Questo articolo si concentrerà sulla creazione di endoderma epatiche umane da popolazioni di cellule staminali embrionali.
Nonostante i progressi nella modellazione tossicità dei farmaci umani, molti composti non durante gli studi clinici per effetti collaterali imprevisti. Il costo degli studi clinici sono notevoli, quindi è essenziale che più schermi tossicologia predittiva sono sviluppati e distribuiti nelle prime fasi di sviluppo dei farmaci (Greenhough et al 2010). Epatociti umani rappresentano il modello attuale gold standard per valutare la tossicità della droga, ma sono una risorsa limitata che presentano la funzione variabile. Pertanto, l'uso di linee cellulari immortalizzate e modelli tessuti animali sono normalmente impiegati per la loro abbondanza. Mentre entrambe le fonti sono informativi, essi sono limitati dalla scarsa funzionalità, la variabilità delle specie e / o instabilità nella cultura (Dalgetty et al 2009). Le cellule staminali pluripotenti (PSC) sono una fonte interessante alternativa di epatociti umani come cellule (HLCS) (Medine et al 2010). PSC sono in grado di rinnovamento del sé e la differenziazione di tutti i tipi di cellule somatiche trovato negli adulti e, quindi, rappresentanouna fonte potenzialmente inesauribile di cellule differenziate. Abbiamo sviluppato una procedura che è semplice, altamente efficiente, suscettibili di automazione e rese funzionali HLCS umano (Hay et al 2008; Fletcher et al 2008; Hannoun et al 2010; Payne et al 2011 e Hay et al 2011). Crediamo che la nostra tecnologia porterà alla produzione scalabile di HLCS per la scoperta, la modellazione della malattia, la costruzione di dispositivi di extra-corporea e, eventualmente, le terapie cellulari a base di trapianto.
Abbiamo sviluppato un modello semplice, omogeneo e altamente riproducibili in vitro per generare livelli scalabili di HLCS umano. Il nostro modello è stato convalidato da una serie di laboratori esterni collaborazione. Noi abitualmente caratterizzano HLCS cellule staminali derivate usando il nostro strumento di casa nella casella dei marcatori dello sviluppo e del fegato analisi specifiche funzionali (la maggior parte dei quali sono disponibili in commercio). Le fasi critiche del nostro processo sono: il mante…
The authors have nothing to disclose.
Il dottor Hay è stato sostenuto da una borsa di RCUK, il dottor West è stato sostenuto dal Dipartimento di Chirurgia, il dottor Medine è stata sostenuta da una sovvenzione del Fondo Nucleo BHF, il Sig. Baltasar Lucendo-Villarin è stata sostenuta da un dottorato di ricerca MRC Studenship. Il dottor Zhou è stato sostenuto da una borsa di studio dal governo cinese.
Matrigel coating plates and flasks
hESC Maintenance
Passaging hESCs with collagenase
Differentiation of hESCs to hepatic endoderm
Characterisation of hESC derived Hepatic Endoderm
Immunostaining
Primary antibodies | |||
Antigen* | Tipo | Supplier | Dilution |
ALB | Mouse Monoclonal | Sigma Aldrich | 1/500 |
E-Cadherin | Mouse Monoclonal | Millipore | 1/100 |
α-fetoprotein | Mouse Monoclonal | Sigma | 1/500 |
SSEA-4 FITC | Mouse Monoclonal | Biolegend | 1/100 |
IgG | Mouse Monoclonal | DAKO | 1/500 |
Secondary antibodies | |||
Anti-mouse FITC conjugate | Goat Monoclonal | Invitrogen | 1/400 |
Table 2. The antibodies used for hESC derived hepatic endoderm immunostaining, the concentrations used, the species developed in and the companies they are purchased from.
Functional Analysis of Hepatic Endoderm and Normalisation (per mg protein)
Cytochrome P450 Assays