El clamp hiperinsulinémico euglucémico es el "patrón oro" para la evaluación de la acción de la insulina. La insulina es infundida a una velocidad constante estimular la absorción de la glucosa. La cantidad de glucosa infundida exógenos para contrarrestar esta caída es indicativo de sensibilidad a la insulina. Aquí, el procedimiento se realiza en una rata consciente, sin restricciones.
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Artículo de método
Hiperinsulinémico euglucémico pinza en la rata consciente
En este artículo
Resumen
Resumen
La diabetes tipo 2 (DT2) es el rápido aumento de la prevalencia. Caracterizados por una producción inadecuada de insulina o la incapacidad para utilizar la insulina que produce, los resultados de diabetes tipo 2 en los niveles elevados de glucosa en la sangre. El "patrón oro" en la evaluación de sensibilidad a la insulina es un clamp hiperinsulinémico euglucémico o abrazadera de la insulina. En este procedimiento, la insulina es infundida a una velocidad constante que resulta en una disminución de glucosa en la sangre. Para mantener la glucosa sanguínea a un nivel constante de glucosa exógena (D50) se infunde en la circulación venosa. La cantidad de glucosa infundida para mantener la homeostasis es un indicador de sensibilidad a la insulina. Aquí, se muestra el procedimiento de clamp de básica en el sondaje crónica, rata sin restricciones, consciente. Este modelo permite que la sangre se capturen con un mínimo estrés para el animal. Después de la inducción de la anestesia, una incisión se hace y la arteria carótida común izquierda y la vena yugular derecha se cateteriza. Catéteres insertados se lavan con solución salina heparinizada, a continuación, exteriorizada y seguro. Animales pueden recuperarse durante 4-5 días antes de los experimentos, con el aumento de peso un seguimiento diario. Sólo aquellos animales que recuperar el peso a los niveles pre-operatorios son utilizados para experimentos. En el día del experimento, las ratas en ayuno y conectado a las bombas que contienen insulina y D50. Glucemia basal se evaluó a partir de la línea arterial y se utiliza un punto de referencia durante todo el experimento (euglucemia). Después de esto, la insulina es infundida a una velocidad constante en la circulación venosa. Para que coincida con la caída de la glucosa en la sangre, se infunde D50. Si la tasa de infusión de D50 es mayor que la tasa de captación, un aumento de la glucosa va a producir. Del mismo modo, si la tasa es insuficiente para que coincida con la captación de glucosa en el cuerpo, la caída va a producir. La titulación de glucosa continúa hasta que se estabilicen las lecturas de glucosa se obtienen. Los niveles de glucosa y las tasas de infusión de glucosa estables durante este período son registrados y comunicados. Los resultados proporcionan un índice de sensibilidad de la insulina del cuerpo entero. La técnica puede ser refinado para satisfacer los requisitos específicos experimental. Que se ve reforzada por el uso de trazadores radioactivos que pueden determinar los tejidos a la insulina estimula la captación de glucosa específicos, así como el volumen de negocios de todo el cuerpo la glucosa.
Protocolo
R: El cateterismo quirúrgico de la circulación arterial y venosa
Parte 1: Preparación arteriales y venosos del catéter
- Cortar 15 cm de PE-50 (diámetro interior de 0,58 mm (0.023 ") x un diámetro exterior de 0.965 mm (0.038"). Corte una sección de 1 mm de tubo de silastic (0,76 mm (0,030 ") de diámetro interno x 1.65mm (0.065 ") de diámetro externo) para su uso como restricción de cuentas. La restricción de cuentas impide la rata que se saquen el catéter una vez que esté en su lugar.
- Inserte las puntas de las micro pinza de disección en la luz de la perla de restricción y con cuidado coloque la punta de las pinzas de sepa....
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Discusión
Desarrollado inicialmente para la investigación de la sensibilidad a la insulina en los seres humanos, el procedimiento de clamp ha sido adaptada a otras especies como ratas y ratones de laboratorio. La investigación de modelos animales de resistencia a la insulina ofrece una importante ayuda en la comprensión de la fisiopatología de la sensibilidad a la insulina y patologías asociadas, así como la identificación de las intervenciones terapéuticas que tienen valor clínico 1,2. Existen varios métodos para eval.......
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Divulgaciones
Procedimientos fueron aprobados por la Universidad de Calgary y Cuidado de Animales del Comité de Uso y cumplir con la Asociación Canadiense de directrices Laboratorio de Ciencias Animales de experimentación. Los autores no tienen conflictos de intereses o revelaciones.
Agradecimientos
Este estudio fue financiado por los Institutos Canadienses de Investigación en Salud y Canada.JS Genoma premios otorgados por el apoyo de los sueldos de Investigación de Alberta Patrimonio Foundationfor médicos, Heart and Stroke Foundation de Canadaand la Asociación Canadiense de Diabetes. Un agradecimiento especial al Dr. David Wasserman y Bracy Bingle para la enseñanza de este procedimiento para el laboratorio de Shearer.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Nombre del reactivo | Empresa | Número de catálogo | Comentarios (opcional) |
| Tubos de polietileno Intramedic (PE-50) | Fisher Scientific | 14 a 170-12B | Diámetro interno de 0.58 mm (0.023 ") de diámetro x 0.965 mm de exterior (0.038") |
| Dow Corning Silastic tubo de laboratorio | Fisher Scientific | 11 a 189-15C | Diámetro interior de 0,76 mm (0,030 ") de diámetro x exterior de 1.65mm (0.065") |
| Tygon S-50-HL tubos médicos | Harvard Apparatus | PY2 72-1251 | Diámetro interno de 3,2 mm (0,125 ") de diámetro x exterior de 4,7 mm (0.1875") |
| Loctite Super Glue | Grand & Toy | 32237 | Gel de control |
| Hoja de bisturí estéril | VWR | BD371610 | |
| Pinzas de disección curvas Micro | George Tiemann & Co. | 160-20 | x 2 |
| Pinzas de disección rectas Micro | George Tiemann & Co. | 160-15 | x 2 |
| Pinzas hemostáticas curvas | George Tiemann & Co. | 105-1135 | x 2 |
| Pinzas hemostáticas rectas | George Tiemann & Co. | 105-1130 | x 2 |
| Guardias hemostato Consejo | Robbins Instruments, Inc. | 15.09-2-004 | |
| Tijeras rectas Cirugía | George Tiemann & Co. | 105-402 | |
| VENOJECT Multi-muestra adaptador Luer | Terumo Medical Products | 810127A | Calibre 21, de 1 pulgada |
| Introductor de catéter estéril | Becton Dickinson | 406999 | |
| De calibre 14 aguja roma | Becton Dickinson | 511310 | Calibre 14, 2 pulgadas |
| Suturas quirúrgicas estériles | Johnson & Johnson Medical Productos | 1679H | La seda, el tamaño de 3-0 |
| No estériles de sutura quirúrgica | Angiotech Pharmaceuticals, Inc. | SP116 | La seda, el tamaño de 4-0 |
| Los hisopos de algodón | VWR | 10806-005 | |
| Almohadillas de gasa 4ply | VWR | CA43845-062 | |
| Clippers de Pequeños Animales inalámbrico | Harvard Apparatus | 729063 | |
| Isoflurano | Halocarbonos Products Corp. | IPN-45 | |
| Anestesia Cesta | Benson Medical Industries, Inc. | ||
| 70% de etanol | Fisher Scientific | HC-1000 | |
| Betadine solución antiséptica | Occidental de distribución de drogas Centre Ltd. | 105267 | |
| Modelo 11 Plus bomba de jeringa | Harvard Apparatus | 702208 | |
| Acopladores de tubos de acero inoxidable | Harvard Apparatus | 72-4434 | Calibre 23, 0.3 pulgadas |
| Tubos de acero inoxidable Tapones | Harvard Apparatus | 72-4436 | Calibre 23, 0,5 pulgadas |
| Las agujas de acero inoxidable Blunt | Instech Laboratories, Inc. | LS22 | Calibre 22 |
| 60 Grado Y-conectores | Partes pequeñas | STCY-22-05 | Calibre 22 |
| CritSpin Centrífuga microhematocrito | Iris Procesamiento de Muestras | CS12 | |
| Centrifugar Mini | Fisher Scientific | 05-090-100 | |
| Tubos micro centrífuga | VWR | 53550-778 | |
| 50 ml de tubos de polipropileno centrífuga | VWR | 89004-364 | |
| 1 ml jeringas de plástico de deslizamiento Consejo | Becton Dickinson | 309602 | |
| 3 ml de plástico Luerlok jeringas Consejo | Becton Dickinson | 309585 | |
| Inyección anticoagulante heparina | Occidental de distribución de drogas Centre Ltd. | 102824 | Fabricante: LEO Pharma Inc. Conc. 1000 UI |
| EDTA | Promega Corp. | V4231 | 0,5 M, pH 8,0 |
| Salina | Occidental de distribución de drogas Centre Ltd. | ABB7983154 | Fabricante: Hospira al 0,9% |
| Dextrosa al 50% | Vetoquinol | 8DEX012D | |
| Humulin-R | Eli Lilly | HI-210 | 100U/ml |
| Las jeringas de 1 ml de insulina | Becton Dickinson | 309311 | |
| Fisherbrand * Hemato-Seal Sellador | Fisher Scientific | 02-678 | |
| Fisherbrand * Tubos capilares microhematocrito | Fisher Scientific | 22-362-574 | |
| One Touch Strips ultra de prueba | LifeScan, Inc. | AW 085-314H | |
| One Touch ultra medidor de glucosa en la sangre | LifeScan, Inc. | AW 085-314b | |
| Sodio Pentobarbitol | CEVA Santé Animale | 1715 138 | Conc. 54.7mg/ml |
| Red Tape Laboratory de etiquetado | VWR | 89097-932 | |
| Laboratorio de Etiquetado de cintas azules | VWR | 89097-936 | |
| Báscula | Fisher Scientific | 01-913-88 | |
| Vórtice | VWR | 58815-234 | |
| Temporizador | VWR | 62344-641 |
Referencias
- Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H. Limitations to basal and insulin-stimulated skeletal muscle glucose uptake in the high-fat-fed rat. Am J Physiol Endocrinol Metab. 279, E1064-E1071 (2000).
- Halseth, A. E., Bracy, D. P., Wasserman, D. H.
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Reimpresiones y permisos
