Trichuris muris infección intestinal es un modelo de la inmunidad Th2 en ratones resistentes al generar una respuesta Th2 protección y ratones susceptibles de generar una respuesta Th1 patológicos.
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Artículo de método
Trichuris muris infección: un modelo de tipo 2 inmunidad y la inflamación en el intestino
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Resumen
Resumen
Trichuris muris es un patógeno natural de los ratones y es biológicamente y antigénicamente similares a las especies de Trichuris que infectan a los seres humanos y animales 1. Los huevos infectantes se dan mediante una sonda nasogástrica, eclosionan en el intestino delgado distal, invaden las células epiteliales intestinales (IEC) que la línea de las criptas del ciego y el colon proximal y en la maduración de los huevos de los gusanos liberación en el medio ambiente 1. Este modelo es una herramienta poderosa para examinar los factores que las células CD4 + de control T helper (Th) activación de las células, así como cambios en el epitelio intestinal. La respuesta inmune que se produce en las cepas endogámicas, como C57BL / 6 y BALB / c, se caracteriza por las citocinas Th2 polarizadas (IL-4, IL-5 e IL-13) y la expulsión de los gusanos, mientras que Th1 asociada a las citocinas (IL -12, IL-18, IFN-γ) promover las infecciones crónicas en AKR genéticamente susceptibles / J ratones 2-6. Citocinas Th2 promover cambios fisiológicos en el microambiente intestinal incluyendo la rápida rotación de la IEC, la diferenciación de las células caliciformes, la contratación y cambios en la permeabilidad del epitelio y la contracción del músculo liso, que se han implicado en la expulsión del gusano 7.15. Aquí detallamos un protocolo para la propagación de los huevos de Trichuris muris que puede ser utilizado en experimentos posteriores. También proporcionamos una pesca experimental de la muestra con sugerencias para el análisis post-infección. En términos generales, este protocolo se proporcionará a los investigadores con las herramientas básicas para realizar una Trichuris muris ratón modelo de infección que puede ser utilizado para tratar las cuestiones relacionadas con proclividad Th en el tracto gastrointestinal, así como funciones efectoras inmunes de la IEC.
Protocolo
1. Propagación de los huevos de Trichuris muris
- Para generar nuevos lotes de huevos de Trichuris muris, 20-30 infectar ratones inmunodeficientes (por ejemplo, NOD.Cg-Prkdc scid Il2rg tm1Wjl / SzJ (NSG) o 129S6/SvEvTac-Rag2 tm1Fwa (RAG2 - / -)) o ratones genéticamente susceptibles ( por ejemplo. AKR / J), que es de 6-8 semanas de edad con aproximadamente 300 huevos de Trichuris muris mediante una sonda nasogástrica.
- Después de 32-35 días el sacrificio de los ratones por asfixia de CO 2.
- Exponer el lado ventral del ratón y húmedo en el abdomen con un 70% de ....
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Discusión
Este protocolo detalla un estándar de alta dosis aguda de la infección por Trichuris muris que pueden ser modificados según sea necesario por el investigador. Por ejemplo, los ratones pueden ser sacrificados y tejidos recolectados en días diferentes. Para determinar que los ratones han establecido con éxito la carga del gusano completo que puede ser sacrificado en el día 14, momento en el que todos los ratones que llevan una carga de aproximadamente 200 gusanos. Los ratones también pueden ser infectados durante.......
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Divulgaciones
Los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con las directrices y normas establecidas por la Universidad de British Columbia.
Agradecimientos
Este trabajo fue financiado por los Institutos Canadienses de Investigación en Salud (MSH-95368, 89773 y MOP-MOP-106623 a la República Checa) y la Fundación Canadiense para la Innovación. SCM es el destinatario de una Asociación de CIHR / canadiense de la comunión Gastroenterología postdoctoral. CZ es un investigador de Nueva CIHR.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Nombre del reactivo | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
| Agujas de alimentación animal (18 x 1 ½ ") | Corchete | 7912 | |
| Suave pinzas curvas | Roboz | RS-5047 | |
| DMEM | Gibco | 11965 | |
| NOD.Cg-Prkdc scid IL2R gtm1Wjl / SzJ (NSG) | Jackson Laboratories | 005557 | Estos son los ratones que hemos utilizado, sin embargo, cualquier ratones inmunodeficientes o cepa susceptible debería funcionar. |
| RNAlater | Qiagen | 76104 | |
| Tubos de 2 ml | Axygen | MCT-200-C | |
| Tubos de 15 ml | Halcón | 352096 | |
| 6 placas | Halcón | 353046 | |
| Paraformaldehído | Microscopía electrónica de la Ciencia | 15710 | |
| α-RELMβ anticuerpos | PeproTech Inc | 0694270Rb |
Referencias
- Cliffe, L. J., Grencis, R. K. The Trichuris muris system: a paradigm of resistance and susceptibility to intestinal nematode infection. Adv. Parasitol. 57, 255-307 (2004).
- Else, K. J., Finkelman, F. D., Maliszewski, C. R., Grencis, R. K. Cyt....
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Reimpresiones y permisos
