Name: Charakterisierung der von Adipozyten abgeleiteten extrazellulären Vesikelsekretion mittels eines CD63-GFP-Reporter-Mausmodells in vivo und in vitro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-05T13:20:00.000+00:00
Duration: 10 min 40 s
Description: Erfahren Sie die Charakterisierung von extrazellulären Vesikeln aus Adipozyten mittels CD63-GFP-Reporter-Mausmodell in vivo und in vitro. Diese Methode ermöglicht die Visualisierung und Quantifizierung der EV-Sekretion im Fettgewebe.

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<li>Nordin, J. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrafiltration+with+size-exclusion+liquid+chromatography+for+high+yield+isolation+of+extracellular+vesicles+preserving+intact+biophysical+and+functional+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Ultrafiltration with size-exclusion liquid chromatography for high yield isolation of extracellular vesicles preserving intact biophysical and functional properties.</a> Nanomedicine. 11 (4), 879-883 (2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,5 M EDTA, pH 8,0</td><td>Fisher</td><td>AM9260G</td><td>500-fache Verdünnung</td></tr><tr><td>10x PBS</td><td>Fisher Scientific</td><td>70-013-032</td><td>1000-fache Verdünnung mit Wasser</td></tr><tr><td>1 M HEPES</td><td>Gibco</td><td>15630080</td><td>1000-fache Verdünnung</td></tr><tr><td>Fettgewebe-Vorläufer-Isolationsset, Maus</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>30-106-639</td><td>Gebrauchsfertig</td></tr><tr><td>Amicon Ultra-Zentrifugalfilter, 100 kDa MWCO</td><td>Sigma</td><td>UFC9100</td><td>15 mL Abtastvolumen</td></tr><tr><td>Amicon Ultra-Zentrifugalfilter, 100 kDa MWCO</td><td>Sigma</td><td>UFC9100</td><td>4 mL Abtastvolumen</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma</td><td>A6003</td><td>Gebrauchsfertig</td></tr><tr><td>Calnexin-Antikörper</td><td>Calnexin</td><td>ab22595</td><td>1000-fache Verdünnung</td></tr><tr><td>CD63-Antikörper</td><td>abcam</td><td>ab217345</td><td>500-fache Verdünnung</td></tr><tr><td>CD81</td><td>Zellsignaltechnik</td><td>10037er</td><td>500-fache Verdünnung</td></tr><tr><td>Corning&nbsp; BioCoat&nbsp; Kollagen-I-Kulturfolie</td><td>Sigma</td><td>CLS354630</td><td>Gebrauchsfertig</td></tr><tr><td>Corning&nbsp; Zellsieb</td><td>Sigma</td><td>CLS431750</td><td>40 &mu; m Porengröße</td></tr><tr><td>Corning&nbsp; Zellsieb</td><td>Sigma</td><td>CLS431752</td><td>100 & mu; m Porengröße</td></tr><tr><td>COX IV Antikörper</td><td>Zell-Signaltechnik</td><td>4844</td><td>1000-fache Verdünnung</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td>Gebrauchsfertig</td></tr><tr><td>DMEM/F-12, GlutaMAX-Supplement</td><td>Thermofisher</td><td>10565018</td><td>Gebrauchsfertig</td></tr><tr><td>Dnase 1</td><td>Sigma</td><td>D4513</td><td>Serienmäßig 5 KU/mL bei -20 °F & Grad; C</td></tr><tr><td>GlutaMAX-Ergänzungsmittel</td><td>Gibco</td><td>35050061</td><td>100-fache Verdünnung</td></tr><tr><td>Halt&trade; Protease- und Phosphataseinhibitor-Cocktail (100X)</td><td>Thermofisher</td><td>78444</td><td>Gebrauchsfertig</td></tr><tr><td>HSP70-Antikörper</td><td>abcam</td><td>ab181606</td><td>1000-fache Verdünnung</td></tr><tr><td>Invitrogen eBioscience 10X RBC-Lysepuffer (Multi-Species)</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-112-9743</td><td>10-fache Verdünnung im Wasser</td></tr><tr><td>Izon Science Usa Ltd QEVORIGINAL 70NMGEN2 5/PK SDP</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC2042225</td><td>Gebrauchsfertig</td></tr><tr><td>LEICA STELLARIS 8 Konfokalmikroskop</td><td>Leica-Mikroskope</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Liberase TM Forschungsbewertung</td><td>Sigma</td><td>LIBTM-RO</td><td>Lagere 5 mg/mL bei -20 °C; C</td></tr><tr><td>Millex MCE-Spritzenfilter</td><td>Sigma</td><td>SLAA025</td><td>0,8 &mu; m Porengröße</td></tr><tr><td>NanoSight Pro</td><td>Malvern Panalytical</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Novex Tris-Glycin Mini Protein Gels, 4&ndash; 12%,</td><td>Thermofisher</td><td>XP04120BOX</td><td>Gebrauchsfertig</td></tr><tr><td>Novex Tris-Glycin SDS Probenpuffer (2x)</td><td>Thermofisher</td><td>LC2676</td><td>Gebrauchsfertig</td></tr><tr><td>Pazifikblauer Anti-Maus-Antikörper Ly-6A/E (Sca-1)</td><td>BioLegend</td><td>108119</td><td>25-fache Verdünnung</td></tr><tr><td>Paraformaldehydlösung (16 %)</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-980-487</td><td>mit PBS auf 4 % verdünnen</td></tr><tr><td>pluriStrainer S / 30 &micro; m (Zell-Sieb)</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC0922459</td><td>30 &mu; m Porengröße</td></tr><tr><td>Ponceau-S-Lösung</td><td>Sigma</td><td>P7170-1L</td><td>Gebrauchsfertig</td></tr><tr><td>Primocin</td><td>Invivogen</td><td>NC9141851</td><td>500-fache Verdünnung</td></tr><tr><td>ProLong-Gold-Antifade-Reagenz mit DAPI</td><td>Zell-Signaltechnik</td><td>8961S</td><td>Gebrauchsfertig</td></tr><tr><td>Gereinigter Antimaus-Antikörper CD16/32</td><td>BioLegend</td><td>101301</td><td>100-fache Verdünnung</td></tr><tr><td>RIPA buffer&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>PI89900</td><td>10-fache Verdünnung im Wasser</td></tr><tr><td>Spektrales Flusszytometer (Aurora 3)</td><td>Cytek Biosciences</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Syntaxin-4-Antikörper</td><td>Synaptische Systeme</td><td>110042</td><td>5000-fache Verdünnung</td></tr><tr><td>Tecnai 20 (Transmissionselektronenmikroskop)</td><td>FEI</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Tergeo-EM</td><td>PIE Scientific LLC</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Vinculin-Antikörper</td><td>abcam</td><td>ab18508</td><td>5000-fache Verdünnung</td></tr></tbody></table>

charakterisierung der von adipozyten abgeleiteten extrazellulären vesikelsekretion mittels eines cd63-gfp-reporter-mausmodells in vivo und in vitro

Characterization of Adipocyte-Derived Extracellular Vesicle Secretion Using a CD63-GFP Reporter Mouse Model In Vivo and In Vitro

Mit diesem Protokoll zur AdEV-Erkennung durch APC-Aufnahme mittels Konfokalmikroskopie isolierten wir APCs aus den inguinalen Fettgeweben von AdipCD63-GFP und Stopfl/fl/CD63-GFP-Mäusen und färbten sie mit DAPI zur Visualisierung der Kerne. Bei der Untersuchung durch eine konfokale Mikroskopie zeigten APCs von Stopfl/fl/CD63-GFP-Mäusen keine nachweisbaren GFP-Puncta (Abbildung 1A). Im Gegensatz dazu wiesen APCs, die von AdipCD63-GFP-Mäusen isoliert wurden, zahlreiche unt...

Charakterisierung der von Adipozyten abgeleiteten extrazellulären Vesikelsekretion mittels eines CD63-GFP-Reporter-Mausmodells in vivo und in vitro

Adipocytes are increasingly recognized as active endocrine cells that secrete substantial quantities of EVs enriched in proteins, lipids, and nucleic ...

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Die endotheliale Glykokalyx / endothelial Oberflächenschicht ist ideal studiert mit Intravitalmikroskopie. Intravitalmikroskopie ist technisch anspruchsvoll in einem sich bewegenden Organ wie der Lunge. Wir zeigen, wie die gleichzeitige Hellfeld und Fluoreszenzmikroskopie verwendet werden, um Endotheloberfläche Schichtdicke in einem frei beweglichen...

In vivo Messung der Maus Pulmonary Endothelial Surface Layer

Dieses Protokoll beschreibt Verfahren zur Reinigung, Quantifizierung und Charakterisierung von extrazellulären Vesikeln (EVs) / Exosomen aus nicht adhärenten / mesenchymalen Mamma-Epithelzellen und zur Verwendung derselben zur Übertragung der Brustdrüsen-bildenden Fähigkeit zu luminalen Mamma-Epithelzellen. EVs / Exosomen, die aus Stamm-ähnlichen Mamma-Epithelzellen gewonnen werden, können diese Zell-Eigenschaft in Zellen übertragen, die die EVs / Exosomen einnehmen.

Übertragung der Mamma-Drüsen-bildenden Fähigkeit zwischen Mamma-Basal-Epithelzellen und Mamma-Luminalzellen über extrazelluläre Vesikel / Exosomen

Die Unterscheidung von weiß und Beige Adipozyten aus Fettgewebe vaskulären Stammeltern trägt metabolische Verbesserungspotenzial bei Adipositas. Protokolle beschrieben für eine CD34 + CD31 + Endothelzellen losgelöst von menschlichen Fett und für eine spätere in-vitro- Erweiterung und Differenzierung in weiß und Beige Adipozyten. Mehrere downstream-Anwendungen werden diskutiert.

Isolation, Expansion und Adipogenen Induktion von CD34 + CD31 + Endothelial Zellen aus menschlichen Omentalis und subkutanem Fettgewebe

In diesem Protokoll beschreiben wir den kompletten Workflow für die schnelle Isolierung von extrazellulären Vesikeln aus menschlichen Vollblut und Charakterisierung spezifischer Marker durch Fluoreszenz-basierte Nanopartikel-Tracking-Analyse. Die vorgestellten Ergebnisse zeigen ein hohes Maß an Reproduzierbarkeit und Zelle Kultur Überstände angepasst werden können.

Rasche Fluoreszenz basierende Charakterisierung der einzelnen extrazelluläre Vesikel im menschlichen Blut mit Nanopartikel-Tracking Analyse

Wir beschreiben ein 3D-Human-Human-Extrazellmatrix-Adipozyten-In-vitro-Kultursystem, das die Zerlegung der Rollen der Matrix und der Adipozyten bei der Kodipierung des metabolischen Phänotyps des Fettgewebes ermöglicht.

Ein menschliches 3D extrazelluläres Matrix-Adipozyten-Kulturmodell zum Studium der Matrix-Zell Metabolischen Crosstalk

Die neueste Generation von EV-Charakterisierungswerkzeugen ist in der Lage, eine einzelne EV-Analyse über mehrere Parameter gleichzeitig durchzuführen. Die Nano-Durchflusszytometrie misst alle biologischen Partikel größer als 45 nm ohne Markierung und identifiziert spezifische Eigenschaften von Subpopulationen durch eine Vielzahl von fluoreszierenden Markierungstechniken.

Charakterisierung einzelner extrazellulärer Vesikel-Transmembranproteine mittels Nano-Durchflusszytometrie

Das vorliegende Protokoll beschreibt die differentielle Zentrifugation zur Isolierung und Charakterisierung repräsentativer EVs (Exosomen und Mikrovesikel) aus kultivierten humanen MSCs. Weitere Anwendungen dieser Elektrofahrzeuge werden ebenfalls in diesem Artikel erläutert.

Isolierung, Charakterisierung und therapeutische Anwendung extrazellulärer Vesikel aus kultivierten humanen mesenchymalen Stammzellen

Dieses Protokoll beschreibt alle Verfahren, von der Kultivierung humaner mesenchymaler Stammzellen (ADSCs) aus Fettgewebe über die Entnahme von Überständen bis hin zur Extraktion extrazellulärer Vesikel (EVs) mittels Ultrazentrifugation.

Aufreinigung und Charakterisierung extrazellulärer Vesikel aus humanen mesenchymalen Stammzellen aus Fettgewebe

Hier beschreiben wir ein Protokoll zur Isolierung, Kultivierung und Phänotypisierung von mikrovaskulären Endothelzellen aus humanem subkutanem Fettgewebe (hSATMVECs). Zusätzlich beschreiben wir ein experimentelles Modell des hSATMVEC-Adipozyten-Cross-Talks.

Untersuchung der Wechselwirkung zwischen Fettendothelzellen und Adipozyten im menschlichen subkutanen Fettgewebe

Mit einem ex-vivo-Explant-Modell werden kleine Stücke des rostralen Anteils des viszeralen weißen Fettgewebes von mageren Mäusen 7–10 Tage lang kultiviert, was die Induktion und Untersuchung der Entzündung von Fettgewebe während der fettreichen Ernährung ermöglicht.

Ein ex vivo Mausmodell für fettreiche, diätähnliche Fettgewebeentzündung

Erfahren Sie die Charakterisierung von extrazellulären Vesikeln aus Adipozyten mittels CD63-GFP-Reporter-Mausmodell in vivo und in vitro. Diese Methode ermöglicht die Visualisierung und Quantifizierung der EV-Sekretion im Fettgewebe.

Charakterisierung der von Adipozyten abgeleiteten extrazellulären Vesikelsekretion mittels eines CD63-GFP-Reporter-Mausmodells in vivo und in vitro (Video) | JoVE Journal

Charakterisierung der von Adipozyten abgeleiteten extrazellulären Vesikelsekretion mittels eines CD63-GFP-Reporter-Mausmodells in vivo und in vitro

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