Esta técnica permite el uso de ángulo mágico de alta resolución girar espectroscopia de resonancia magnética (HRMAS 1H-MRS) para la caracterización molecular de vivir Drosophila melanogaster Con un espectrómetro convencional de 14,1 teslas equipado con una sonda HRMAS.
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Artículo de método
Espectroscopia de Resonancia Magnética de vivir Drosophila melanogaster Utilizando Spinning Magic ángulo
En este artículo
Resumen
Resumen
De alta resolución Magic Angle Spinning (HRMAS) espectroscopia de resonancia magnética de protones (
Protocolo
Parte 1: Preparación para las mediciones de Drosophila HRMAS
- Utilizando procedimientos estándar flylab 1, recoger nuevas eclosing vuela por 3 días y la transferencia a volar viales que contienen los alimentos frescos volar. Incubar las moscas recogidas por 5 días para que las moscas se convertirán en 5-8 días de edad, justo antes del experimento. Un solo sexo (por lo general hombres) se utiliza para los experimentos.
- Uso saludable, de tipo salvaje intacta vuela a comparar con el tratado, por ejemplo, traumatizados o alterados genéticamente moscas 1.
- Lugar vuela solo en tubos de 2 ml que contiene un trozo (....
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Discusión
Con la excepción del reciente informe de la viabilidad de la resonancia magnética in vivo en moscas de la fruta 6, los estudios in vivo MRS en Drosophila aún no han sido reportados. En el presente Protocolo, se describe la implementación de una novela en vivo HRMAS 1 H-MRS enfoque para la detección de moléculas biológicamente importantes. En concreto, se detectaron metabolitos de los lípidos y los pequeños viven en moscas Drosophila en el 14,1 T.......
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Divulgaciones
Los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con las directrices y regulaciones establecidas por el Massachusetts General Hospital de Investigación Institucional Animal Comité de Revisión de la Junta.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado en parte por los Institutos Nacionales de Salud (NIH) otorgar AI063433 a Laurence G. Rahme, de los Institutos Nacional de Salud (NIH) Centro de Donación (P50GM021700) a Ronald G. Tompkins (A. Aria Tzika, Director de el núcleo de RMN), y el Hospital Shriner una beca de investigación para la Infancia (# 8893) para A. Aria Tzika. Damos las gracias a Dionyssios Mintzopoulos Ph.D. de asistencia en las fases iniciales del desarrollo de este protocolo y Ovidiu C. Andronesi Ph.D. para obtener ayuda con la secuencia de pulsos TOBSY.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios | |
|---|---|---|---|---|
| óxido de deuterio | Reactivo | Sigma-Aldrich | 7789-20-0 | |
| 3-(trimetilsilil)propiónico-2,2,3,3-d4 ácido | Reactivo | Sigma-Aldrich | 24493-21-8 | |
| agar, sacarosa, levadura, harina de maíz | Alimento | Genesee Scientific | http://www.flystuff.com/ | |
| Moscas Oregon RS o Canton-S | Líneas de moscas adultas | Centro de Abarrotes Bloomington | http://flystocks.bio.indiana.edu/ | |
| Pincel | Equipamiento | (tamaño 0) | ||
| tubos de 2 ml | Equipamiento | Fisher Scientific | K749521-1590 | |
| Incubadoras para moscas | Equipo | alta capacidad de humedad (60-75%), temperatura ajustable y ciclo de luz:oscuridad de 12 h:12 h. | ||
| Espectrómetro de RMN Bruker Bio-Spin Avance (600,13 MHz) con sonda de 4 mm de triple resonancia (1H, 13C, 2H) Sonda HRMAS | Equipamiento | Bruker Corporation | ||
| Unidad BTO-2000 en combinación con una unidad neumática MAS | Equipamiento | Bruker Corporation | ||
| rotor de óxido de circonio de 4 mm (capacidad de 50 μl) | Equipamiento | Bruker Corporation | B3829 (almacén de Bruker) | |
| MestReC (Mestrelab Research) | Software | Análisis de espectros de RMN 1D http://mestrelab.com/ | ||
| SPARKY 3, USCF | Software | Análisis de espectros de RMN en 2D http://www.cgl.ucsf.edu/home/sparky/ |
Referencias
- Apidianakis, Y., Rahme, L. G. Drosophila melanogaster as a model host for studying Pseudomonas aeruginosa infection. Nat Protoc. 4, 1285-1294 (2009).
- Meiboom, S., Gill, D. Modified spin-echo method for measuring nuclear relaxation time. Rev Sci Instrum. <....
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Reimpresiones y permisos
