Envejecimiento cronológico en la levadura se refiere a la pérdida de la viabilidad celular asociado con el tiempo en la fase estacionaria. Aquí se describe un método de alto rendimiento para determinar cuantitativamente la levadura abarcan la vida cronológica.
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Artículo de método
Cuantificar cronológico levadura Duración de la vida por consecuencia de células envejecidas
En este artículo
Resumen
Resumen
La levadura en ciernes
Protocolo
Parte 1: Preparación de los cultivos de envejecimiento
- Cepas racha de interés de las existencias congeladas en placas de agar YEPD (1% extracto de levadura, 2% Bacto-peptona, 2% de agar, 2% de glucosa).
- Se incuban las células a 30 ˚ C durante 48 horas o hasta que las colonias solo aparecen.
- Elige colonias aisladas e inocular en 5 ml de medio líquido YEPD (1% extracto de levadura, 2% Bacto-peptona, 2% de glucosa) en tubos de ensayo.
- Crecer cultivos de una noche a 30 ˚ C, manteniendo agitación constante usando un agitador o un tambor de rodillos.
- Inocular 5 ml de sintético completo (SC) medio (Tabla 1) con 50 l de la c....
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Discusión
El alto rendimiento de la vida cronológica ensayo de duración se describe aquí es un método eficaz para cuantificar el potencial de envejecimiento de un gran número de cepas con alta exactitud y precisión. El principal avance de este método sobre los métodos clásicos para determinar la supervivencia de contar unidades formadoras de colonias (véase, por ejemplo 3) es el uso de un dispositivo de lectura agitador / incubadora / placa como la máquina Bioscreen C MBR para obtener alta resolución de las curvas de c.......
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Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por el NIH subvención 1R21AG031965-01A1. MK es una Ellison Medical Foundation de Nueva Académico en el envejecimiento.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios | |
|---|---|---|---|---|
| Bacto Peptona | Reactivo | BD Biosciences | 211677 | |
| Extracto de Levadura Bacto | Reactivo | BD Biosciences | 288620 | |
| Agar Difco | Reactivo | BD Biosciences | 214530 | |
| Base de Nitrógeno para Levadura sin A.A. ni A.S. | Reactivo | MidSci | J630-500G | |
| Ácidos Aminos | Reactivo | Sigma-Aldrich | ||
| Sulfato de Amonio | Reactivo | Spectrum | AM185 | |
| Dextrosa | Reactivo | Fisher Scientific | D16-10 | |
| Equipo Bioscreen C MBR | Herramienta | Growth Curves USA | 5101370 | |
| Placa Honeycomb de 100 pozos para Bioscreen | Herramienta | Growth Curves USA | 9502550 |
Referencias
- Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. Replicative aging in yeast: the means to the end. Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29(2008).
- Kaeberlein, M. Handbook of models for human aging. Conn, P. M. , Elsevier Press. Boston. 109(2006).
- Fabrizio, P., Longo, V. D.
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Reimpresiones y permisos
