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<ol><li>Poss, K. D., Wilson, L. G., Keating, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+regeneration+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Science+%281979%29%22%5BJournal%5D)">Heart regeneration in zebrafish.</a> Science (1979). 298 (5601), 2188-2190 (2002).</li>
<li>Jopling, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+heart+regeneration+occurs+by+cardiomyocyte+dedifferentiation+and+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Zebrafish heart regeneration occurs by cardiomyocyte dedifferentiation and proliferation.</a> Nature. 464 (7288), 606-609 (2010).</li>
<li>Kikuchi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+contribution+to+zebrafish+heart+regeneration+by+gata4%2B+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Primary contribution to zebrafish heart regeneration by gata4+ cardiomyocytes.</a> Nature. 464 (7288), 601-605 (2010).</li>
<li>Bertozzi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+zebrafish+heart+regeneration+%22complete%22%3F+Lineage-restricted+cardiomyocytes+proliferate+to+pre-injury+numbers+but+some+fail+to+differentiate+in+fibrotic+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Is zebrafish heart regeneration "complete"? Lineage-restricted cardiomyocytes proliferate to pre-injury numbers but some fail to differentiate in fibrotic hearts.</a> Dev Biol. 471, 106-118 (2021).</li>
<li>Nguyen, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interplay+between+calcium+and+sarcomeres+directs+cardiomyocyte+maturation+during+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science+%281979%29%22%5BJournal%5D)">Interplay between calcium and sarcomeres directs cardiomyocyte maturation during regeneration.</a> Science (1979). 380 (6646), 758-764 (2023).</li>
<li>Fukuda, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stimulation+of+glycolysis+promotes+cardiomyocyte+proliferation+after+injury+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Rep%22%5BJournal%5D)">Stimulation of glycolysis promotes cardiomyocyte proliferation after injury in adult zebrafish.</a> EMBO Rep. 21 (8), e49752(2020).</li>
<li>Honkoop, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+analysis+uncovers+that+metabolic+reprogramming+by+ErbB2+signaling+is+essential+for+cardiomyocyte+proliferation+in+the+regenerating+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Single-cell analysis uncovers that metabolic reprogramming by ErbB2 signaling is essential for cardiomyocyte proliferation in the regenerating heart.</a> Elife. 8, e50163(2019).</li>
<li>Lekkos, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+phosphorylation+is+required+for+cardiomyocyte+redifferentiation+and+long-term+fish+heart+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Oxidative phosphorylation is required for cardiomyocyte redifferentiation and long-term fish heart regeneration.</a> Nat Cardiovasc Res. 4 (10), 1363-1380 (2025).</li>
<li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Langendorff-like+system+to+quantify+cardiac+pump+function+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">A Langendorff-like system to quantify cardiac pump function in adult zebrafish.</a> Dis Model Mech. 11 (9), dmm034819(2018).</li>
<li>Zhang, P. C., Llach, A., Sheng, X. Y., Hove-Madsen, L., Tibbits, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+handling+in+zebrafish+ventricular+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Calcium handling in zebrafish ventricular myocytes.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 300, 56-66 (2011).</li>
<li>Lin, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+and+use+of+a+zebrafish+heart+voltage+and+calcium+optical+mapping+system%2C+with+integrated+electrocardiogram+and+programmable+electrical+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Construction and use of a zebrafish heart voltage and calcium optical mapping system, with integrated electrocardiogram and programmable electrical stimulation.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 308, R755-R768 (2015).</li>
<li>Miklas, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino+acid+primed+mTOR+activity+is+essential+for+heart+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Amino acid primed mTOR activity is essential for heart regeneration.</a> iScience. 25 (1), 103574(2022).</li>
<li>García-Poyatos, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cox7a1+controls+skeletal+muscle+physiology+and+heart+regeneration+through+complex+IV+dimerization%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Cox7a1 controls skeletal muscle physiology and heart regeneration through complex IV dimerization.</a> Dev Cell. 59 (14), 1824-1841.e10 (2024).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22How+Agilent+Seahorse+XF+Analyzers+Work%22">How Agilent Seahorse XF Analyzers Work</a>. , Agilent. https://www.agilent.com/en/products/cell-analysis/how-seahorse
-xf-analyzers-work?srsltid=AfmBOopkIZodH4uZO
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<li>Yoo, I., Ahn, I., Lee, J., Lee, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+flux+assay+%28Seahorse+assay%29%3A+Diverse+applications+in+metabolic+research+across+biological+disciplines%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cells%22%5BJournal%5D)">Extracellular flux assay (Seahorse assay): Diverse applications in metabolic research across biological disciplines.</a> Mol Cells. 47 (8), 100095(2024).</li>
<li>Chablais, F., Jaźwińska, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+myocardial+infarction+in+adult+zebrafish+using+cryoinjury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Induction of myocardial infarction in adult zebrafish using cryoinjury.</a> J Vis Exp. (62), e3666(2012).</li>
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<li>Aleström, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+Housing+and+husbandry+recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: Housing and husbandry recommendations.</a> Lab Anim. 54 (3), 213-224 (2019).</li>
<li>Singleman, C., Holtzman, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+dissection+in+larval%2C+juvenile+and+adult+zebrafish%2C+Danio+rerio%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Heart dissection in larval, juvenile and adult zebrafish, Danio rerio.</a> J Vis Exp. (55), e3165(2011).</li>
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<li>Cook, M., Lal, S., Hume, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional%2C+proteomic+and+metabolic+drivers+of+cardiac+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Heart%22%5BJournal%5D)">Transcriptional, proteomic and metabolic drivers of cardiac regeneration.</a> Heart. 111 (18), 851-858 (2025).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+reprogramming%3A+A+byproduct+or+a+driver+of+cardiomyocyte+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Metabolic reprogramming: A byproduct or a driver of cardiomyocyte proliferation.</a> Circulation. 149 (20), 1598-1610 (2024).</li>
<li>Bond, S. T., McEwen, K. A., Yoganantharajah, P., Gibert, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+metabolic+profile+analysis+of+zebrafish+embryos+using+a+seahorse+XF+24+extracellular+flux+analyzer%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Live metabolic profile analysis of zebrafish embryos using a seahorse XF 24 extracellular flux analyzer.</a> Methods Mol Biol. 1797, 393-401 (2018).</li>
<li>Gibert, Y., McGee, S. L., Ward, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+profile+analysis+of+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Metabolic profile analysis of zebrafish embryos.</a> J Vis Exp. (71), e4300(2013).</li>
<li>Trampel, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seahorse+metabolic+analysis+for+human+and+mouse+cardiac+organotypic+slices%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Seahorse metabolic analysis for human and mouse cardiac organotypic slices.</a> bioRxiv. , (2025).</li>
<li>Ruggiero, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+balanced+circadian+glycolytic+rhythm+drives+cardiomyocyte+cell+cycle+progression+during+fish+heart+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">A balanced circadian glycolytic rhythm drives cardiomyocyte cell cycle progression during fish heart regeneration.</a> bioRxiv. , (2025).</li>
<li>Lee, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+assessment+of+cardiac+responses+of+adult+zebrafish+%28Danio+rerio%29+to+acute+and+chronic+temperature+change+using+high-resolution+echocardiography%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Functional assessment of cardiac responses of adult zebrafish (Danio rerio) to acute and chronic temperature change using high-resolution echocardiography.</a> PLoS One. 11 (1), e0145163(2016).</li>
<li>Shaftoe, J. B., Geddes-McAlister, J., Gillis, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+cellular+response+of+the+zebrafish+%28Danio+rerio%29+heart+to+temperature+change%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Integrated cellular response of the zebrafish (Danio rerio) heart to temperature change.</a> J Exp Biol. 227 (20), jeb247522(2024).</li>
<li>Ryan, R., Moyse, B. R., Richardson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+cardiac+regeneration%E2%80%94looking+beyond+cardiomyocytes+to+a+complex+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish cardiac regeneration—looking beyond cardiomyocytes to a complex microenvironment.</a> Histochem Cell Biol. 154 (5), 533-548 (2020).</li>
<li>Angelini, A., Pi, X., Xie, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+long-chain+fatty+acid+respiration+in+neonatal+mouse+cardiomyocytes+using+SeaHorse+instrument%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Evaluation of long-chain fatty acid respiration in neonatal mouse cardiomyocytes using SeaHorse instrument.</a> STAR Protoc. 3 (2), 101392(2022).</li>
<li>Ludikhuize, M. C., Meerlo, M., Burgering, B. M. T., Rodríguez Colman, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+to+profile+the+bioenergetics+of+organoids+using+Seahorse%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol to profile the bioenergetics of organoids using Seahorse.</a> STAR Protoc. 2 (1), 100386(2021).</li>
<li>Neary, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+signaling+controls+postnatal+changes+in+cardiac+mitochondrial+morphology+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Hypoxia signaling controls postnatal changes in cardiac mitochondrial morphology and function.</a> J Mol Cell Cardiol. 74 (100), 340-352 (2014).</li>
<li>Cheng, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+changes+associated+with+cardiomyocyte+dedifferentiation+enable+adult+mammalian+cardiac+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Metabolic changes associated with cardiomyocyte dedifferentiation enable adult mammalian cardiac regeneration.</a> Circulation. 146 (25), 1950-1967 (2022).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+fatty+acid+oxidation+enables+heart+regeneration+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Inhibition of fatty acid oxidation enables heart regeneration in adult mice.</a> Nature. 622 (7983), 619-626 (2023).</li>
<li>Mookerjee, S. A., Goncalves, R. L. S., Gerencser, A. A., Nicholls, D. G., Brand, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+contributions+of+respiration+and+glycolysis+to+extracellular+acid+production%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">The contributions of respiration and glycolysis to extracellular acid production.</a> Biochim Biophys Acta. 1847 (2), 171-181 (2015).</li>
<li>Mookerjee, S. A., Brand, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+and+analysis+of+extracellular+acid+production+to+determine+glycolytic+rate%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Measurement and analysis of extracellular acid production to determine glycolytic rate.</a> J Vis Exp. (106), e53464(2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1,5 ml Eppendorf-Röhren&nbsp;</td><td>Starlab</td><td>S1615-5550</td><td></td></tr><tr><td>96-Well-Platten&nbsp;</td><td>ThermoFisher</td><td>AB-0800</td><td></td></tr><tr><td>Antimycin A</td><td>ChemCruz&nbsp;</td><td>sc-202467A</td><td></td></tr><tr><td>DMEM-Medium</td><td>Agilent</td><td>1035755-100</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>D2650-100mL</td><td></td></tr><tr><td>Trockeneis &nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Supelco</td><td>1.00983.2500</td><td></td></tr><tr><td>Extrazelluläres Flussassay Kit&nbsp;</td><td>Agilent</td><td>103518-100</td><td>Pack enthält Utility-Platte, Hydro-Booster, Sensorkartusche, Deckel (wird mit den Inselplatten geliefert)</td></tr><tr><td>FCCP</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>C2920</td><td></td></tr><tr><td>Glukose</td><td>Agilent</td><td>103577-100</td><td></td></tr><tr><td>Glutamin</td><td>Agilent</td><td>103579-100</td><td></td></tr><tr><td>Inkubator</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Insel-Capture-Mikroplatte</td><td>Agilent</td><td>101122-100</td><td>25 Startfelder sind im Feld enthalten</td></tr><tr><td>Islet-Capture-Bildschirm-Inster-Tool</td><td>Agilent</td><td>101135-100</td><td></td></tr><tr><td>Mikrodissektionszangen</td><td>ideal-tek</td><td>3131760</td><td>Größe 5-S (2x werden benötigt, um den Ventrikel vom Bulbus arteriosus und dem Vorhof zu isolieren)</td></tr><tr><td>Mikrodissektionsschere</td><td>FST</td><td>15009-08</td><td></td></tr><tr><td>MS-222</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>E10521</td><td></td></tr><tr><td>Oligomycin</td><td>MP&nbsp;</td><td>151786</td><td></td></tr><tr><td>Schockelmottor-Homogenisierer&nbsp;</td><td>VWR</td><td>431-0100</td><td></td></tr><tr><td>Stößel</td><td>VWR</td><td>431-0094</td><td></td></tr><tr><td>Petrischaal 35mm</td><td>Greiner Bio-One</td><td>627102</td><td></td></tr><tr><td>Petrischale 92mm</td><td>Starstedt</td><td>82.1473</td><td></td></tr><tr><td>Pierce BCA Assay Kit</td><td>Thermowissenschaftlich</td><td>23227</td><td></td></tr><tr><td>Pierce Protease und Phosphataseinhibitor Mini-Tabletten, frei von EDTA</td><td>Thermowissenschaftlich</td><td>A32961</td><td></td></tr><tr><td>Pyruvat</td><td>Agilent</td><td>103578-100</td><td></td></tr><tr><td>RIPA-Lysepuffer</td><td>Santa-crus</td><td>SC-364162</td><td></td></tr><tr><td>Rotenon</td><td>MP&nbsp;</td><td>02150154-CF</td><td></td></tr><tr><td>Seahorse Analytics Agilent Interphase</td><td>Agilent</td><td>https://www.agilent.com/en/product/cell-analysis/real-time-cell-metabolic-analysis/xf-software/agilent-seahorse-analytics-787485</td><td></td></tr><tr><td>Seahorse XFe24 Analysator</td><td>Agilent</td><td>https://www.agilent.com/en/product/cell-analysis/real-time-cell-metabolic-analysis/xf-analyzers/seahorse-xfe24-analyzer-740878</td><td></td></tr><tr><td>Versiegelung</td><td>Thermowissenschaftlich</td><td>AB-0558</td><td></td></tr><tr><td>SPECTROstar Nano</td><td>MG LABTECH GmbH</td><td>601-0298</td><td></td></tr><tr><td>Schwamm</td><td></td><td></td><td>Machen Sie einen Schnitt, der lang und tief genug ist, damit die Bauchseite des Fisches nach oben passt</td></tr><tr><td>Wave (Version 2.6.1.56)</td><td>Agilent</td><td>https://www.agilent.com/en/products/cell-analysis/software-download-for-wave-desktop</td><td></td></tr><tr><td>XF Kalibrant&nbsp;</td><td>Agilent</td><td>100840-000</td><td></td></tr></tbody></table>

bewertung der stoffwechselaktivität ganzer regenerierender zebrafischventrikel ex vivo mittels eines extrazellulären flusstests

Assessing the Metabolic Activity of Whole Regenerating Zebrafish Ventricles Ex Vivo Using an Extracellular Flux Assay

Bewertung der Stoffwechselaktivität ganzer regenerierender Zebrafischventrikel ex vivo mittels eines extrazellulären Flusstests

The ability of zebrafish to regenerate their hearts throughout adulthood is partially attributed to metabolic adaptations. Although it has been ...

Der Seepferdchen-Assay ermöglicht die hochdurchsatzfähige Beurteilung des Stoffwechsels in intakten Zebrafischventrikeln ex vivo. Diese Methode kann verwendet werden, um genetische Störungen in Stoffwechselgenen zu validieren und Veränderungen des Stoffwechsels während der Regeneration zu charakterisieren. Schalten Sie das System ein und bereiten Sie alle Wirkstofflösungen und Medien vor, bevor Sie mit dem Experiment beginnen.Wählen Sie auf der Seite „Gruppendefinitionen“ in der WAVE-Software unter dem Reiter „Injektionsstrategien“ im Verbindungskatalog Oligomycin für Port A, Carbonylcyanid-4-trifluormethoxyphenylhydrazon oder FCCP für Port B und die Mischung aus Rotenon und Antimycin für Port C zu. Löschen Sie alle vorhandenen Injektionsstrategien, sobald die experimentelle Strategie definiert ist. Definieren Sie anschließend im Bereich „Gruppen“ die experimentellen Gruppen und weisen Sie ihnen die entsprechende Injektionsstrategie zu.Wählen Sie auf der Seite „Plate Map“ die Positionen der Proben in der 24-Loch-Platte aus, indem Sie jede Gruppe und die entsprechenden Löcher anklicken und dabei vier Löcher als Leerwerte freilassen. Gehen Sie auf der Seite „Protocol“ dazu über, unnötige Kontroll- oder Experimentreiter zu entfernen, und passen Sie die Portzuordnungen der Software an die Medikamentenpositionen auf der Kartusche an. Legen Sie 10 Zyklen für die Grundlinie, drei Zyklen für Oligomycin, sieben Zyklen für FCCP und neun Zyklen für die Mischung aus Rotenon und Antimycin A fest.Stellen Sie sicher, dass jeder Zyklus aus drei Minuten Mischen, zwei Minuten Warten und drei Minuten Messen besteht. Entfernen Sie die Kartusche und die Hilfsplatte aus dem befeuchteten Inkubator, der am Vortagabend vorbereitet wurde. Entfernen Sie anschließend den Hydrobooster und den Deckel von der Kartusche und setzen Sie die Sensor-Kartusche auf die Hilfsplatte mit Kalibrierflüssigkeit. Pipettieren Sie die Inhibitoren vorsichtig in die jeweiligen Anschlüsse an der Seitenwand und vermeiden Sie Klopfen. Wählen Sie in der Software „Assay ausführen“. Benennen Sie den Durchlauf und klicken Sie auf „Durchlauf starten“.Speichern Sie den Durchlauf mit einem Dateinamen und laden Sie den Assay. Sobald das Fach des Analysators geöffnet wird, platzieren Sie die mit Wirkstoffen beladene Kartusche und die Hilfsplatte mit Kalibrierstoff gemäß der Plattenkarte auf dem Fach. Drücken Sie auf Assay starten, um den Assay zu beginnen.Nachdem Sie die Augenloch-Fang-Mikroplatte mit isolierten Herzen mit einem Gitter abgedeckt haben, überprüfen Sie, ob alle Vertiefungen erfolgreich mit dem grünen Haken in der Software kalibriert wurden. Klicken Sie anschließend auf „Open Tray“, um die Hilfsplatte auszuwerfen. Setzen Sie die Augenloch-Mikroplatte ohne Deckel in den Analysator ein, wobei A1 in der oberen linken Ecke positioniert sein muss, und klicken Sie auf „Load Cell Plate“, um das Experiment zu starten.Wenn das Experiment abgeschlossen ist, klicken Sie auf „Eject“, um die Eyelet-Mikroplatte und die Kartusche auszuwerfen. Entfernen Sie die ausgeworfene Eyelet-Platte und die Kartusche vom Analysator und schließen Sie die Kartusche mit dem Deckel. Lagern Sie die Eyelet-Platte auf Trockeneis.Klicken Sie dann auf Fertig, um das Fach zu schließen. Schließen Sie abschließend mit Klick auf Ergebnisse anzeigen ab, um die Daten zu visualisieren. Speichern Sie die Messungen und exportieren Sie sie vom Analysator-Computer aus.Laden Sie die Daten auf die Analytikschnittstelle hoch und wählen Sie den Sauerstoffverbrauch oder OCR-Diagramm aus den Standardansichten aus. Zeigen Sie den OCR- und den extrazellulären Säuregehalt (ECAR) an und korrigieren Sie den Hintergrund mithilfe leerer Vertiefungen. Wählen Sie Vertiefungen aus der Plattenkarte aus, um Daten anzuzeigen oder auszublenden.Nach der Quantifizierung der Proteinspiegel die OCR- und ECAR-Messungen normalisieren, um einen zuverlässigen Vergleich zwischen den Proben zu gewährleisten. Wildtyp-Ventrikel ohne Verletzung und ohne Behandlung mit Wirkstoff zeigten eine stabile Sauerstoffverbrauchsrate und extrazelluläre Säuerungsrate, was auf eine normale Atmungsfunktion der Ventrikel und deren Überleben unter ex vivo-Bedingungen hinweist. Ein leichter Anstieg der Sauerstoffverbrauchsrate wurde bei 10 µM Oligomycin, 8 µM FCCP sowie 25 µM Rotenon und Antimycin beobachtet.Ein etwas stärkerer Anstieg wurde bei 50 µM Oligomycin, 30 µM FCCP sowie 45 µM Rotenon und Antimycin beobachtet. Nach der Permeabilisierung zeigte die Sauerstoffverbrauchsrate eine anhaltende Abnahme und stieg nach der Gabe von FCCP nicht an, was auf einen metabolischen Ausfall der permeabilisierten Ventrikel hinweist. Die Behandlung mit Oligomycin verändert die Sauerstoffverbrauchsrate nicht signifikant.FCCP erhöhte die Sauerstoffverbrauchsrate und die extrazelluläre Säurebildungsrate, wobei die Ventrikel mit Überexpression des zytosolischen Malatdehydrogenase-1-AB die höchste maximale respiratorische Kapazität im Vergleich zu Kontrollventrikeln zeigten. Mit diesem Protokoll können die Sauerstoffverbrauchsrate und die extrazelluläre Säurebildungsrate von Zebrafissherzen ex vivo gemessen werden. Die ECAR-Daten spiegeln nicht nur die aus der Glykolyse stammende Milchsäure, sondern auch das aus der Atmung stammende Kohlendioxid wider, beide beeinflussen die extrazelluläre Säurebildung.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Developmental Biology

Entwicklungsbiologie

Zebrafisch stellen eine leistungsstarke Wirbeltier-Modell, das schon für metabolische Studien nicht ausreichend genutzt hat. Hier beschreiben wir eine schnelle Methode, um die...

Metabolic-Profil-Analyse von Zebrafischembryonen

Zebrafische sind ein wichtiger Modellorganismus für die Erforschung der Energiehomöostase.  Durch die Verwendung eines NADH2-empfindlichen Redoxindikators, alamar Blue, haben wir einen Assay entwickelt, der die Stoffwechselrate von Zebrafischlarven in einem 96-Well-Plattenformat misst und in der Arzneimittel- oder Genforschung eingesetzt werden kann.

Hochdurchsatz-<em&gt; Danio rerio</em&gt; Energieumsatz-Assay

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur Entwicklung von Herzen im Zebrafisch in 4 Dimensionen (4D) zu visualisieren. 4-D-Bildgebung, über Licht-Blatt Fluoreszenz-Mikroskopie (LSFM) dauert 3-dimensionale (3D) Bilder im Laufe der Zeit entwickelnde Herzen zu rekonstruieren. Wir zeigen qualitativ und quantitativ die Scherspannung aktiviert endokardialen Kerbe Signalisierung während der Entwicklung der Kammer, die kardiale Trabeculation fördert.

Licht-Blatt Fluoreszenz-Mikroskopie, 4-dimensionale Bilder über die Auswirkungen der modulierende Schubspannung auf entwickelnden Zebrafisches Herzen erfassen

Dieses Verfahren beschreibt Echtzeit Aufnahme von Sauerstoff-Verbrauch und extrazelluläre Übersäuerung Preise in explantierten Maus retinalen Gewebe mit einer extrazellulären Flux-Analyzer.

Messung des Energiestoffwechsels in explantierten Netzhautgewebe extrazelluläre Flux-Analyse

Ziel dieses Protokolls ist es, eine neuartige Methode zur Beurteilung der segmentalen Herzfunktion bei embryonalen Zebrafischen unter physiologischen und pathologischen Bedingungen zu beschreiben.

Displacement Analysis of Myocardial Mechanical Deformation (DIAMOND) Reveals Segmental Heterogeneity of Cardiac Function in Embryonic Zebrafish

Wir beschreiben ein Protokoll zur Beurteilung der Herzmorphologie und -funktion bei erwachsenen Zebrafischen mittels hochfrequenter Echokardiographie. Die Methode ermöglicht die Visualisierung des Herzens und die anschließende Quantifizierung von funktionellen Parametern wie Herzfrequenz (HR), Herzleistung (CO), Bruchflächenänderung (FAC), Auswurffraktion (EF) sowie Blutzufluss- und Abflussgeschwindigkeiten.

Hochfrequenz-Ultraschall-Echokardiographie zur Beurteilung der Herzfunktion von Zebrafischen

Dieses Protokoll verwendet Lichtblatt-Bildgebung, um die kontraktile Funktion des Herzens in Zebrafischlarven zu untersuchen und Einblicke in die Herzmechanik durch Zellverfolgung und interaktive Analyse zu gewinnen.

4D-Lichtblatt-Bildgebung der Herzkontraktion von Zebrafischen

Dieses Protokoll beschreibt eine kostengünstige Lichtmikroskopiemethode zur Beurteilung der Herzmorphologie und -funktion in Zebrafischembryonen, die eine reproduzierbare Bewertung der Entwicklungskardiotoxizität ermöglicht, ohne dass fortschrittliche Bildgebungssysteme erforderlich sind.

Funktionelle kardiale Bildgebung in Zebrafischembryonen mittels Standardmikroskopie und Videoanalyse: Anwendungen in der Umwelt- und biomedizinischen Forschung

Die vorgestellten Methoden bieten Schritt-für-Schritt-Anleitungen für die Durchführung einer Sammlung von mikrotiterplattenbasierten respirometrischen Assays unter Verwendung isolierter Mitochondrien aus minimalen Mengen von Maus-Skelettmuskeln. Diese Assays sind in der Lage, mechanistische Veränderungen/Anpassungen des mitochondrialen Sauerstoffverbrauchs in einem häufig verwendeten Tiermodell zu messen.

Verwendung von isolierten Mitochondrien aus minimalen Mengen an Maus-Skelettmuskel für die Hochdurchsatz-Mikroplatten-Atemmessungen

Die ex vivo aufrechte Tröpfchenkultur ist eine Alternative zu den derzeitigen in vitro und in vivo experimentellen Techniken. Dieses Protokoll ist einfach durchzuführen und erfordert kleinere Mengen an Reagenzien, ermöglicht aber die Manipulation und Untersuchung der fetalen Vaskularisation, Morphogenese und Organogenese.

Verwendung<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Upright Droplet Kulturen von Whole Fetal Orgeln zu Entwicklungsprozessen während der Maus Organogenese Studieren

University of Oxford.  In diesem Artikel beschreiben wir ein detailliertes Protokoll zur Quantifizierung der Sauerstoffverbrauchsrate und der extrazellulären Versauerungsrate der ex-vivo erwachsenen Zebrafischventrikel, um deren oxidative und glykolytische Stoffwechselkapazität zu charakterisieren.

Bewertung der Stoffwechselaktivität ganzer regenerierender Zebrafischventrikel ex vivo mittels eines extrazellulären Flusstests

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