Introducción a la técnica de ultrasonido enfocado destrucción de microburbujas

Resumen

Ultrasonido dirigido destrucción de microburbujas (UTMD) se puede utilizar para dirigir el sitio de entrega específicos de moléculas bioactivas, incluyendo genes terapéuticos, para dirigirse a los órganos accesibles a la ecografía, como el corazón y el hígado ^1-6.

Resumen

En las moléculas UTMD, bioactivos, tales como carga negativa vectores de ADN plásmido que codifica un gen de interés, se añaden a las capas de lípidos catiónicos de agentes de contraste de microburbujas ^7-9. En ratones estas microburbujas llevar por vectores se puede administrar por vía intravenosa o directamente en el ventrículo izquierdo del corazón. En animales de mayor tamaño también pueden ser inyectados a través de un catéter intracoronario. La posterior entrega de la circulación a un órgano blanco se produce por la cavitación acústica a una frecuencia de resonancia de las microburbujas. Parece probable que la energía mecánica generada por los resultados de la destrucción de microburbujas en la formación de poros transitorios en o entre las células endoteliales de la microvasculatura de la región en estudio ^10. Como resultado de este efecto sonoporación, la eficiencia de transfección en ya través de las células endoteliales se ha mejorado, y la codificación de los transgenes-vectores se depositan en el tejido circundante. ADN plásmido en el torrente circulatorio se degrada rápidamente por nucleasas en la sangre, lo que reduce aún más la probabilidad de parto para que no se sonicaron tejidos y da lugar a muy específica de órgano blanco de la transfección.

Protocolo

1. Microburbujas preparación de la pasta

1. En 10 ml de PBS mezclar 200 mg 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfatidilcolina y 50 mg de 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfatidiletanolamina con g de glucosa 1.
2. Calentar la mezcla en baño de agua hirviendo 20-30 minutos, una pipeta de mezcla cada 5 minutos.
3. La solución se puede almacenar a 4 ° C durante un máximo de 6 meses.

2. Preparación de microburbujas

1. Tome un 250 l de la solución preparada de microburbujas y se incuba a 40 ° C durante 15 minutos.
2. La solución de microburbujas pre-calentado se transfiere entonces a un microtubo de 1,5 ml qu....

Discusión

UTMD representa un nuevo enfoque para la entrega de genes. Como una plataforma tecnológica que se puede combinar con cualquiera de las muchas posibles estrategias de terapia génica, para ofrecer una gran variedad de moléculas bioactivas en un alto grado de especificidad de tejido que se desea. La principal limitación biológica de la técnica es la baja eficiencia de transfección. Otra consideración importante es la accesibilidad de los órganos diana de la ecografía, que puede ser notablemente disminuido por intermedio de.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Nombre del reactivo / equipo	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfatidilcolina	Sigma-Aldrich	P-5911	componente de la cáscara de lípidos de microburbujas
1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfatidiletanolamina	Sigma-Aldrich	P-3275	componente de la cáscara de lípidos de microburbujas
glucosa	Sigma-Aldrich	G5400	cree que estabiliza las microburbujas
tampón fosfato salino	Sigma-Aldrich	P5368
glicerol	Sigma-Aldrich	G5516	cree que para evitar que las microburbujas de coalescencia
Octafluoropropano gas	Airgas	N / A	gas inerte utilizado en aplicaciones clínicas
VialMix amalgamador dental	Bristol-Myers Squibb	N / A
1 MHz, transductor de 13mm, fuera de foco	Olimpo	A303S-SU
20 MHz Función / Generador de forma de onda arbitraria	Agilent	33220A
Amplificador de Potencia	Krohn-Hite Co.	Modelo 7500
Hidrófono	Bruel y Kjaer	Tipo 1803
Amplificador de carga	Bruel y Kjaer	Tipo 2634
500 MHz Osciloscopio	LeCroy	9354L
VisualSonics 'Vevo 2100 del sistema de imágenes con el transductor de 34 MHz	VisualSonics	2100
27G de una pulgada de catéteres vena de la cola	VisualSonics	N / A
Genie Además bomba de infusión	Kent Científico	GENIE