Las sinapsis silenciosa presináptico estudiado con microscopía de luz

Resumen

Sinapsis glutamatérgica puede cambiar de un modo activo a un modo silencioso. Se demuestra que el estado de actividad presináptica en la cultura disociada de las neuronas de roedores se visualiza mediante un formulario puede arreglar de la FM1-43 tintes para visualizar las sinapsis activas y inmunotinción con vGluT-1 anticuerpo para visualizar todas las sinapsis de glutamato.

Resumen

Subyace en la plasticidad sináptica probable que la capacidad del sistema nervioso para aprender y recordar y también puede representar una adaptación de otro modo que impide que se convierta en perjudicial insultos neurotóxicos. Hemos estado estudiando una forma de plasticidad presináptica que es interesante, en parte, porque se expresa como una conmutación digital dentro y fuera de la capacidad de un terminal presináptica s para liberar vesículas que contienen el neurotransmisor glutamato. Aquí se demuestra un protocolo para la visualización del estado de la actividad de las terminales presinápticas en cultivos de células disociadas preparado desde el hipocampo de roedores. El método se basa en la detección de las sinapsis activa mediante la tinción con una forma corregible del colorante estirilo FM1-43, comúnmente utilizado para etiquetar las vesículas sinápticas. Este perfil de tinción se compara con la inmunotinción de los mismos terminales con un anticuerpo dirigido contra el transportador de glutamato vesicular 1 (vGluT-1), una mancha diseñado para etiquetar todas las sinapsis de glutamato, independientemente del estado de activación. Nos encontramos con que los estímulos despolarizantes inducir silenciamiento presináptica. La población de sinapsis que no se pronuncia en condiciones basales pueden ser activados por el silenciamiento eléctrico prolongado o por la activación de las vías de señalización del cAMP.

Protocolo

Cultura preparación

1. Preparar cultivos disociados celular de las células del hipocampo de rata o ratón desde el primer día postnatal 0-3 animales ^1. Las neuronas se adhieran a una monocapa de astrocitos subyacentes, que a su vez se adhiere a una capa de colágeno extiende sobre un cubreobjetos número de espesor 0. Placa de las neuronas a una densidad de aproximadamente 500 células por centímetro cuadrado.
2. Permita que las culturas de crecer durante 10-14 días para permitir el desarrollo y la maduración sináptica. El tratamiento de las culturas en el día 4 in vitro con la AraC antimitóticos para detener el crecimiento más gliales. Darles d....

Discusión

Significado

1. Normalmente, las sinapsis se cree que funcionan por la liberación del transmisor con una probabilidad cuantificable. Trabajo por nosotros y los demás se hace evidente que algunas sinapsis son refractarios a la liberación de neurotransmisores, a pesar de una gama completa de transporte vesicular de neurotransmisores y otros indicadores clave presináptica ^{2, 6-8.} Hemos demostrado anteriormente que la actividad de la red básica en las neuronas es fundamental para mantener esta población de.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
FM1-43FX	Invitrogen	F-35355	Está disponible una versión desplazada hacia el rojo de FM4-64FX, pero no se ha mostrado tan adecuada para ensayos de silenciamiento presináptico.
Advasep-7	CyDex	AR-0A7-001
vGluT-1	EMD Millipore	AB5905
anti-GP conjugado con Alexa 647	Invitrogen	A-21450
Fluoromount-G	SouthernBiotech	0100-01