Drosophila Aggression Assay: En metode til at teste adfærdsmæssige plasticitet i fluer

Overview

Aggression er en medfødt adfærd, og tidligere kamperfaring påvirker kampstrategi og resultatet af senere konkurrencer i fluer. Denne video beskriver en analyse, der bruges til at studere Drosophila's aggressive adfærd. Eksempelprotokollen indeholder den analyse, der udføres i et setup, der eliminerer flyvehåndtering og derfor reducerer stress for dyrene, hvilket ellers ville påvirke forsøgspersonernes ydeevne.

Protocol

Denne protokol er et uddrag fra Trannoy et al., En ny tilgang, der eliminerer håndtering for at studere aggression og "Loser" -effekten i Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp. (2015).

1. Adfærdseksperiment

1. Udfør adfærdseksperimenter med 6-7 dage gamle mandlige fluer.
2. Sæt plastdelere ind i hvert kampkammer.
3. Tag bomuldsproppen ud af isolationsrøret, og placer røret under et åbent hul på siden af apparatet.
4. Lad fluen komme ind i kampkammeret ved negativ geotaxis, normalt inden for få sekunder.
5. Luk skydevæggen, når fluen har forladt røret og kom ind i kammeret.
6. Gentag proceduren for at introducere den anden flue ind i kampkammeret på den anden side af apparatet.
7. Sæt apparatet tilbage i den oplyste videooptagelsesposition.
8. Begynd videooptagelse og fjern plastdeleren for at tillade fluer at interagere.
   1. For aggressionseksperimenter:
      1. I disse eksperimenter kæmper rekordkampe i mindst 20 minutter for at sikre dannelsen af stærke dominansrelationer.
      2. Efter den ønskede tid skal du stoppe videooptagelsen.
      3. Fjern fluer fra kampkamrene ved at vende den ovenfor beskrevne procedure.
      4. Vask adfærdsapparatet grundigt med mildt vaskemiddel og vand efter hver brug og skyl.
   2. For "Loser" Effekt Eksperimenter:
      BEMÆRK: I disse eksperimenter betragtes de første kampe som konditioneringsfasen og anden kampe som testfasen. Hvileperioden mellem kampe kan variere, men 10 min tillader dannelse af en stærk "taber" effekt.
      1. Følg den procedure, der er beskrevet ovenfor for at udføre en første kamp.
      2. KRITISK TRIN: For at fremkalde dannelsen af en "taber" mentalitet, sikre, at de første kampe er mindst 20 min lang for at etablere stærke dominans relationer. Efter 20 minutter skal plastdeleren sættes i kampkamre for at adskille fluerne.
      3. Efter en 10 minutters hvileperiode skal du forsigtigt fjerne plastdeleren for at tillade fluer at interagere i anden kampe.
      4. I slutningen af den anden 20 minutters kamp skal du stoppe videooptagelsen.
      5. Fjern fluer fra adfærdsmæssige kamre som ovenfor.
      6. Endnu en gang skal du rengøre adfærdsapparatet grundigt.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Behavioral chambers	Mike machine		Fabricated in-house. Directly contact the company for more information.
Borosilicate glass vials	VWR International	47729-576	16 x 10 mm
Cotton	Fisherbrand	22-456-881	Any brand can be used
Srew cap tube	VWR International	10011-394	15 mm diameter, 10 mm height
Plastic slices	Electron Microscopy Sciences	70329-40	22 x 40 x 0.25 mm Thickness
Light source (bulb)	VWR International	500003-418	Any brand can be used
Timer	VWR International	62344-641	Any brand can be used
Binocular	Nikon	SMZ-745	Any brand can be used
Camera (SONY Handycam HDR-CX330)	B&H	SOHDRCX330B	Any brand can be used