Este protocolo describe la disección en vivo de Drosophila Larvas con el propósito de la imagen del movimiento de las buenas prácticas agrarias etiquetados vesículas axonal en rieles de microtúbulos.
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Artículo de método
Visualización en vivo de las vesículas sinápticas En Drosophila segmentaria axones larvas
En este artículo
Resumen
Resumen
Elucidar los mecanismos de transporte axonal ha demostrado ser muy importante para determinar cómo los defectos en el transporte de larga distancia afecta a diferentes enfermedades neurológicas. Los defectos en este proceso esencial puede tener efectos perjudiciales en el funcionamiento neuronal y el desarrollo. Hemos desarrollado un protocolo de disección que está diseñado para exponer los
Protocolo
1. Preparación de los reactivos
- Prepare la preparación de amortiguación disección mediante la adición de los siguientes compuestos: 128 mM NaCl, 1 mM EGTA, 4 mM de MgCl 2, 2 mM KCl, HEPES 5 mM y 36 mM de sacarosa en 1000 ml, el pH a 7,2 y el filtro de esterilización.
2. Preparación para la disección
- Cubo Siligard: El gel se corta a aproximadamente una pulgada de ancho, una pulgada de largo y aproximadamente 1 cm de alto. El cubo de gel se coloca en un portaobjetos de vidrio durante la disección. Los cubos se pueden utilizar más de una vez.
- Pins: pins utilizados para la disección debe ser mu....
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Discusión
Imágenes in vivo de transporte de vesículas sinápticas en Drosophila nervios larvas segmentaria es una poderosa herramienta para el estudio de los mecanismos en el transporte axonal. Hemos utilizado anteriormente este protocolo para evaluar la dinámica de transporte dentro de los nervios larvas expresar ampliado repite polyQ para dilucidar cómo la expansión de repeticiones afectan a la dinámica del transporte de vesículas 3. El uso de este protocolo la velocidad de movimiento de la .......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
SG es apoyado por fondos de la Universidad Estatal de Nueva York en Buffalo y de John R. Oishei Fundación.
MK fue apoyado por un Premio de Investigación de Estudiantes de la UB por curca.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 1 par de tijeras de disección micro | Fine Science Tools | Tijeras de resorte – hoja de 6 mm. Diámetro de la punta de 0,125 mm | |
| 2 pares de pinzas | Fisher Scientific | Pinzas micro-Adson para disección con punta serrada Fisherbrand | |
| Caja de alfileres de disección | Fine Science Tools | Alfileres Minutien de 0,1 mm de diámetro |
Referencias
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Hurd, D. D., Saxton, W. M. Kinesin mutations cause motor neuron dise....
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Reimpresiones y permisos
