Los microorganismos se definen como formas de vida demasiado pequeñas para verlas a simple vista. Pero aunque normalmente no los vemos, los microbios están en todas partes, haciendo cosas buenas como ayudar a nuestra digestión o hacer yogures y vino, hasta cosas no tan buenas como causar infecciones o enfermedades.
Hablando de infecciones, en 1928, Alexander Fleming regresó a su laboratorio de vacaciones y notó una extraña contaminación de hongos en una de sus placas de cultivo bacteriano. Curiosamente, las colonias bacterianas inmediatamente alrededor de la contaminación habían sido destruidas. Esta observación condujo a muchas más investigaciones, que finalmente culminaron en el desarrollo de la penicilina y otros antibióticos que podrían tratar las infecciones bacterianas. Sin embargo, aunque pueden vivir uno al lado del otro en el mundo microscópico, sabemos por el estudio de sus formas y filogenias que las bacterias y los hongos son organismos muy diferentes y diversos. Repasemos brevemente algunas de las características definitorias de estos dos grupos principales.
Las bacterias son procariotas unicelulares, es decir, son organismos unicelulares sin núcleo. Todas las bacteria
Examinando las estructuras de las colonias microbianas
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Para comenzar, recoja sus placas de cultivo asignadas y luego retire el Parafilm y la tapa de una de ellas.
Coloque la placa descubierta bajo un microscopio de disección y luego observe las comunidades individuales dentro de cada cuadrante de la placa.
A medida que se identifiquen las colonias, rellene las propiedades de las colonias observadas en la columna correspondiente de la tabla. Haga clic aquí para descargar la Tabla 1
Luego, repita las observaciones para cada una de las otras dos especies bacterianas.
Para realizar la tinción de Gram de sus tres especies bacterianas, primero etiquete los extremos de tres portaobjetos de microscopio con las iniciales de cada especie de bacteria, sus iniciales y la fecha. HIPÓTESIS: En este experimento, la hipótesis experimental podría ser que es posible dilucidar diferentes especies y formas bacterianas utilizando la tinción de Gram, y que las bacterias Gram-positivas se teñirán de púrpura con violeta cristalino, mientras que las bacterias Gram-negativas aparecerán de color rosa debido a la contratinción de safranina. La hipótesis nula podría ser que todos los tipos de bacterias retendrán ambas manchas por igual, y la tinción no ayudará a dilucidar su especie o forma.
Para comenzar la primera mancha, coloque un clip en el portaobjetos para facilitar su manejo. Para cada frotis bacteriano, recuerde asegurarse de usar un asa de inoculación limpia y esterilizada con llama.
Coloque dos bucles llenos de agua destilada estéril en el centro del portaobjetos.
Después de esterilizar el bucle de nuevo, enfríe el bucle tocando varias veces una porción no inoculada del agar.
Luego, retira una pequeña cantidad de cultivo de una colonia aislada y mézclala con el agua del tobogán.
Deje que el portaobjetos se seque a temperatura ambiente y fije con calor el frotis pasándolo rápidamente a través de una llama.
Una vez seco, pipetea varias gotas de violeta cristalina en el portaobjetos y déjalo reposar durante dos o tres minutos.
Enjuague cuidadosamente el portaobjetos con agua destilada dirigiendo el flujo directo hacia la parte superior del portaobjetos, permitiendo que el agua fluya suavemente hacia abajo. No apunte el flujo de agua directamente a la mancha.
A continuación, cubre el portaobjetos con yodo de Gram, déjalo reposar de nuevo durante dos minutos y luego enjuaga suavemente con agua destilada.
Decolora el portaobjetos con etanol al 95% hasta que la mancha ya no se lave.
Inmediatamente, enjuague el portaobjetos con agua destilada. Esto limitará la decoloración excesiva.
Luego, añade varias gotas de contratinción de safranina y déjala actuar durante 30 s. Esto teñirá cualquier célula Gram-negativa presente.
Enjuague suavemente el portaobjetos con agua destilada y séquelo con papel absorbente.
Después de teñir los otros dos portaobjetos de la misma manera (pasos 6 – 17), observe cada uno con un microscopio.
Utilice primero un objetivo de baja potencia para hacer ajustes gruesos. Cuando encuentres una sección ideal, pasa a los aumentos más altos.
Después de obtener más imágenes y ajustar el frotis con un objetivo de potencia media, agregue aceite de inmersión directamente al frotis. NOTA: El aceite es necesario para objetivos de alta potencia que proporcionarán las mejores micrografías.
Ahora, use lápices de colores para dibujar las bacterias observadas en los círculos de aumento apropiados y complete las características observadas en la columna apropiada, anotando la forma de la bacteria y si es Gram-positiva, identificada por una tinción púrpura más oscura, o Gram-negativa, identificada con tinción rosa. Haga clic aquí para descargar la Tabla 2
Finalmente, repita la observación, el dibujo y la caracterización para los otros dos portaobjetos bacterianos teñidos.
Examinando Estructuras Fúngicas
Retire la placa de S. cerevisiae de la incubadora y coloque una gota de agua en un portaobjetos de microscopio.
Usando un asa de inoculación esterilizada, unta una película de levadura en la gota de agua y coloca un cubreobjetos sobre el portaobjetos.
Coloque el portaobjetos bajo el microscopio con el aumento más bajo, aumentando el aumento al ajuste de inmersión en aceite para ver las células de levadura individuales.
Observa la forma y estructura general de la levadura e identifica cualquier célula que esté experimentando una reproducción asexual por gemación.
Ahora, dibuja las celdas en los círculos de aumento apropiados.
Cuando haya terminado de observar la levadura, reemplace el portaobjetos de S. cerevisiae por un portaobjetos preparado de Ascomycetes apothecium y ajuste el microscopio al aumento más bajo.
Usando lápices de colores, dibuje las estructuras con aumentos bajos y altos, incluyendo los ascos y las ascosporas.
Finalmente, coloque un champiñón, Agaricus bisporus, bajo el microscopio de disección y dibuje las características, incluyendo el pileus, o sombrero, las branquias y el estípite, o tallo.
Resultados
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Utilizando la coloración de las bacterias registradas en la tabla, determine qué especies son Gram-positivas y cuáles son Gram-negativas.
Luego, observa las formas registradas en la tabla para determinar qué especies bacterianas son bacillus, coccus o spirillum.
Siguiente compara tus ilustraciones de las células de levadura con tus ilustraciones de las células bacterianas. NOTA: Las levaduras del filo Ascomycetes, como S. cerevisiae, pueden reproducirse asexualmente, lo que se puede observar a través de la gemación de las células bajo un microscopio.
Registre cualquier observación de células de levadura brotando. NOTA: Los ascomicetos también pueden reproducirse sexualmente a través de la mitosis y la formación de esporas haploides.
Registre cualquier observación de formación de esporas o ascos que haya observado en la tabla.
NOTA: Los hongos del filo Basidiomycota exhiben branquias claramente observables debajo del pileus.
Registra cualquier especie de hongo que haya mostrado branquias bajo el pileus.
