Señalización de la insulina conserva las vías se encuentran en la mosca de la fruta Drosophila melanogaster Hacer de este organismo una herramienta potencial para el modelado de los trastornos metabólicos como la diabetes tipo II. Con este fin, es fundamental para establecer pruebas fisiológicas para medir efectivamente la acción sistémica a la insulina en la utilización de glucosa periférica en la mosca adulta.
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Artículo de método
Inyección de insulina y extracción hemolinfa para medir la sensibilidad a la insulina en adultos Drosophila melanogaster
En este artículo
Resumen
Resumen
Conserva los mecanismos de detección de nutrientes existen entre los mamíferos y mosca de la fruta que se asemeja péptidos de mamíferos insulina y el glucagón, respectivamente, la función de mantener la homeostasis de la glucosa durante el desarrollo de 1,2 estadios larvarios. Los estudios sobre las moscas adultas en gran medida post-mitótico han puesto de manifiesto la perturbación de la homeostasis de la glucosa como resultado de la ablación genética de la insulina-like peptide (ILP) que producen las células (IPC) 3. Por lo tanto, las moscas adultas frutas son una gran promesa como un sistema modelo adecuado genética de los trastornos metabólicos como la diabetes tipo II. Para seguir desarrollando el sistema de mosca de la fruta, comparable pruebas fisiológicas para medir la tolerancia a la glucosa y la sensibilidad a la insulina en los mamíferos se debe establecer. Con este fin, recientemente se ha descrito un nuevo procedimiento para medir la respuesta de tolerancia oral a la glucosa en la mosca adulta y han demostrado la importancia de la IPC para adultos en el mantenimiento de la homeostasis de la glucosa 4,5. Aquí, se ha modificado el procedimiento descrito anteriormente para la inyección de insulina 6 y lo combinó con un método de extracción de hemolinfa novela para medir la sensibilidad periférica a la insulina en la mosca adulta. Excepcionalmente, el protocolo permite dirigir las mediciones fisiológicas de la capacidad de la mosca adulta de disponer de una carga de glucosa periférica tras la inyección de insulina, una metodología que hace que sea factible para caracterizar mutantes señalización de la insulina y las posibles intervenciones que afectan la tolerancia a la glucosa y la sensibilidad a la insulina en la mosca adulta.
Protocolo
1. La insulina preparación de la solución
- Prepare una solución fresca insulina bovina mediante la disolución de la insulina en PBS para alcanzar la concentración de 0,01 mg / ml. Tanto la insulina / PBS PBS y soluciones de control deben ser mantenidos en hielo durante todo el procedimiento de inyección. Estas soluciones deben prepararse con 0,5% (v / v) FD & C Azul no. Un colorante de alimentos.
2. Aguja de preparación y la inyección Puesta en marcha
- Prepare agujas capilares de vidrio utilizando una micropipeta puller.The siguientes ajustes extractor producir agujas de calidad suficiente para la inyección: Heat....
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Discusión
La técnica descrita en este informe es potencialmente útil en cualquier estudio que investiga los procesos fisiológicos que resulta en alteraciones detectables en la composición de la hemolinfa de Drosophila. Mediante la combinación de la inyección y recolección de la hemolinfa de esta manera, es posible determinar los efectos inmediatos fisiológicamente relevantes de un determinado tratamiento experimental o manipulación. La principal ventaja de esta "sangría" técnica en la recolección de la hemolinf.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por subvenciones del Servicio Nacional de YW.CF (AG21068, AG31086).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Nombre del reactivo / equipo | Empresa | Número de catálogo | |
| Insulina bovina | Sigma | I5500 | |
| Infinito reactivo de glucosa | Thermo Electron Corporation | TR1541 | |
| Manual microinyector | Sutter Instrumento | ||
| P-87 Flamming / Brown micropipeta extractor | Sutter Instrumento | ||
| Un solo cuerpo de vidrio de borosilicato capilares | AM Sistemas | 626000 | |
| FD & C Azul N º 1 | McCormick & Company | ||
| Un tubo capilar se l | Drummond | ||
| Tres ejes manual de micromanipulador y la base | Mundial de Instrumentos de Precisión |
Referencias
- Rulifson, E. J., Kim, S. K., Nusse, R. Ablation of insulin-producing neurons in flies: growth and diabetic phenotypes. Science. 296, 1118-1118 (2002).
- Kim, S. K., Rulifson, E. J. Conserved mechanisms of glucose sensing and regulation by Drosophila corpora c....
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Reimpresiones y permisos
