Las células madre neurales se prepararon desde el hipocampo de los adultos no hibernan las ardillas de tierra del Ártico año de edad (AGS). Estas células madre neurales se puede ampliar a través de numerosos pasajes, diferenciados y se mantiene como una neurona cerca de 50:50 a la cultura gliales.
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Artículo de método
Crecimiento y diferenciación de las células del hipocampo adulto ardilla de tierra del Ártico troncales nerviosas
En este artículo
Resumen
Resumen
Ardillas terrestres del ártico (Urocitellus parryii, AGS) son únicos en su habilidad para hibernar con una temperatura corporal central por debajo de cero o cerca de 1. Estos animales también se resisten a la lesión isquémica en el cerebro in vivo 2,3 y el oxígeno, la glucosa en la privación in vitro 4,5. Estas cualidades únicas proporcionó el impulso para aislar las neuronas AGS para examinar las características inherentes neuronal que podría explicar la capacidad de las neuronas AGS para resistir las lesiones y la muerte celular causada por la isquemia y temperaturas extremadamente frías. La identificación de proteínas o genes diana que permiten las propiedades distintivas de estas células podría ayudar en el descubrimiento de terapias efectivas para una serie de indicaciones isquémica y para el estudio de la tolerancia al frío. Hipocampo adulto AGS contiene las células madre neurales que siguen proliferando, lo que permite una fácil expansión de estas células madre en cultivo. Se describe aquí los métodos por los cuales los investigadores pueden utilizar estas células madre y neuronas diferenciadas para cualquier propósito. Siguiendo muy de cerca los pasos de las células madre neurales AGS se puede ampliar a través de dos o más pasajes y diferenciado a una alta cultura en Tuj1 positivo neuronas (~ 50%) sin utilizar productos químicos tóxicos para reducir al mínimo el número de células en división. La isquemia induce la neurogénesis 6 y la neurogénesis que procede a través de MEK / ERK y las vías de señalización de supervivencia PI3K/Akt contribuye a la resistencia a la isquemia in vivo e in vitro 7 8 (Kelleher-Anderson, Drew et al., En preparación). Además de la caracterización de estas células neuronales única puede avanzar en muchos frentes, con todos o algunos de estos métodos.
Protocolo
1. AGS de células madre neurales y la preparación de medios
- Adulto ardilla de tierra ártica del hipocampo (AGS), las células madre neurales aisladas en una manera previamente descrita 9 ahora se puede obtener comercialmente como viales congelados. Las células son enviadas durante la noche en los paquetes de aislamiento que contienen hielo seco para asegurarse de que las células permanecen en un estado crioconservados. Para mantener la integridad, descomprimir las células inmediatamente después de recibir y almacenar a precios inferiores a -150 ° C, o en la fase de vapor de nitrógeno líquido Dewar.
- Preparar el medio basal agsNSC + 5% de....
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Discusión
AGS células madre neurales adultas son robustos y pueden ser ampliadas por numerosos pasajes las convierte en una excelente fuente de células madre neurales para el estudio de las propiedades básicas de las células madre neurales. La tasa de expansión es de aproximadamente un duplica cada veinticuatro horas, pero estas células deben ser pasados antes de la confluencia de llegar porque el contacto entre las células que favorecen la diferenciación de los astrocitos. Contacto mediada la diferenciación por lo tanto, hacer.......
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Divulgaciones
JA Kelleher-Andersson es el fundador de Neuronascent y es el inventor de las aplicaciones del suelo Ártico patente ardilla. Neuronascent recibe regalías por la venta de AGS los medios de comunicación y las células madre. RC McGee es empleado por Lifeline, Inc., que distribuye los medios de comunicación y las células madre neurales AGS.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por el Ejército de los EE.UU. de Investigación Médica y Material comando GRANT # 05178001 y NS041069-06 del Instituto Nacional de Trastornos Neurológicos y Accidentes Cerebrovasculares. Agradecemos a Joel Vonnahme por sus valiosos comentarios sobre el protocolo.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| agsNSC | Lifeline Cell Technology | FC-0004 | |
| Kit de expansión agsNSC | Lifeline Cell Technology | LL-0008 | Origen alternativo para DMEM/F12, B27 y rhFGFb (www.invitrogen.com) |
| Kit de diferenciación agsNSC | Lifeline Cell Technology | LL-0009 | Origen alternativo para DMEM/F12 e ITS-x (www.invitrogen.com) |
| Kit de medio de mantenimiento NeuraLife | Lifeline Cell Technology | LL-0012 | Las fuentes alternativas son NeuraBasal (LifeLine) o Neurobasal (Invitrogen), glutamina y B27 (www.invitrogen.com). Las células diferenciadas se mantienen hasta 3 semanas en NeuroLife, pero no más de 2 semanas en Neurobasal (www.invitrogen.com) |
| Micrómetro (como una cámara de recuento Bright Line) | Hausser Scientific | 1490 | http://www.hausserscientific.com/hausserbrightlinedirect.htm |
| Placas de 96 pocillos recubiertas con Biocoat Poly-L-Lysine | BD Biosciences | 356516 | www.bdbiosciences.com |
| Puntas de pipeta con orificio grande | Fisher Scientific | 02-707-141 | Evita el daño celular neuronal al pipetear. http://www.fishersci.com |
Referencias
- Barnes, B. M. Freeze avoidance in a mammal: body temperatures below 0 degree C in an Arctic hibernator. Science. 244, 1593-1595 (1989).
- Dave, K. R., Prado, R., Raval, A. P., Drew, K. L., Perez-Pinzon, M. A. The Arctic ground squirrel brain is res....
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Reimpresiones y permisos
