Artículo de método

Micro-disección de cerebro de rata para el ARN o la extracción de proteínas a partir de región específica del cerebro

DOI:

10.3791/269

⸱

30 de agosto de 2007

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1Laboratory of Neurodegenerative Diseases, Department of Anatomy, LKS Faculty of Medicine, The University of Hong Kong - HKU

En este artículo

Resumen

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Micro-disección de cerebro de rata en las distintas regiones es muy importante para el estudio de diferentes enfermedades neurodegenerativas. Este video muestra la micro-disección de las cuatro regiones del cerebro importantes incluyen bulbo olfatorio, corteza frontal, el cuerpo estriado y el hipocampo en el tejido fresco cerebro de rata. Consejos útiles para la eliminación rápida de las regiones respectivas para evitar la degradación de proteínas y ARN del tejido se dan.

Resumen

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Micro-disección de cerebro de rata en las distintas regiones es muy importante para el estudio de diferentes enfermedades neurodegenerativas. Este video muestra la micro-disección de las cuatro regiones del cerebro importantes incluyen bulbo olfatorio, corteza frontal, el cuerpo estriado y el hipocampo en el tejido fresco cerebro de rata. Consejos útiles para la eliminación rápida de las regiones respectivas para evitar la degradación de proteínas y ARN del tejido se dan.

Protocolo

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Paso 1

Sacrificio de la rata de acuerdo a los protocolos establecidos. Quitar el cerebro en el cráneo y enjuague en el hielo frío DEPC tratados agua Milli Q para eliminar la sangre de la superficie.

Paso 2

Colocar en placa de metal frío. Cortar el cerebro bi-media en el hemisferio derecho e izquierdo.

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Figura 1. Las posiciones de corte desde el punto de vista medial del hemisferio rata

Paso 3

Recoger el bulbo olfatorio derecho después del primer corte. Flash congelar la muestra en nitrógeno líquido y se almacenan a -80 ° C.

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Figura 2. Disección bulbo olfatorio

Paso 4

Recoge el derecho de la corteza frontal después del segundo corte con una cuchilla y una pinza de Dumont N º 5. Flash congelar la muestra en nitrógeno líquido y se almacenan a -80 ° C.

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Figura 3. Frontal disección de la corteza

Paso 5

Recoger el cuerpo estriado (núcleo caudado) justo después del tercer corte con la ayuda de dos pinzas Dumont N º 5. Flash congelar la muestra en nitrógeno líquido y se almacenan a -80 ° C.

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Figura 4. Estriado (núcleo caudado) la disección

Paso 6

Para recoger el hipocampo, coloque la cara ventral del cerebro y luego quitar el cerebro medio para exponer el hipocampo. Diseccionar el hipocampo de la corteza con dos pinzas Dumont N º 5. Flash congelar la muestra en nitrógeno líquido y se almacenan a -80 ° C.

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Figura 5. Hipocampo disección

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Discusión

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Diferentes regiones del cerebro asociado con diferentes enfermedades neurodegenerativas. Por ejemplo, la corteza frontal y el estriado se relacionan con la enfermedad de Parkinson s, mientras que el hipocampo se relaciona con la enfermedad de Alzheimer. Precisa micro-disección del cerebro que nos permite detectar los cambios de ARNm y proteínas en la región afectada con mayor precisión.

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Divulgaciones

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Los animales fueron manejados de acuerdo con el protocolo para el uso de animales en la investigación aprobada por el Comité sobre el uso de animales vivos para la Enseñanza y la Investigación (CULATR) en la Universidad de Hong Kong y de acuerdo con los Institutos Nacionales de Salud directrices para el uso de animales.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
MicroscopioOlympus Corporation
Herramientas de disecciónPlaca de metal, pinzas, hoja, etc. Envueltas individualmente con papel de aluminio y calentadas a 180 °C durante ocho horas para eliminar RNasas. Enfriarlas hasta que estén heladas antes de usarlas.

Referencias

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Palkovits, M. Maps and guide to micro-dissection of the rat brain. , Elsevier. New York. (c.1988).
  2. Swanson, L. W. Brain maps: structure of the rat brain. 3rd revised edition. , Elsevier Academic Press. (2004).

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Etiquetas

Extracci n de ARNbulbo olfatoriocorteza frontalestriadohipocamponitr geno l quido

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