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Epithelial barrier function: at the front line of asthma immunology and allergic airway inflammation.</a> J Allergy Clin Immunol. 134 (3), 509-520 (2014).</li>
<li>Ivanov, A. I., Parkos, C. A., Nusrat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoskeletal+regulation+of+epithelial+barrier+function+during+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Cytoskeletal regulation of epithelial barrier function during inflammation.</a> Am J Pathol. 177 (2), 512-524 (2010).</li>
<li>Barnett, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+epithelial-immune+circuit+amplifies+inflammasome+and+IL-6+responses+to+SARS-CoV-2%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">An epithelial-immune circuit amplifies inflammasome and IL-6 responses to SARS-CoV-2.</a> Cell Host Microbe. 31 (2), 243-259.e6 (2023).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HB-EGF-induced+IL-8+secretion+from+airway+epithelium+leads+to+lung+fibroblast+proliferation+and+migration%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Pulm+Med%22%5BJournal%5D)">HB-EGF-induced IL-8 secretion from airway epithelium leads to lung fibroblast proliferation and migration.</a> BMC Pulm Med. 21 (1), 347(2021).</li>
<li>Guo, T. J. F., Singhera, G. K., Leung, J. M., Dorscheid, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Airway+epithelial-derived+immune+mediators+in+COVID-19%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Airway epithelial-derived immune mediators in COVID-19.</a> Viruses. 15 (8), 1655(2023).</li>
<li>Thomas, D., Choi, S., Alamana, C., Parker, K. K., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+engineered+organoids+for+cardiovascular+models%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Cellular and engineered organoids for cardiovascular models.</a> Circ Res. 130 (12), 1780-1802 (2022).</li>
<li>Li, K., He, Y., Jin, X., Jin, K., Qian, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproducible+extracellular+matrices+for+tumor+organoid+culture%3A+challenges+and+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Reproducible extracellular matrices for tumor organoid culture: challenges and opportunities.</a> J Transl Med. 23 (1), 497(2025).</li>
<li>Vande Geest, J. P., Di Martino, E. S., Vorp, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+analysis+of+the+complete+strain+field+within+Flexercell+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomech%22%5BJournal%5D)">An analysis of the complete strain field within Flexercell membranes.</a> J Biomech. 37 (12), 1923-1928 (2004).</li>
<li>Mondoñedo, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+system+for+cyclic+stretching+of+precision-cut+lung+slices+during+acute+cigarette+smoke+extract+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">A high-throughput system for cyclic stretching of precision-cut lung slices during acute cigarette smoke extract exposure.</a> Front Physiol. 11, 566(2020).</li>
</ol>

<a href="https://app.jove.com/t/6700">This corrects</a> the article <a href="https://dx.doi.org/10.3791/69447">10.3791/69447</a>

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/69447">Generation of 3D Collagen-Embedded A549/MRC-5 Alveolar Organoids using a Mechanical Cell-Stretching Bioreactor</a>.&#160;

Erratum: Generation of 3D Collagen-Embedded A549/MRC-5 Alveolar Organoids using a Mechanical Cell-Stretching Bioreactor

<table><tbody><tr><td>1,5 mL Mikrozentrifugenröhre</td><td>Eppendorf</td><td>0030 125.215</td><td></td></tr><tr><td>15 mL konische Röhre</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-53A</td><td></td></tr><tr><td>16 % Paraformaldehyd</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>28908</td><td></td></tr><tr><td>2-Mercapptoethanol</td><td>Millipore Sigma</td><td>M3148</td><td></td></tr><tr><td>50 mL konische Röhre</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-432-22</td><td></td></tr><tr><td>6-Well-(flexible Membran) Tissue Train kreisförmige Schaumstoffplatte</td><td>Flexcell International</td><td>TTCF-5001</td><td></td></tr><tr><td>A549-Zellen</td><td>Sammlung der amerikanischen Typkultur (ATCC)</td><td>CCL-171</td><td></td></tr><tr><td>Luftkompressor</td><td>California Air Tools</td><td>10020DSPCAD</td><td></td></tr><tr><td>Rinderserumalbumin</td><td>Millipore Sigma</td><td>A9418</td><td></td></tr><tr><td>Puffer RLT</td><td>Qiagen</td><td>79216</td><td></td></tr><tr><td>CO2 Inkubator</td><td>PHCBI</td><td>MCO-170AICUVL-PA</td><td></td></tr><tr><td>Cultrex-Organoid-Erntelösung</td><td>Bio-Techne</td><td>3700-100-01</td><td></td></tr><tr><td>CyQUANT LDH Zytotoxizitäts-Assay-Kit</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>C20300</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4&prime;,6-diamidino-2-phenylindol)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D2650-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s modifizierte Adler' s medium (DMEM)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>EVOS XL Core Mikroskop</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AMEX1200</td><td></td></tr><tr><td>Fetales Rinderserum (FBS)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A5209501</td><td></td></tr><tr><td>Fiji-Bildanalyse-Software</td><td>Nationale Gesundheitsinstitute</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flexcell FX-6000 Zug- und Gewebezugsystem (umfasst Flexlink FX-6000 Zugregler, Druckreservoir, Grundplatten, Acrylfenster, zylindrische Ladestationen mit 25 mm Durchmesser, Wasserfall, FlexSoft FX-6000 V1.0 Software und verschiedene Schläuche)</td><td>Flexcell International</td><td>FX6000T</td><td></td></tr><tr><td>Humanes Interleukin-6 Duoset ELISA</td><td>Bio-Techne</td><td>DY206</td><td></td></tr><tr><td>Humanes Interleukin-8 Duoset ELISA</td><td>Bio-Techne</td><td>DY208</td><td></td></tr><tr><td>Leica DMi8 Konfokalmikroskop</td><td>Leica Microsystems</td><td>11889122</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel-Basementmembran-Matrix</td><td>Corning</td><td>356237</td><td></td></tr><tr><td>MRC-5-Zellen</td><td>ATCC</td><td>CCL-185</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Millipore Sigma</td><td>P7793</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin (Pen/Strep)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Phalloidin-Markierungssonden, Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A12379</td><td></td></tr><tr><td>Phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Rattenschwanzkollagen I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3867</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinantes humanes Laktatdehydrogenaseprotein (aktiv)</td><td>Abcam</td><td>Ab93699</td><td></td></tr><tr><td>RIPA-Lysepuffer</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>89901</td><td></td></tr><tr><td>RNase-freie Mikrofugeröhrchen</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AM12400</td><td></td></tr><tr><td>T75 cm2 Kulturkolben</td><td>Greiner</td><td>658175</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100-5ML</td><td></td></tr><tr><td>ZO-1 monoklonaler Antikörper (ZO1-1A12), Alexa Fluor 594</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339194</td><td></td></tr></tbody></table>

erzeugung von 3d-kollagen-eingebetteten a549/mrc-5 alveolarorganoiden mit einem mechanischen zellstreckungs-bioreaktor

Generation of 3D Collagen-Embedded A549/MRC-5 Alveolar Organoids using a Mechanical Cell-Stretching Bioreactor

Erzeugung von 3D-kollagen-eingebetteten A549/MRC-5 Alveolarorganoiden mit einem mechanischen Zellstreckungs-Bioreaktor

Although breathing dynamics and mechanical strain play critical roles in alveolar biology, their contributions to the pathogenesis of respiratory diseases ...

generation-3d-collagen-embedded-a549mrc-5-alveolar-organoids-using

Research

Forschung

JoVE Journal

Bioengineering

Biotechnik

Es wird ein Verfahren zur Herstellung einer 3-dimensionalen Matrix, bestehend aus Kollagen Typ I und primären humanen Fibroblasten beschrieben. Diese organotypischen Gel dient als nützliches Substrat invasive Zellmigration beurteilen, da es grundlegende Funktionen von Gewebestroma nachahmt und ist offen für viele Formen der Mikroskopie.

Organotypische Collagen I Assay: A Temperguss Platform to Cell Verhalten in 3-Dimensional Kontext beurteilen

Ein neuartiges Bildgebungsprotokoll wurde entwickelt, das einen speziellen motorbetriebenen mechanischen Aktuator verwendet, um die Messung von Echtzeitreaktionen auf mechanische Dehnung in lebenden Zellen zu ermöglichen. Das für die Mechanobiologie relevante System kann Dehnungen von bis zu 20 % aufbringen und ermöglicht gleichzeitig eine Bildgebung nahezu in Echtzeit mit konfokaler oder Rasterkraftmikroskopie.

Live Cell Imaging bei Mechanical Stretch

In dieser Arbeit stellen wir eine Technik zur schnellen Herstellung von lebendem Gefäßgewebe durch direkte Kultivierung von Kollagen, glatten Muskelzellen und Endothelzellen vor. Darüber hinaus wird ein neues Protokoll zur mechanischen Charakterisierung von künstlich hergestellten Gefäßgeweben beschrieben.

Engineering 3D cellularized Kollagengele für Gefäßgeweberegeneration

Der Artikel beschreibt die schrittweise gerichtete Differenzierung von induzierten pluripotenten Stammzellen zu dreidimensionalen ganzen Lungenorganoiden, die sowohl proximale als auch distale epitheliale Lungenzellen zusammen mit Mesenchym enthalten.

Generierung von 3D-Ganzlungenorganoiden aus induzierten pluripotenten Stammzellen zur Modellierung der Lungenentwicklungsbiologie und -krankheit

Dieses Protokoll stellt eine Methode für die Kultur und das 3D-Wachstum von Ameloblasten-ähnlichen Zellen in Schwerelosigkeit vor, um ihre längliche und polarisierte Form sowie die schmelzspezifische Proteinexpression zu erhalten. Auch Kulturbedingungen für die Kultur von parodontalen Engineering-Konstrukten und Lungenorganen in Schwerelosigkeit werden beschrieben.

Vermehrung von Zahn- und Atmungszellen und -organen in Schwerelosigkeit

Das Protokoll beschreibt einen bildgebenden Bioreaktor, der die selektive Entfernung des endogenen Epithels aus der Luftröhre der Ratten und die homogene Verteilung exogener Zellen auf der Lumenoberfläche ermöglicht, gefolgt von einer langfristigen In-vitro-Kultur des Zell-Gewebe-Konstrukts.

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Das Protokoll stellt eine Methode vor, um menschliche Lungenorganoide aus primärem Lungengewebe abzuleiten, die Lungenorganoide zu erweitern und eine proximale Differenzierung zu induzieren, um 3D- und 2D-Atemwegsorganoide zu erzeugen, die das menschliche Atemwegsepithel originalgetreu phänokopieren.

Etablierung menschlicher Lungenorganoide und proximale Differenzierung zur Erzeugung reifer Atemwegsorganoide

Das vorliegende Protokoll beschreibt die Fähigkeiten und die wesentlichen Kulturmodalitäten des Open-Top Organ-Chips für die erfolgreiche Etablierung und Reifung von Organ-on-Chip-Kulturen in voller Dicke von primären Geweben (Haut, Alveole, Atemwege und Darm) und bietet die Möglichkeit, verschiedene funktionelle Aspekte der humanen epithelial/mesenchymalen und vaskulären Nischenschnittstelle in vitro zu untersuchen.

Rekonstitution der Zytoarchitektur und Funktion von humanem Epithelgewebe auf einem offenen Organchip

Darin demonstrieren wir ein dreistufiges Organoidmodell (zweidimensionale [2D]-Expansion, 2D-Stimulation, dreidimensionale [3D]-Reifung), das ein vielversprechendes Werkzeug für die Sehnengrundlagenforschung und eine potenziell gerüstfreie Methode für das Tendon Tissue Engineering bietet.

Demonstration einer selbstorganisierten Zellblattkultur und manuelle Generierung eines 3D-Sehnen-/Ligamenten-ähnlichen Organoids unter Verwendung humaner dermaler Fibroblasten

In dieser Studie wird eine kostengünstige und effiziente Methodik zur Generierung von 3D-Zellstrukturen unter Verwendung eines stempelbasierten Systems zur Erstellung von Mikrovertiefungen in Agaroseformen vorgestellt. Das System fördert die Bildung einheitlicher Sphäroide/Organoide und verbessert so die Zellinteraktionen. Dieser Ansatz reduziert die experimentelle Variabilität und unterstützt Anwendungen in der Wirkstoffdiagnostik und im Tissue Engineering.

Erzeugung von dreidimensionalen Sphäroiden/Organoiden aus zweidimensionalen Zellkulturen mit Hilfe eines neuartigen Stempelgeräts

Dieses Protokoll beschreibt eine definierte, hydrogelbasierte Methode zur Erzeugung menschlicher Brustorganoide, die zentrale Merkmale der Mammarienmorphogenese in einem kontrollierten dreidimensionalen Kultursystem nachbilden.

Eine definierte hydrogelbasierte Methode zur Erzeugung dreidimensionaler menschlicher Brustorganoide, die die Mammarienmorphogenese rekapitulieren

University of British Columbia - Okanagan.  Dieses Protokoll beschreibt die Erzeugung von Organoiden aus A549-alveolären Epithelzellen und MRC-5-Lungenfibroblasten auf einem extrazellulären Matrix-Hydrogelgerüst, gefolgt von der Einbettung in 3D-Kollagen-Gelen und der Exposition gegenüber mechanischer Belastung mit einem zelldehnenden Bioreaktor zur Untersuchung der alveolaren Mechanobiologie.

Erzeugung von 3D-kollagen-eingebetteten A549/MRC-5 Alveolarorganoiden mit einem mechanischen Zellstreckungs-Bioreaktor

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