Placa Sólida basado en la restricción dietética Caenorhabditis elegans</em

Resumen

Aquí se presenta un protocolo para la realización de placa sólida basada en la restricción dietética en C. elegans Con bacterias muertas.

Resumen

Reducción de la ingesta de alimentos sin desnutrición o inanición se sabe que aumenta la vida útil y retrasar la aparición de diversas enfermedades relacionadas con la edad en una amplia gama de especies, incluyendo mamíferos. También provoca una disminución en el peso corporal y la fertilidad, así como niveles más bajos de glucosa en plasma, la insulina y el IGF-1 en estos animales. Este tratamiento se refiere a menudo como la restricción dietética (DR) o la restricción calórica (CR). El nematodo Caenorhabditis elegans se ha convertido en un importante organismo modelo para estudiar la biología del envejecimiento. Manipulaciones ambientales y genéticos se han utilizado para el modelo DR y han demostrado prolongar la vida de C. elegans. Sin embargo, muchos de los estudios reportados en la República Dominicana C. elegans se realizaron mediante la propagación de los animales en un medio líquido, mientras que la mayoría de los estudios de genética en el campo del envejecimiento se realiza en el estándar de agar sólido en placas de Petri. Aquí se presenta un protocolo estándar de DR con NGM agar sólido basado en la placa con bacterias muertas.

Protocolo

1. El establecimiento de una curva de calibración para la estimación de las concentraciones de bacterias

En esta sección se describe un método para la estimación de la concentración de bacterias de cualquier cepa determinada bacteria (por ejemplo, OP50, HT115) que se utilizará como fuente de alimento para los experimentos de restricción dietética en C. elegans. Las curvas de calibración independientes deben ser establecidos para cada cepa de la bacteria utilizada.

1. Inocular una colonia de E. coli OP50 bacterias seleccionar de una racha fresca de bacterias en agar LB en 3 ml de caldo LB líquido.
2. Lugar ....

Discusión

La restricción dietética (DR) se sabe que aumenta la vida útil y retrasar la aparición de diversas enfermedades relacionadas con la edad en una amplia gama de especies, incluyendo mamíferos ^7.5. Manipulaciones ambientales y genéticos se han utilizado para el modelo DR en C. elegans, incluidos los gusanos de cultivo en un medio líquido semi-definido ^8,9, la dilución de la fuente de alimento de bacterias en un medio líquido ^{10 a 12,} y el uso de mutantes de comportamiento que se al.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Nombre del reactivo	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Carbenicilina	Duchefa Biochemie	C0109.25	Disuelto en el agua.
Kanamicina	Roche	10106801001	Disuelto en el agua.
Bacto-peptona	Becton, Dickinson and Company	DF0118072
Bacto-triptona	Becton, Dickinson and Company	DF0123075
Bacto-extracto de levadura	Becton, Dickinson and Company	DF0127071
Agar	Becton, Dickinson and Company	DF00145170
Tubo de cultivo estéril	EE.UU. Científico	1485-0810
Espectrofotómetro	Amersham Biosciences	Gene Quant pro	Amersham ahora es parte de GE Healthcare.
Microscopio de disección	Zeiss	Stemi 2000
Centrífugo	Beckman Coulter	Accuspin FR