Primaria células epiteliales bronquiales Cultivada a partir de explantes

Resumen

A continuación se describe un método detallado para el cultivo de primaria células epiteliales bronquiales humanas a partir de explantes de tejido humano vías respiratorias bronquiales incluyendo el crecimiento diferenciado en una interfase aire-líquido. Este método proporciona una fuente abundante de células primarias para investigar el papel del epitelio de las vías respiratorias en la salud pulmonar y la enfermedad humanas.

Resumen

Células epiteliales bronquiales humanas son necesarios para los modelos de celulares de la enfermedad y para investigar el efecto de los excipientes y agentes farmacológicos sobre la función y estructura de las células epiteliales humanas. A continuación se describe en detalle el método de cultivo de células del epitelio bronquial de las vías aéreas bronquiales tejido que es recogido por el cirujano en el momento de la cirugía pulmonar (por ejemplo, el cáncer de pulmón o una cirugía de reducción de volumen pulmonar). Con la aprobación de la ética y el consentimiento informado, el cirujano obtiene lo que se necesita para la patología y nos proporciona una parte bronquial que está alejado de las áreas afectadas. El tejido se utiliza como fuente de explantes que se pueden utilizar para el cultivo de células epiteliales bronquiales primarias en la cultura. Segmentos bronquial 0,5-1cm de longitud y 1 cm de diámetro ≤ se enjuagan con EBSS frío y tejidos del parénquima se elimina el exceso. Los segmentos son a cielo abierto y picado en 2-3mm

Protocolo

Humanos segmentos bronquial proporcionar una fuente abundante de células epiteliales bronquiales primarias. En este artículo se describe un protocolo para el crecimiento y la expansión del epitelio bronquial humano (HBe) de las células recién aisladas de los segmentos bronquiales humanos. Este protocolo consta de cinco secciones:

1. Revestimiento y rascarse las placas de 100 mm Cultura
2. Preparación de explantes de tejido bronquial
3. Los trasplantes de tejido bronquial
4. Paso de las células HBE
5. Crecimiento de las células ciliadas en HBE transwells

Antes de empezar Tenga en....

Discusión

En este estudio se presentan métodos detallados para la cultura y la expansión de la enseñanza primaria humanos células epiteliales bronquiales. Hemos demostrado cómo los explantes y el trasplante de tejido bronquial, cultivadas en los medios de comunicación que promueven el crecimiento de las células epiteliales, pueden proporcionar una fuente continua de las células epiteliales de las vías respiratorias humanas para los estudios de la no-diferenciados modelos celulares (sumergido) y diferenciado (cultivados en la inte.......

Materiales

Otros requisitos: incubadora, del gabinete de seguridad biológica (BSC), centrífuga, las placas de 100 mm de la cultura, tubos estériles (15 ml, 50 ml y 2 ml), puntas de pipeta, bisturí y hojas, pequeñas tijeras afiladas, batas y guantes. Estas se pueden obtener de sus proveedores preferidos.