Imágenes en directo de la migración de células gliales en el ojo del disco imaginal de Drosophila

Resumen

A continuación se describe un protocolo para examinar la migración de las células gliales en el desarrollo del ojo de Drosophila mediante el análisis microscópico directo emparejado con GFP etiquetados células gliales.

Resumen

Las células gliales de vertebrados e invertebrados organismos deben emigrar a las regiones de destino final para ensheath y apoyar las neuronas asociadas. Si bien el progreso reciente ha sido hecho para describir la migración en vivo de las células gliales en el ala en desarrollo pupal (1), los estudios de

Protocolo

Parte 1: Pre-montaje experimental.

1. Una semana de antelación, compañero de moscas para generar larvas que expresan GFP bajo el control de un promotor glial-específica. Para nuestro experimento visualizar GFP etiquetados con una secuencia de localización nuclear expresado en las células gliales con la polaridad invertida (repo) promotor (3, 4).
2. Prepare la cubierta se desliza por lo menos un día antes en remojo 18 mm cubreobjetos redondos de 10 minutos en 1% de poli-L-lisina solución y el aire seco durante la noche.
3. El día antes del experimento, una cámara limpia Chamlide cultura magnética en remojo toda la noche los componentes e....

Discusión

En este protocolo se describe la observación de la migración de células gliales en el disco imaginal del ojo mediante microscopía en vivo. En nuestro ejemplo, de tipo salvaje (figura 1 AD), se utilizó un marcador GFP nuclear para observar el movimiento de células gliales en el disco de los ojos en el transcurso de una hora. En un mutante de un gen candidato requerido para la migración de células gliales en la actualidad objeto de estudio en nuestro laboratorio, hemos observado un estancamiento de los núcleos de.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Polilisina-L	Reactivo	Sigma-Aldrich	P8920
Medio para insectos de Schneider’s	Reactivo	Sigma-Aldrich	S0146
Penicilina-estreptomicina	Reactivo	Sigma-Aldrich	P4458
Solución de insulina de páncreas bovino	Reactivo	Sigma-Aldrich	I0516
Cámara magnética Chamlide	Herramienta	Live cell Instrument	CM-R-10	Cámara tipo placa de 35 mm para cubreobjetos de 18 mm
Tijeras ultrafinas para cortar	Herramienta	Fine Science Tools	15200-00
Pinzas Dumont n.º 5	Herramienta	Fine Science Tools	11251-20
Microscopio fluorescente	Microscopio	Carl Zeiss, Inc.		Cualquier sistema de imágenes fluorescentes que tenga los filtros y la excitación necesarios para GFP puede utilizarse.