Disociación mecánica: un método para obtener células viables a partir de un tejido

Resumen

Fuente: Garaud et. al., Un protocolo simple y rápido para disociar de forma no enzimática tejidos humanos frescos para el análisis de linfocitos infiltrantes. J. Vis. Exp. (2014).

Este video describe la disociación no enzimática de tejido humano fresco para obtener células viables. La técnica se utiliza para el análisis cualitativo y cuantitativo de células CD45 positivas (linfocitos/leucocitos) presentes en diversos tejidos humanos normales y malignos.

Protocolo

1. Preparación del homogeneizado de tejidos

1. Los tejidos resecados por disección (tejido maligno y normal resecado desde el quirófano) se encuentran en el laboratorio de patología por personal capacitado para su recogida inmediata. Los fragmentos tumorales, NANT (tomados a la mayor distancia posible del tumor) y tejido normal se procesan de forma rutinaria dentro de 1 a 3 horas después de la escisión quirúrgica en un laboratorio BSL2 utilizando procedimientos de bioseguridad estándar para tejidos humanos. En la Figura 1 se ilustra un diagrama de flujo del protocolo.
2. Pesar todos los fragmentos de tejido (normal, NANT y tumoral) y m....

Resultados

Figura 1: Diagrama de flujo del protocolo.Se muestra nuestro procedimiento para el procesamiento de tejidos humanos frescos y algunos enfoques analíticos que se pueden utilizar posteriormente para evaluar los linfocitos que infiltran tejidos humanos.

Figura 2: Imagen teñida con H&E de una impresión.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Disociador de GentleMacs	Miltenyi Biotec	130-093-235	BD Medimachine es algo equivalente
centrífuga 5810 R	Eppendorf		u otra centrífuga de mesa estándar
centrífuga 5417 R	Eppendorf		u otra microcentrífuga estándar
Gabinete de bioseguridad Esco Clase II A2	ESCO global		u otra campana BSL2 estándar
Microscopio invertido	Nikon eclipse TS100		u otro microscopio compatible con un hematocitómetro
Cámara Bürker Marienfield		640210	u otro hematitómetro estándar
Citómetro de flujo Navios	Beckman Coulter		u otro citómetro de flujo (se recomiendan 8-10 colores)
Tubo C GentleMacs	Miltenyi Biotec	130-096-344	BD Medimachine utiliza Filcon
Placa de cultivo celular	Sarstedt	72.710	u otros artículos de plástico no pirogénicos
Bisturí desechable	Swann-Morton	510	o bisturí estéril estándar de un solo uso
Filtro de células BD 40 μm	Becton Dickinson	734-0002	u otros artículos de plástico no pirogénicos
BD Tubo Halcón 50 ml	Becton Dickinson	352070	u otros artículos de plástico no pirogénicos
BD Tubo Halcón 15 ml	Becton Dickinson	352097	u otros artículos de plástico no pirogénicos
BD FACS Tubo 5 ml	Becton Dickinson	352008	u otros artículos de plástico no pirogénicos
Pipeta Pasteur Estéril 5 ml	VWR	612-1685	u otros artículos de plástico no pirogénicos
Tubo de Microfuga 1,5 ml	Eppendorf	7805-00	u otros artículos de plástico no pirogénicos
X-Vivo 20	Lonza	BE04-448Q	Se recomienda un medio sin suero
Solución salina tamponada con fosfato	Lonza	BE17-516F	PBS fisiológico estándar
Azul de tripano	VWR	17942E	u otra mancha vital