Este protocolo de vídeo ilustra el aislamiento y cultivo de las células endoteliales de vena umbilical (HUVEC) de cordón umbilical humano. Una vez aisladas estas células se pueden utilizar en los ensayos de la angiogénesis in vitro, como el gel de fibrina Optimizado ensayo de bolas también se demuestra por el laboratorio de Hughes.
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Artículo de método
El aislamiento de las células endoteliales de vena umbilical (HUVEC)
En este artículo
Resumen
Resumen
La angiogénesis es un complejo proceso de múltiples pasos, donde en respuesta a estímulos angiogénicos, nuevos vasos son creados a partir de los vasos existentes. Estas medidas incluyen: la degradación de la membrana basal, proliferación y migración (brotes) de las células endoteliales (CE) en la matriz extracelular, la alineación de la CE en los cables, la formación del lumen, anastomosis y la formación de una nueva membrana basal. Muchos de los ensayos in vitro se han desarrollado para estudiar este proceso, pero la mayoría sólo imitar ciertas etapas de la angiogénesis, y morfológicamente los vasos a menudo no se parecen a los barcos en vivo. Aquí se demuestra una optimización en el ensayo de angiogénesis in vitro que utiliza la vena umbilical humana CE y los fibroblastos. Este modelo recapitula todas las etapas clave al comienzo de la angiogénesis, y sobre los vasos pantalla lúmenes patente intercelular rodeado de polarización CE. Los buques pueden ser fácilmente observados por contraste de fases y microscopía lapso de tiempo, y se recuperó en forma pura para aplicaciones posteriores.
Protocolo
Procedimiento
- Coloque el cable en la almohadilla limpia y aplique de exceso de sangre. Haga cortes frescos en ambos extremos del cable.
- Introduzca 21 1 / 2 G aguja con el capuchón de la aguja de plástico, en la vena. (La vena es la apertura más grande, los 2 más pequeñas son las arterias)
- Abrazadera de la aguja en su lugar con una pinza hemostática y acoplar la jeringa de 20 cc de Hanks a la aguja.
- Empuje el Hanks a través de la vena con una presión moderada. Recoger los residuos en el vaso con cloro. (Sosteniendo la aguja y la cuerda con una mano mientras empuja sería evitar q....
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Colagenasa al 0,1 % | 10 mL por cordón, calentado a 37 °C | ||
| Frascos para cultivo de tejidos | T75, uno por cordón. | ||
| Medio Hanks | |||
| Tijeras | estériles | ||
| Vaso de precipitados | estéril | ||
| Tubos de 50 mL |
Reimpresiones y permisos
