Preparación de oligómeros β-amiloide 1-42 Y la inducción del deterioro de plasticidad sináptica en rodajas de hipocampo

Resumen

Una de las características de la enfermedad de Alzheimer es la elevación de Aß _1-42 Péptido. Aquí les ofrecemos un protocolo para la preparación de Aß sintético _1-42 Oligómeros, lo cual afecta el hipocampo potenciación a largo plazo, un celular correlato de la memoria. Este procedimiento es útil para la investigación de los mecanismos de Aß inducida por detección de patología y de drogas.

Resumen

Deterioro de las conexiones sinápticas es probable que subyacen a los cambios sutiles que ocurren amnésico en las primeras etapas de la enfermedad de Alzheimer s (AD). β-amiloide (Aß), un péptido producido en grandes cantidades en el año, se sabe que reduce potenciación a largo plazo (LTP), un celular correlato de aprendizaje y la memoria. De hecho, el deterioro causado por Aß LTP es un paradigma útil experimental para el estudio de las disfunciones sináptica en modelos de AD y de detección de drogas capaces de mitigar o revertir tales alteraciones sinápticas. Los estudios han demostrado que Aß produce la interrupción de LTP preferentemente a través de su forma oligomérica. Aquí les ofrecemos un protocolo detallado para la LTP impedir en la perfusión de oligomerized sintéticos Aβ1-42 péptido en agudas rodajas de hipocampo. En este video, se describe un procedimiento paso a paso para la preparación de Aß oligoméricos

Protocolo

Resuspensión de β-amiloide

Antes de empezar se han preparado:

• Aß _1-42 (polvo liofilizado)
• 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol (HFIP)
• Baja unión a tubos de polipropileno de microcentrífuga (1,5 ml)
• Herméticas Hamilton jeringa con parada caída de teflón (250 l)
• Dimetilsulfóxido (DMSO)

1. Permitir Aß _1-42 liofilizado para equilibrar a temperatura ambiente durante 30 minutos para evitar la condensación al abrir el vial de péptidos.
2. Bajo la campana extractora de humos, una nueva suspensión Aß _1-42 péptido en HFIP fría para obtener una so....

Discusión

Como se describió anteriormente, existen varios problemas en la preparación de Aß oligoméricas pueden dar lugar a LTP intacta. Una forma de evaluar si la degradación de Aß o la falta de oligomerización Aß pudo haber ocurrido es evaluar la preparación de Aß con TRIS-Tricina PÁGINA / análisis de Western Blot y ultracentrifugación analítica (no se describe en este protocolo). Cuando Western Blotting muestras se preparan en condiciones non-denaturing/non-reducing, una preparación exitosa debe generar una firma Western Blot .......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Aβ 1-42 (liofilizado)	American Peptide	62-0-80
1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-Propanol (HFIP)	Fluka	52517
Dimetilsulfóxido (DMSO)	Biotium, Inc.	90082
Tubos cónicos de polipropileno de 50 mL	Corning	05-538-67
Microtubos MaxyClear de 1,5 ml, recuperación máxima	Axygen Scientific	MCT-150-L-C
Solución salina tamponada con fosfato, pH 7,4	Invitrogen	10010-023
Jeringas GASTIGHT de 250 μL	Hamilton Co	1725
Sonicador de baño	Branson	3510
Sistema concentrador Savant SpeedVac	Varios	SC 110A