En este artículo se describen los procedimientos de ensayo de metástasis experimental que se utiliza para determinar el potencial metastásico de líneas celulares de cáncer humano.
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Artículo de método
Ensayo experimental de metástasis
En este artículo
Resumen
Resumen
La metástasis es la causa principal de muerte en pacientes con cáncer. Para entender el mecanismo de la metástasis, un ensayo de metástasis experimental se estableció el uso de ratones inmunodeficientes. Este artículo delinea los procedimientos involucrados en este ensayo, incluyendo la preparación de muestras, la inyección intravenosa, y el cultivo de células de metástasis pulmonares. En pocas palabras, un número determinado de células de cáncer humano se prepararon
Protocolo
1. Preparación de la muestra
- Se cultivan las células confluentes a ~ 70% en sus medios de comunicación específicos con factores de crecimiento o FBS (por ejemplo, DMEM con FBS al 10% de MC-1 en las células). Aspirar los medios de comunicación de la placa y lavar suavemente varias veces con 1 x PBS (8 g / l de NaCl, 0,2 g / L de KCl, 1,15 g / L de Na 2 HPO 4 .7 H 2 O, 0,2 g / L de KH 2 PO 4, pH 7,3).
- Aspirar PBS y añadir 2 ml de tripsina 0,05% en versene (0,014 g / L de rojo de fenol y 0,2 g / l de EDTA-Na en 1 x PBS, pH 7,2). Agite suavemente la placa para facilitar el desprendimiento de célu....
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Discusión
La metástasis es la causa principal de muerte en pacientes con cáncer. Se trata de cuatro pasos principales: el desprendimiento de las células cancerosas de sus lugares principales, su entrada en circulación (intravasation), su salida de la circulación (extravasación), y la supervivencia y el crecimiento en un órgano distante. Metástasis en humanos se considera un proceso lento y muchas veces se manifiesta después de varios años de latencia. Para el estudio de su progresión en el momento oportuno, el ensayo anterior exp.......
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Agradecimientos
Este protocolo fue inicialmente probado y optimizado en el laboratorio del Dr. Richard Hynes (MIT). El financiamiento es provisto por el premio IDEA NYSTEM (a LX) y Ruth L. Kirschstein Premio Nacional de Servicio de Investigación (para LX).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | 10313-021 | |
| SFB | Hyclone | SH30088.03 | |
| HBSS | Invitrogen | 14175-095 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | S9888 | |
| KCl | Mallinckrodt Baker Inc. | 6838-04 | |
| Na2 HPO4.7H2O | Mallinckrodt Baker Inc. | 7896-04 | |
| KH2PO4 | Mallinckrodt Baker Inc. | 7100-12 | |
| Rojo fenol | Sigma-Aldrich | P3532 | |
| EDTA-Na | EMD Millipore | 4010 | |
| Azul de tripano | Invitrogen | 15250-061 | |
| Tripsina al 2,5 % | Invitrogen | 15090-046 | |
| Ethanol | Ultrapuro | 200-CSGP | |
| Tubo Falcon de 50 ml | VWR international | 89039-656 | |
| Tubos microcéntrifugos | Axygen Scientific | MCT-175-C | |
| Filtro celular Falcon de 70μm | BD Biosciences | 352350 | |
| Tubo de cultivo Falcon de 5 ml | VWR international | 60818-576 | |
| Hemocitómetro | Hausser Scientific | 15170-208 | |
| Jeringa de 1 ml | BD Biosciences | 329650 | |
| Aguja de calibre 30 ½ | BD Biosciences | 305106 | |
| Restricción para ratón | Plas Labs Inc. | 551-BSRR | |
| Tijeras quirúrgicas | Fisher Scientific | 08-940 | |
| Pinzas | Fisher Scientific | 08-902 | |
| Microscopio de disección | Nikon Instruments | SMZ1500 | |
| Centrífuga de banco | Thermo Fisher Scientific, Inc. | 75003491 |
Referencias
- Xu, L. Gene expression changes in an animal melanoma model correlate with aggressiveness of human melanoma metastases. Mol Cancer Res. 6 (5), 760-760 (2008).
- Clark, E. A., Golub, T. R., Lander, E. S., Hynes, R. O. Genomic analysis of metastasis r....
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Reimpresiones y permisos
