Los autores no tienen nada que revelar.

la disección de los discos imaginales de 3er estadio las larvas de drosophila

Dissection of Imaginal Discs from 3rd Instar Drosophila Larvae

Este protocolo demuestra la técnica de disección utilizado para el aislamiento de los discos imaginales de larvas de Drosophila en la tercera etapa de estadio. Métodos para la fijación de los tejidos después de decir y la eliminación de las alas, piernas, ojos y los discos se muestran directamente en un portaobjetos para su visualización posterior.

La disección de los discos imaginales de 3er estadio las larvas de Drosophila

Hoy les mostraré cómo diseccionar discos imaginales de larvas de Drosophila de tercer estadio larval. Los discos de larvas de tercer estadio se pueden utilizar para diversos procesos de desarrollo. En nuestro laboratorio los analizamos para observar el proceso de apoptosis, pero también se pueden expresar diversas proteínas en ellos y estudiarlos de esa manera, observando todo tipo de procesos de desarrollo que ocurren dentro de los discos.Para ello, voy a utilizar varias herramientas muy importantes. La primera es la varilla de selección con la que extraeremos las larvas de sus placas. A continuación, y muy importante, están las pinzas de disección, que deben ser extremadamente afiladas para que el disección pueda llevarse a cabo.Luego usaremos una hoja de bisturí quirúrgico, hoja número 11, para extraer los discos de la cabeza. A continuación, colocaremos los discos sobre un portaobjetos con algo de Vector Shield como medio de montaje. Así que lo primero que haremos será recolectar algunas larvas de tercer estadio y estrella errante, larvas de tercer estadio y estrella errante.Estoy usando mi palillo para desprenderlos suavemente del lateral del vial. A veces ayuda que el palillo esté un poco húmedo; luego colóquelos en una gota de PBS. Bien, aquí tenemos nuestras larvas de tercer estadio.Dado que soy diestro, voy a girar su cabeza hacia mi derecha y vamos a utilizar algunos puntos de referencia para guiarnos sobre dónde agarrarlo. El primero es la parte principal de la tráquea aquí y aquí. Y luego hay una pequeña sección transversal más arriba hacia la cabeza.Primero, voy a sujetar las larvas aproximadamente a dos tercios del cuerpo desde la cabeza, suavemente. Luego, con la mano derecha voy a agarrar unos pocos milímetros detrás de la pieza transversal aquí, intentando alcanzar aproximadamente la mitad del ancho de las larvas. Ese es un agarre bastante bueno.Pueden ver que estoy más o menos a la mitad. Luego, jalaré suavemente hacia adelante con mi mano derecha; observen cómo salen todos los intestinos. Bien. La parte principal del cuerpo ya puede descartarse.Aquí tenemos la cabeza, que incluye los discos imaginales unidos a las piezas bucales. Así que voy a tomarlo por las piezas bucales para no aplastar ninguno de los discos y lo moveré hacia un punto fresco de PBS. Ahora ya tenemos la cabeza de larva fijada.Vamos a eliminar todo el tejido excedente y, o bien sujetar la larva por las piezas bucales como antes, o presionarla contra la placa de disección con la pinza. Las piezas bucales ahora están a la izquierda. Muy bien, aquí tenemos el intestino, que no queremos, y hay una glándula salival.Hay algo de cuerpo graso o cuerpo adiposo. Siga retirándolo, especialmente la grasa, ya que puede interferir con algunos ensayos y tinciones de elementos que no desea teñir. Así, ahora tenemos la cabeza de larva limpia.Ahora tenemos nuestras cabezas de larva, que han sido diseccionadas separándolas del cuerpo, fijadas y lavadas, eliminado los tejidos sobrantes, y tratadas con lo que sea necesario, lo cual podría ser una tinción con anticuerpo en C dos túnel u otra tinción funcional. Ahora las hemos colocado sobre un portaobjetos y estamos listos para diseccionar los discos reales separándolos de la cabeza, las partes bucales.Vale, esta vez nuestras piezas bucales están a la izquierda aquí. Voy a tomar mis pinzas y presionarlas ligeramente contra el portaobjetos. Con la mano derecha tengo una hoja de bisturí número 11, que es un instrumento un poco más fino, el cual usaré para disecar.Primero voy a retirar el SNC y los lóbulos ópticos. Y se puede ver el SNC, los dos lóbulos ópticos, y aquí están los discos ojo-antena adheridos a ellos. Si retiro el SNC introduciendo la hoja entre los lóbulos ópticos y los discos oculares y tirando lentamente, los discos oculares se estiran un poco.Vale, aquí tenemos el SNC y los lóbulos ópticos. Ahora tenemos los dos discos oculares que se han separado del SNC. Ahora voy a retirarlos de las partes bucales cortando y tirando suavemente de la base.Vale, entonces hay un disco de ojo y antena, y el otro es el disco de ojo y antena. Vale. Y ahora podemos ver el disco alar que sobresale aquí. Voy a localizar nuevamente el corte basal suavemente y tirar.Entonces, aquí tenemos un disco alar y un disco de la pata adherido a él, junto con un pequeño fragmento de tráquea. Bien, entonces aquí está su disco alar con un disco de la pata adherido, y obviamente hay varios discos de la pata. Así que podemos, de alguna manera, buscar aquí y encontrar más discos simplemente explorando suavemente con la hoja.Esos son todos los discos que vamos a encontrar en este caso. Hay un par más de discos de las patas.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

University of California, Irvine (UCI).  Este protocolo demuestra la técnica de disección utilizado para el aislamiento de los discos imaginales de larvas de Drosophila en la tercera etapa de estadio. Métodos para la fijación de los tejidos después de decir y la eliminación de las alas, piernas, ojos y los discos se muestran directamente en un portaobjetos para su visualización posterior.

La disección de los discos imaginales de 3er estadio las larvas de Drosophila

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