Ensayo experimental de metástasis

Summary

En este artículo se describen los procedimientos de ensayo de metástasis experimental que se utiliza para determinar el potencial metastásico de líneas celulares de cáncer humano.

Abstract

La metástasis es la causa principal de muerte en pacientes con cáncer. Para entender el mecanismo de la metástasis, un ensayo de metástasis experimental se estableció el uso de ratones inmunodeficientes. Este artículo delinea los procedimientos involucrados en este ensayo, incluyendo la preparación de muestras, la inyección intravenosa, y el cultivo de células de metástasis pulmonares. En pocas palabras, un número determinado de células de cáncer humano se prepararon

Protocol

1. Preparación de la muestra

1. Se cultivan las células confluentes a ~ 70% en sus medios de comunicación específicos con factores de crecimiento o FBS (por ejemplo, DMEM con FBS al 10% de MC-1 en las células). Aspirar los medios de comunicación de la placa y lavar suavemente varias veces con 1 x PBS (8 g / l de NaCl, 0,2 g / L de KCl, 1,15 g / L de Na ₂ HPO ₄ .7 H ₂ O, 0,2 g / L de KH ₂ PO _4, pH 7,3).
2. Aspirar PBS y añadir 2 ml de tripsina 0,05% en versene (0,014 g / L de rojo de fenol y 0,2 g / l de EDTA-Na en 1 x PBS, pH 7,2). Agite suavemente la placa para facilitar el desprendimiento de célu....

Discussion

La metástasis es la causa principal de muerte en pacientes con cáncer. Se trata de cuatro pasos principales: el desprendimiento de las células cancerosas de sus lugares principales, su entrada en circulación (intravasation), su salida de la circulación (extravasación), y la supervivencia y el crecimiento en un órgano distante. Metástasis en humanos se considera un proceso lento y muchas veces se manifiesta después de varios años de latencia. Para el estudio de su progresión en el momento oportuno, el ensayo anterior exp.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
DMEM	Invitrogen	10313-021
FBS	Hyclone	SH30088.03
HBSS	Invitrogen	14175-095
NaCl	Sigma-Aldrich	S9888
KCl	Mallinckrodt Baker Inc.	6838-04
Na2 HPO4.7H2O	Mallinckrodt Baker Inc.	7896-04
KH2PO4	Mallinckrodt Baker Inc.	7100-12
Rojo fenol	Sigma-Aldrich	P3532
EDTA-Na	EMD Millipore	4010
Azul de tripán	Invitrogen	15250-061
Tripsina 2.5%	Invitrogen	15090-046
Etanol	Ultrapuro	200-CSGP
50 ml Falcon Tube	VWR international	89039-656
Tubos de microcentrífuga	Axygen Scientific	MCT-175-C
Falcon 70μ m Filtro	de células BD Biosciences	352350
5ml Tubo de cultivo Falcon	VWR international	60818-576
Hemacitómetro	Hausser Scientific	15170-208
Jeringa de 1 ml	BD Biosciences	329650
30 ½ aguja de calibre	BD Biosciences	305106
Protector de ratón	Plas Labs Inc.	551-BSRR
Tijeras quirúrgicas	Fisher Scientific	08-940
Pinzas	Fisher Scientific	08-902
Microscopio de disección	Nikon Instruments	SMZ1500
centrífuga de sobremesa	Thermo Fisher Scientific, Inc.