Pseudofracture, un modelo reproducible murino de trauma musculoesquelético estéril, permite la evaluación de finales de término post-traumático respuestas inmunes. En este artículo se describe el procedimiento de ejecución de la etapa de modelo a paso, incluyendo el potencial de las combinaciones de modelos experimentales para permitir el estudio de un politraumatismo.
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Artículo de método
Pseudofracture: Un Modelo periférica aguda trauma tisular
En este artículo
Resumen
Resumen
Después de un trauma es una de las primeras hiper-reactiva respuesta inflamatoria que puede conducir a la disfunción de múltiples órganos y la alta mortalidad en pacientes con traumatismos, esta respuesta es a menudo acompañado por una inmunosupresión retraso que se suma a las complicaciones clínicas de la infección y también puede aumentar la mortalidad 1-9. Muchos estudios han comenzado a evaluar los cambios en la reactividad del sistema inmune después de un trauma. 10-15
Estudios inmunológicos son un gran apoyo a través de la amplia variedad de transgénicos y ratones knock-out disponible en modelos in vivo;. Cepas de estas ayudas en la investigación detallada para evaluar las vías moleculares implicadas en la respuesta inmunológica 16-21
El desafío en el modelado de experimentación murino trauma es la investigación a largo plazo, como las técnicas de fijación de la fractura en ratones, puede ser compleja y no fácilmente reproducible. 22-30
Este modelo pseudofracture, un modelo de trauma fácilmente reproducible, supera estas dificultades inmunológicamente simulando un ambiente de fractura de las extremidades, al tiempo que permite la libre circulación en los animales y la supervivencia a largo plazo sin el uso continuo y prolongado de la anestesia. La intención es recrear las características de la fractura de huesos largos; músculo lesionado y el tejido blando están expuestos a los huesos y la médula ósea dañada sin romper el hueso de origen.
El modelo pseudofracture consta de dos partes: una lesión muscular aplastamiento bilateral de las extremidades posteriores, seguida de la inyección de una solución de hueso en los músculos lesionados. La solución de los huesos es preparado por la recolección de los huesos largos de ambos miembros posteriores de su edad y peso con ajuste donantes singénicos. Estos huesos son triturados y luego volvieron a suspender en tampón fosfato salino para crear la solución de los huesos.
Fractura de fémur bilateral es un modelo de uso común y bien establecida de trauma extremo, y fue el modelo comparativo durante el desarrollo del modelo pseudofracture. Entre la variedad de modelos de fractura disponibles, se optó por utilizar un método cerrado de fracturas con lesiones de tejidos blandos como la comparación con el pseudofracture, ya que queríamos un estéril pero grave proporcionalmente modelo de trauma de los tejidos periféricos. 31
El shock hemorrágico es un hallazgo común en el marco de un trauma severo, y la hipoperfusión global agrega un elemento muy relevante para un modelo de trauma. 32-36 El modelo pseudofracture se puede combinar fácilmente con un modelo de shock hemorrágico por un modelo de trauma múltiple de alta severidad 37.
Protocolo
1. Instrumentos y la preparación del campo quirúrgico:
Todos los procedimientos experimentales se llevan a cabo utilizando técnicas asépticas. Antes de comenzar, el área experimental debe ser limpiado y esterilizado. La mesa de trabajo deben ser desinfectados, deja secar al aire y luego limpiar con alcohol al 70%. Coloque una almohadilla quirúrgica azul y campo estéril vendaje en el área de trabajo experimental.
Todos los materiales e instrumentos esterilizados en autoclave antes de su uso. Las jeringas y agujas estériles que se reciban. El investigador debe estar adecuadamente vestidos con bata, mascarilla quir....
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Discusión
Pseudofracture, un modelo reproducible murino de trauma musculoesquelético estéril, permite la evaluación de post-traumático respuestas inmunes. El modelo pseudofracture inmunológicamente simulando un entorno de fractura de la extremidad a través de la recreación de las características de una fractura de hueso largo: músculo lesionado y el tejido blando están expuestos a los huesos y la médula ósea dañada sin romper el hueso nativo 38,39 una respuesta inmunitaria bifásica se puede ver a continuación. trauma p.......
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Divulgaciones
Los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con las directrices y normas establecidas por el Cuidado de Animales institucional y el empleo y la conducta de Investigación y Cumplimiento de la Universidad de Pittsburgh, una institución AALAS / AAALAC acreditados. Las fuentes animales incluyen Jackson Laboratories y Laboratorios Charles Rivers. Todos los animales se someten garantía de salud amplia a través de cada proveedor, así como la Universidad de Pittsburgh programas internos de vigilancia de la salud de los animales. Esta investigación se lleva a cabo de acuerdo con los directores de gobierno de los EE.UU. para el uso de animales vertebrados. El programa está registrado con el USDA, y tiene una carta de garantía con la Oficina de Servicios de Salud Pública de Protección de los Animales de Laboratorio.
Agradecimientos
Fuente de Financiamiento / Número de Biología Molecular del shock hemorrágico GM053789
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Almohadilla quirúrgica azul | Fisher Scientific | 50-7105 | |
| Vendajes para campo estéril | Fisher Scientific | NC9517505 | |
| Placa calefactora con circulación 18"x26" | Harvard Apparatus | py872-5272 | |
| Esterilizador de instrumentos por calor seco | VWR international | 11156-002 | |
| Bandeja de acero inoxidable 8" x 11" | VWR international | 62687-049 | |
| Placas de plexiglás (10x15x0,5 cm) | Taller de máquinas de la Universidad de Pittsburgh | ||
| Rollo de cinta 1" | Corporate Express | MMM26001 | |
| tubo cónico de 50 cc | Cualquier proveedor | ||
| Frascos de boca ancha con lados rectos (utilizados como tapa para el cono nasal) | VWR International | 159000-058 | |
| Alicates Oster A5 con cuchilla tamaño 40 | VWR international | 10749-020 | |
| Tijeras quirúrgicas (rectas) – 12 cm | Fine Science Tools | 14068-12 | |
| Hemostatos curvos -18 cm | Harvard Apparatus | 81331718 | |
| Pinzas (punta de 0,8 mm, curvas - 10 cm) | Fine Science Tools | 11050-10 | |
| Gasas 4"x4" | Cualquier proveedor | ||
| tubo microcentrífugo de 1,5 cc | Cualquier proveedor | ||
| Cubeta de hielo | Cualquier proveedor | ||
| Mortero y mano | Fisher Scientific | 12-961AA | |
| jeringa de 1 cc con aguja de 25G | Fisher Scientific | 14-826-88 | |
| Aguja de 20G | Cualquier proveedor | ||
| pipetaman de 1 mL | Cualquier proveedor | ||
| Puntas de pipeta de 1 mL | Cualquier proveedor | ||
| Tubos Falcon de poliestireno de 8 ml | VWR international | 60819-331 | |
| Bolsa de esterilización 3"x8" | VWR international | 24008 | |
| Bolsa de esterilización 5"x10" | VWR international | 24010 | |
| Placa de agar MacConkey II | BD Biosciences | 221172 | |
| Alcohol etílico - 200 grados | Pharmco-AAPER | [70%] | |
| Pentobarbital sódico (Solución de Nembutal sódico) | OVATION Pharmaceuticals | 70 mg/kg | |
| Aerrane (Isoflurano) | Baxter International Inc. | 99.9% | |
| Triadina yodopovidona (Betadine) | Triad desechables | ||
| Solución salina tamponada con fosfato (PBS) | |||
| Clorhidrato de buprenorfina | Bedford Laboratories | 0,1 mg/kg |
Referencias
- DeCamp, M. M., Demling, R. H. Posttraumatic multisystem organ failure. JAMA. 260, 530-534 (1988).
- Deitch, E. A. Multiple organ failure. Pathophysiology and potential future therapy. Ann Surg. 216, 117-134 (1992).
- Carrico, C. J., Meakins, J. L., Marshall, J. C.
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Reimpresiones y permisos
