Name: In vitro Funktionelle Analyse regulatorischer T-Zellen: Fokus auf Proliferation und Differenzierung (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-09T14:05:00.000+00:00
Duration: 10 min 21 s
Description: Lernen Sie die modifizierte in vitro Treg-Suppressionsanalyse zur gleichzeitigen Bewertung von Proliferation und Differenzierung von Effektor-T-Zellen. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung Treg-vermittelter Immunregulation bei Autoimmunerkrankungen.

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<table><tbody><tr><td>1.5 mL Zentrifugenrohr</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>3457IW</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>12.5 &mu;L Gefilterte Pipettenspitzen</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420043</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>1250 &mu;L Gefilterte Pipettenspitzen</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420813</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>15 mL Konische Zentrifugenrohre</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339650</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>200 &mu;L Gefilterte Pipettenspitzen</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420318</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>48-Well-Platten</td><td>Corning Incorporated</td><td>3548</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>5 mL Spritzenkolben</td><td>Shifeng Medical</td><td>SB2-061(A)</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>50 mL Konische Zentrifugenrohre</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339652</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>50 &mu;L Gefilterte Pipettenspitzen</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420258</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>70 &mu;m Zellsieb&nbsp;</td><td>Biosharp Life Sciences</td><td>BS-70-CS</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD28 Antikörper</td><td>BioXcell</td><td>BE0015-1</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD3 Antikörper</td><td>BioXcell</td><td>BE0001-1</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>Anti-Maus CD4 PerCP-Cy5.5 (RM4-5)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>45-0042-82</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>Anti-Maus Foxp3 PB (FJK-16s)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>48-5773-82</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>Anti-Maus IFN-gamma PE (XMG1.2)</td><td>BioLegend</td><td>505808</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>Anti-Maus IL-17A PE-Cy7 (eBio17B7)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25-7177-82</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>Beckman CytoFLEX S Durchflusszytometer</td><td>Beckman Coulter</td><td>N/A</td><td>für die Datenerfassung immunologische Proben durch Durchflusszytometrie</td></tr><tr><td>Bovines Serumalbumin (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B2064</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>C57BL/6 Mäuse</td><td>Shanghai Model Organisms Center, Inc</td><td>SM-001</td><td>zur Isolierung primärer Lymphozyten und T-Zell-Subpopulationen</td></tr><tr><td>CD25 Monoklonaler Antikörper (PC61.5), PE</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12-0251-83</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>CD4+CD25+ Regulatorische T-Zell-Isolierungskit, Maus</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-041</td><td>zur Zellsortierung</td></tr><tr><td>CD4+CD62L+ T-Zell-Isolierungskit, Maus</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-106-643</td><td>zur Zellsortierung</td></tr><tr><td>CD45.1 Mäuse</td><td>Shanghai Model Organisms Center, Inc</td><td>NM-KI-210226</td><td>zur Isolierung primärer Lymphozyten und T-Zell-Subpopulationen</td></tr><tr><td>CD45.1 Monoklonaler Antikörper (A20), FITC</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11-0453-85</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>CD45.2 Monoklonaler Antikörper (104), APC-eFluor 780</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>47-0454-82</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>CD62L (L-Selektin) Monoklonaler Antikörper (MEL-14), FITC&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11-0621-85</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>Cytofix/Cytoperm Fixierung/Permeabilisierungs-Lösungs-Kit</td><td>BD Biosciences</td><td>554714</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>eBioscience Zellproliferationsfarbstoff eFluor 450</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>65-0842-90</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA)</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>E1170</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>Fötales bovines Serum</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A5669701</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>FlowJo 10.6.2</td><td>BD Biosciences</td><td>N/A</td><td>Software für die Durchflusszytometrie-Datenanalyse</td></tr><tr><td>Golgi-Plug Proteintransport-Inhibitor</td><td>BD Biosciences</td><td>555029</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630080</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>Humanes TGF-beta1</td><td>PEPROTECH</td><td>100-21C</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>Ionomycin-Calciumsalz</td><td>Millipore Sigma</td><td>I3909</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>LD-Säulen</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-901</td><td>zur Zellsortierung</td></tr><tr><td>L-Glutamin (200 mM)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25030081</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>LS-Säulen</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>zur Zellsortierung</td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td>zur Zellsortierung</td></tr><tr><td>MS-Säulen</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td>zur Zellsortierung</td></tr><tr><td>OctoMACS Separatoren</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-109</td><td>zur Zellsortierung</td></tr><tr><td>PBS, pH 7.4</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010049</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>PE Ratten IgG1, &kappa; Isotyp-Ctrl-Antikörper</td><td>BioLegend</td><td>400408</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>PE/Cyanine7 Ratten IgG2a kappa Isotyp-Kontroll-Antikörper</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25-4321-82</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>PMA</td><td>Millipore Sigma</td><td>P8139</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>Gereinigtes Anti-Maus CD16/32 Antikörper</td><td>BioLegend</td><td>101302</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>QuadroMACS Separator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-976</td><td>zur Zellsortierung</td></tr><tr><td>Rekombinantes Maus-IL-12 p70</td><td>PEPROTECH</td><td>210-12</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>Rekombinantes Maus-IL-6</td><td>R&amp;D Systems</td><td>406-ML</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>Rote Blutkörperchen Lyse-Puffer (ACK Lyse-Puffer)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A1049201</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>RPMI 1640 Medium&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11875093</td><td>oder gleichwertig</td></tr><tr><td>Natriumpy

in vitro funktionelle analyse regulatorischer t-zellen: fokus auf proliferation und differenzierung

In Vitro Functional Analysis of Regulatory T cells: Focus On Proliferation And Differentiation

In dem repräsentativen Experiment wurden naive T-Zellen als Tresp-Zellen verwendet, um die Auswirkungen von Treg-angereicherten Zellen auf die Proliferation und Differenzierung von Th1- und Th17-Zellen zu untersuchen. In diesem Experiment wurden Tresp-Zellen von Anti-Maus-CD3- und APC-angereicherten Nicht-CD4+ -Zellen aktiviert und anschließend unter IL-12 p70-Induktion zu Th1-Zellen oder unter TGF-β1- und IL-6-Induktion zu Th17-Zellen differenziert. Unter diesen beiden Induktionsbedingungen wurden Veränderung...

In vitro Funktionelle Analyse regulatorischer T-Zellen: Fokus auf Proliferation und Differenzierung

Regulatory T (Treg) cells play key roles in maintaining immune homeostasis. Abnormalities in Treg cell function are associated with various diseases, ...

in-vitro-functional-analysis-regulatory-t-cells-focus-on

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Wir beschreiben ein Verfahren zum Erzeugen regulatorische, Speicher und naive T-Zellen aus einem einzelnen menschlichen Blutspender. Polarisierten Tregs können dann auf andere Teilmengen in einer Vielzahl von genetischen und funktionelle Anwendungen mit genetische Homogenität, einschließlich einer Unterdrückung Assay auch hier detailliert verglichen werden.

Generation der induzierte regulatorische T-Zellen aus primären humanen naiven und Gedächtnis-T-Zellen

Generierung von T-Lymphozyten aus induzierten pluripotenten Stammzellen (iPS-Zellen) gibt einen alternativen Ansatz der Verwendung von embryonalen Stammzellen für die T-Zell-basierten Immuntherapie. Verfahren zeigt, dass durch Verwendung von...

Gerichtete Differenzierung von induzierten pluripotenten Stammzellen in Richtung T-Lymphozyten

CD4+ Regulatorische T-Zellen sind potente Immunmodulatoren und erfüllen wichtige Funktionen bei der Immunhomöostase. Der Mangel an diesen Zellen im peripheren Blut macht funktionelle Studien, insbesondere im Zusammenhang mit HIV-1-Infektionen, zu einer Herausforderung. Wir beschreiben hier eine Methode zur Isolierung und Expansion funktioneller CD4+ Tregs aus peripherem Blut von HIV-1-infizierten Personen.

Neue Tools erweitern regulatorischen T-Zellen von HIV-1-infizierten Personen

Adenovirale Gentransfer in naiven CD4-T-Zellen mit transgenen Expression des Coxsackie Adenovirus-Rezeptor ermöglicht die molekulare Analyse von regulatorischen...

Adenovirale Transduktion von Naive CD4 T-Zellen zu Treg Differenzierung Studieren

Naive CD4+ T-Zellen polarisieren in verschiedene Untergruppen, abhängig von der Umgebung zum Zeitpunkt der Aktivierung.  Die Differenzierung naiver CD4+ T-Zellen zu verschiedenen Effektor-Untergruppen kann in vitro durch die Zugabe von T-Zell-Rezeptor-Stimuli und spezifischen Zytokinsignalen erreicht werden.

Maus Naive CD4<sup&gt; +</sup&gt; T-Zell-Isolierung und<em&gt; In-vitro-</em&gt; Differenzierung in T-Zell-Populationen

Hier beschreiben wir ein Protokoll zur Analyse des Phänotyps von regulatorischen T (Treg)-Zellen, die von naiven und chronischen lymphozytären Choriomeningitis-Virus-infizierten Mäusen isoliert wurden. Darüber hinaus stellen wir einen Prozess zur Verfügung, um die suppressive Aktivität derT-reg-Zellen zu bewerten.

Die phänotypische und funktionale Analyse von aktivierten regulatorischen T-Zellen isoliert von chronischer lymphatischer Choriomeningitisvirus-infizierte Mäuse

Dieses Protokoll beschreibt die reproduzierbare Erzeugung und Phänotypisierung von humanen regulatorischen T - Zellen induziert (iTregs) von naiven CD4 + T - Zellen in vitro. Verschiedene Protokolle für FOXP3 Induktions ermöglichen die Untersuchung spezifischer iTreg Phänotypen mit jeweiligen Protokollen erhalten.

In vitro Differenzierung von humanen CD4 + FOXP3 + Induced regulatorischer T - Zellen (iTregs) von Naïve CD4 + T - Zellen unter Verwendung eines TGF-β-enthaltende Protokoll

Hier präsentieren wir ein Protokoll zum induzieren Toleranz in der Transplantationsmedizin und in Vitro und in Vivo zu bewerten, die unterdrückende unterschiedliche Zelle Teilmengen des Empfängers und der Immunstatus des Empfängers in Richtung Spender oder exogene Antigene.

In Vitro und In Vivo Beurteilung der T, B und myeloische Zellen Suppressive Aktivität und humorale Reaktionen von Transplantationspatienten

Dieser Artikel beschreibt eine neuartige Methode zur Erzeugung von Tumorantigen-spezifischen induzierten pluripotenten Stammzellen-abgeleiteten thymischen Auswanderern (iTE) durch ein dreidimensionales (3D) thymische Kultursystem. iTE sind eine homogene Teilmenge von T-Zellen, die eng mit naiven T-Zellen verwandt sind und die Fähigkeit zur Proliferation, Gedächtnisbildung und Tumorunterdrückung haben.

Ein dreidimensionales thymisches Kultursystem zur Generierung von murine induzierten pluripotenten Stammzell-abgeleiteten Tumor-Antigen-spezifischen thymischen Auswanderern

Hier beschreiben wir eine robuste Methode zur Bestimmung der Immunzellidentität und -reinheit durch epigenetische Signaturen, die mit quantitativer PCR (qPCR) nachgewiesen wurden. Die DNA-Deethylierung an einem bestimmten Ort dient als eindeutiger Identifikator für einen bestimmten Zelltyp und ermöglicht die Identifizierung von CD8+-, regulatorischen oder Th17-T-Zellen.

Bestimmung der Immunzellidentität und -reinheit mittels epigenetischer quantitativer PCR

Lernen Sie die modifizierte in vitro Treg-Suppressionsanalyse zur gleichzeitigen Bewertung von Proliferation und Differenzierung von Effektor-T-Zellen. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung Treg-vermittelter Immunregulation bei Autoimmunerkrankungen.

In vitro Funktionelle Analyse regulatorischer T-Zellen: Fokus auf Proliferation und Differenzierung

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