Aquí se presenta un protocolo para la realización de placa sólida basada en la restricción dietética en C. elegans Con bacterias muertas.
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Artículo de método
Placa Sólida basado en la restricción dietética Caenorhabditis elegans
En este artículo
Resumen
Resumen
Reducción de la ingesta de alimentos sin desnutrición o inanición se sabe que aumenta la vida útil y retrasar la aparición de diversas enfermedades relacionadas con la edad en una amplia gama de especies, incluyendo mamíferos. También provoca una disminución en el peso corporal y la fertilidad, así como niveles más bajos de glucosa en plasma, la insulina y el IGF-1 en estos animales. Este tratamiento se refiere a menudo como la restricción dietética (DR) o la restricción calórica (CR). El nematodo Caenorhabditis elegans se ha convertido en un importante organismo modelo para estudiar la biología del envejecimiento. Manipulaciones ambientales y genéticos se han utilizado para el modelo DR y han demostrado prolongar la vida de C. elegans. Sin embargo, muchos de los estudios reportados en la República Dominicana C. elegans se realizaron mediante la propagación de los animales en un medio líquido, mientras que la mayoría de los estudios de genética en el campo del envejecimiento se realiza en el estándar de agar sólido en placas de Petri. Aquí se presenta un protocolo estándar de DR con NGM agar sólido basado en la placa con bacterias muertas.
Protocolo
1. El establecimiento de una curva de calibración para la estimación de las concentraciones de bacterias
En esta sección se describe un método para la estimación de la concentración de bacterias de cualquier cepa determinada bacteria (por ejemplo, OP50, HT115) que se utilizará como fuente de alimento para los experimentos de restricción dietética en C. elegans. Las curvas de calibración independientes deben ser establecidos para cada cepa de la bacteria utilizada.
- Inocular una colonia de E. coli OP50 bacterias seleccionar de una racha fresca de bacterias en agar LB en 3 ml de caldo LB líquido.
- Lugar ....
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Discusión
La restricción dietética (DR) se sabe que aumenta la vida útil y retrasar la aparición de diversas enfermedades relacionadas con la edad en una amplia gama de especies, incluyendo mamíferos 7.5. Manipulaciones ambientales y genéticos se han utilizado para el modelo DR en C. elegans, incluidos los gusanos de cultivo en un medio líquido semi-definido 8,9, la dilución de la fuente de alimento de bacterias en un medio líquido 10 a 12, y el uso de mutantes de comportamiento que se al.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por un premio de piloto del Centro de choque Nathan (P30 AG13283) y una subvención R01 (R01 AG028516) del Instituto Nacional sobre el Envejecimiento (NIA) para A.-LH
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Nombre del reactivo | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
| Carbenicilina | Duchefa Biochemie | C0109.25 | Disuelto en el agua. |
| Kanamicina | Roche | 10106801001 | Disuelto en el agua. |
| Bacto-peptona | Becton, Dickinson and Company | DF0118072 | |
| Bacto-triptona | Becton, Dickinson and Company | DF0123075 | |
| Bacto-extracto de levadura | Becton, Dickinson and Company | DF0127071 | |
| Agar | Becton, Dickinson and Company | DF00145170 | |
| Tubo de cultivo estéril | EE.UU. Científico | 1485-0810 | |
| Espectrofotómetro | Amersham Biosciences | Gene Quant pro | Amersham ahora es parte de GE Healthcare. |
| Microscopio de disección | Zeiss | Stemi 2000 | |
| Centrífugo | Beckman Coulter | Accuspin FR |
Referencias
- Hsu, A. L., Murphy, C. T., Kenyon, C. Regulation of aging and age-related disease by DAF-16 and heat-shock factor. Science. 300, 1142-1145 (2003).
- Kenyon, C., Chang, J., Gensch, E., Rudner, A., Tabtiang, R. A C. elegans mutant that lives twice as long as wild type. Nature. 3....
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Reimpresiones y permisos
