Hiperinsulinémico euglucémico pinza en la rata consciente

Resumen

El clamp hiperinsulinémico euglucémico es el "patrón oro" para la evaluación de la acción de la insulina. La insulina es infundida a una velocidad constante estimular la absorción de la glucosa. La cantidad de glucosa infundida exógenos para contrarrestar esta caída es indicativo de sensibilidad a la insulina. Aquí, el procedimiento se realiza en una rata consciente, sin restricciones.

Resumen

La diabetes tipo 2 (DT2) es el rápido aumento de la prevalencia. Caracterizados por una producción inadecuada de insulina o la incapacidad para utilizar la insulina que produce, los resultados de diabetes tipo 2 en los niveles elevados de glucosa en la sangre. El "patrón oro" en la evaluación de sensibilidad a la insulina es un clamp hiperinsulinémico euglucémico o abrazadera de la insulina. En este procedimiento, la insulina es infundida a una velocidad constante que resulta en una disminución de glucosa en la sangre. Para mantener la glucosa sanguínea a un nivel constante de glucosa exógena (D50) se infunde en la circulación venosa. La cantidad de glucosa infundida para mantener la homeostasis es un indicador de sensibilidad a la insulina. Aquí, se muestra el procedimiento de clamp de básica en el sondaje crónica, rata sin restricciones, consciente. Este modelo permite que la sangre se capturen con un mínimo estrés para el animal. Después de la inducción de la anestesia, una incisión se hace y la arteria carótida común izquierda y la vena yugular derecha se cateteriza. Catéteres insertados se lavan con solución salina heparinizada, a continuación, exteriorizada y seguro. Animales pueden recuperarse durante 4-5 días antes de los experimentos, con el aumento de peso un seguimiento diario. Sólo aquellos animales que recuperar el peso a los niveles pre-operatorios son utilizados para experimentos. En el día del experimento, las ratas en ayuno y conectado a las bombas que contienen insulina y D50. Glucemia basal se evaluó a partir de la línea arterial y se utiliza un punto de referencia durante todo el experimento (euglucemia). Después de esto, la insulina es infundida a una velocidad constante en la circulación venosa. Para que coincida con la caída de la glucosa en la sangre, se infunde D50. Si la tasa de infusión de D50 es mayor que la tasa de captación, un aumento de la glucosa va a producir. Del mismo modo, si la tasa es insuficiente para que coincida con la captación de glucosa en el cuerpo, la caída va a producir. La titulación de glucosa continúa hasta que se estabilicen las lecturas de glucosa se obtienen. Los niveles de glucosa y las tasas de infusión de glucosa estables durante este período son registrados y comunicados. Los resultados proporcionan un índice de sensibilidad de la insulina del cuerpo entero. La técnica puede ser refinado para satisfacer los requisitos específicos experimental. Que se ve reforzada por el uso de trazadores radioactivos que pueden determinar los tejidos a la insulina estimula la captación de glucosa específicos, así como el volumen de negocios de todo el cuerpo la glucosa.

Protocolo

R: El cateterismo quirúrgico de la circulación arterial y venosa

Parte 1: Preparación arteriales y venosos del catéter

1. Cortar 15 cm de PE-50 (diámetro interior de 0,58 mm (0.023 ") x un diámetro exterior de 0.965 mm (0.038"). Corte una sección de 1 mm de tubo de silastic (0,76 mm (0,030 ") de diámetro interno x 1.65mm (0.065 ") de diámetro externo) para su uso como restricción de cuentas. La restricción de cuentas impide la rata que se saquen el catéter una vez que esté en su lugar.
2. Inserte las puntas de las micro pinza de disección en la luz de la perla de restricción y con cuidado coloque la punta de las pinzas de sepa....

Discusión

Desarrollado inicialmente para la investigación de la sensibilidad a la insulina en los seres humanos, el procedimiento de clamp ha sido adaptada a otras especies como ratas y ratones de laboratorio. La investigación de modelos animales de resistencia a la insulina ofrece una importante ayuda en la comprensión de la fisiopatología de la sensibilidad a la insulina y patologías asociadas, así como la identificación de las intervenciones terapéuticas que tienen valor clínico ^1,2. Existen varios métodos para eval.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Nombre del reactivo	Empresa	Número de catálogo	Comentarios (opcional)
Tubos de polietileno Intramedic (PE-50)	Fisher Scientific	14 a 170-12B	Diámetro interno de 0.58 mm (0.023 ") de diámetro x 0.965 mm de exterior (0.038")
Dow Corning Silastic tubo de laboratorio	Fisher Scientific	11 a 189-15C	Diámetro interior de 0,76 mm (0,030 ") de diámetro x exterior de 1.65mm (0.065")
Tygon S-50-HL tubos médicos	Harvard Apparatus	PY2 72-1251	Diámetro interno de 3,2 mm (0,125 ") de diámetro x exterior de 4,7 mm (0.1875")
Loctite Super Glue	Grand & Toy	32237	Gel de control
Hoja de bisturí estéril	VWR	BD371610
Pinzas de disección curvas Micro	George Tiemann & Co.	160-20	x 2
Pinzas de disección rectas Micro	George Tiemann & Co.	160-15	x 2
Pinzas hemostáticas curvas	George Tiemann & Co.	105-1135	x 2
Pinzas hemostáticas rectas	George Tiemann & Co.	105-1130	x 2
Guardias hemostato Consejo	Robbins Instruments, Inc.	15.09-2-004
Tijeras rectas Cirugía	George Tiemann & Co.	105-402
VENOJECT Multi-muestra adaptador Luer	Terumo Medical Products	810127A	Calibre 21, de 1 pulgada
Introductor de catéter estéril	Becton Dickinson	406999
De calibre 14 aguja roma	Becton Dickinson	511310	Calibre 14, 2 pulgadas
Suturas quirúrgicas estériles	Johnson & Johnson Medical Productos	1679H	La seda, el tamaño de 3-0
No estériles de sutura quirúrgica	Angiotech Pharmaceuticals, Inc.	SP116	La seda, el tamaño de 4-0
Los hisopos de algodón	VWR	10806-005
Almohadillas de gasa 4ply	VWR	CA43845-062
Clippers de Pequeños Animales inalámbrico	Harvard Apparatus	729063
Isoflurano	Halocarbonos Products Corp.	IPN-45
Anestesia Cesta	Benson Medical Industries, Inc.
70% de etanol	Fisher Scientific	HC-1000
Betadine solución antiséptica	Occidental de distribución de drogas Centre Ltd.	105267
Modelo 11 Plus bomba de jeringa	Harvard Apparatus	702208
Acopladores de tubos de acero inoxidable	Harvard Apparatus	72-4434	Calibre 23, 0.3 pulgadas
Tubos de acero inoxidable Tapones	Harvard Apparatus	72-4436	Calibre 23, 0,5 pulgadas
Las agujas de acero inoxidable Blunt	Instech Laboratories, Inc.	LS22	Calibre 22
60 Grado Y-conectores	Partes pequeñas	STCY-22-05	Calibre 22
CritSpin Centrífuga microhematocrito	Iris Procesamiento de Muestras	CS12
Centrifugar Mini	Fisher Scientific	05-090-100
Tubos micro centrífuga	VWR	53550-778
50 ml de tubos de polipropileno centrífuga	VWR	89004-364
1 ml jeringas de plástico de deslizamiento Consejo	Becton Dickinson	309602
3 ml de plástico Luerlok jeringas Consejo	Becton Dickinson	309585
Inyección anticoagulante heparina	Occidental de distribución de drogas Centre Ltd.	102824	Fabricante: LEO Pharma Inc. Conc. 1000 UI
EDTA	Promega Corp.	V4231	0,5 M, pH 8,0
Salina	Occidental de distribución de drogas Centre Ltd.	ABB7983154	Fabricante: Hospira al 0,9%
Dextrosa al 50%	Vetoquinol	8DEX012D
Humulin-R	Eli Lilly	HI-210	100U/ml
Las jeringas de 1 ml de insulina	Becton Dickinson	309311
Fisherbrand * Hemato-Seal Sellador	Fisher Scientific	02-678
Fisherbrand * Tubos capilares microhematocrito	Fisher Scientific	22-362-574
One Touch Strips ultra de prueba	LifeScan, Inc.	AW 085-314H
One Touch ultra medidor de glucosa en la sangre	LifeScan, Inc.	AW 085-314b
Sodio Pentobarbitol	CEVA Santé Animale	1715 138	Conc. 54.7mg/ml
Red Tape Laboratory de etiquetado	VWR	89097-932
Laboratorio de Etiquetado de cintas azules	VWR	89097-936
Báscula	Fisher Scientific	01-913-88
Vórtice	VWR	58815-234
Temporizador	VWR	62344-641