En este video-artículo se presenta una demostración paso a paso sobre cómo recoger y criopreservar óvulos de hámster con altas tasas de supervivencia después de la descongelación. El mismo procedimiento se puede aplicar para congelar y descongelar con éxito embriones de ratón en las diferentes etapas de desarrollo de preimplantación.
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Artículo de método
Recolección y criopreservación de ovocitos de hámster y de embriones de ratón
En este artículo
Resumen
Resumen
Embriones y ovocitos criopreservados fueron los primeros con éxito más de 30 años, cuando Whittingham
Protocolo
Cuidado de los animales y los procedimientos se realizaron de acuerdo a los lineamientos y reglamentos aprobados por el Comité de Ética en la investigación animal y humana de la Universitat Autònoma de Barcelona, España.
I. recolección de ovocitos
- Comprobar y seleccionar hamsters hembra (Mesocricetus auratus, 8-12 semanas de edad) de la cepa de oro de Siria a la presencia de una secreción espesa vaginal (flujo postovulatoria).
- Inducir a las mujeres seleccionadas para superovular por inyección intraperitoneal de 40 UI de PMSG (gonadotropina sérica de yegua gestante), seguido de 40 UI de hCG (gonadotropina coriónica h....
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Discusión
Con este protocolo de ovocitos de hámster y de embriones de ratón pueden ser criopreservados con éxito. Una vez congelado, los ovocitos / embriones pueden ser almacenados en tanques de nitrógeno líquido por tiempo indefinido y se recuperó en cualquier momento o lugar deseado. Esto ofrece la ventaja de tener muestras de casi listo para su uso cuando sea necesario. Por otro lado, este protocolo también se puede utilizar para generar criobancos embrión a partir de cepas de ratón de gran valor (como las líneas de transgénicos), como una alterna.......
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Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por el Ministerio español de Educación y Ciencia (BIO 2006 hasta 11.792) y la Generalitat de Catalunya (2005-SGR00437). Los autores desean agradecer a Marc Puigcerver y Lucas Jonatan por su asistencia técnica en la preparación de los medios de comunicación. Todo el personal de la Estabulari Servei d'es reconocido por albergar a los animales y, especialmente, Juan José Martín y Javier Benito, por su contribución adicional sobre la grabación de parte de este video. BCN es un miembro de la Fundación un párrafo portugués Ciência e Tecnologia y SG es un compañero de la española Ministerio de Educación y Ciencia.<....
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios | |
|---|---|---|---|---|
| Nombre del material | Tipo | Empresa | Número de catálogo | Comentario |
| Palillos tipo francés mini 0,25 ml | Mini-tub | 13407/0010 | ||
| hCG | Farma-Lepori, España | 749036.4 | ||
| Hialuronidasa | Sigma | H-3884 | ||
| Medio KSOM-H | Ref. [11] | |||
| Nitrógeno líquido | Air Liquide | |||
| Taponcillos de plástico | Mini-tub | 19046 | ||
| PMSG | Intervet, España | 1.614/8447 | ||
| Propilenglicol | Fluka | 82280 | ||
| Sacarosa | Merck | 107687 | ||
| Tijeras quirúrgicas | Aesculap | BC-060R; BG-061R | ||
| Sellador térmico | SIZ | 220 | ||
| Placas de cultivo de 35 y 90 mm | Nunc | 153066; 150350 | ||
| Tubos de 10 ml | Greiner Bio-one | 163160 | ||
| Tanque de nitrógeno | MVE, Cryogenics | XC 43/28 | ||
| Congelador programable | Planner Products Ltd. | Kryo-10 Series III | ||
| Pinzas | Aesculap | BD-331R; BD-053R; OC-020R |
Referencias
- Whittingham, D. G., Leibo, S. P., Mazur, P. Survival of mouse embryos frozen to -196 and -269 °C. Science. 178, 411-414 (1972).
- Wilmut, I. The effect of cooling rate, warming rate, cryoprotective agent and stage of develo....
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Reimpresiones y permisos
