В этой статье основное внимание будет уделено поколению человека эндодермы печеночной из человеческих эмбриональных стволовых клеточных популяций.
Несмотря на прогресс в области моделирования человеческих токсичность препарата, многие соединения неудачу во время клинических испытаний из-за непредвиденных побочных эффектов. Стоимости клинических исследований, были существенными, поэтому очень важно, чтобы более интеллектуальный экраны токсикологии разработаны и развернуты на ранних этапах разработки лекарственных средств (Greenhough и др. 2010). Человеческих гепатоцитов представляют текущие золотым стандартом модель для оценки токсичности препаратов, но ограниченный ресурс, обладающих переменной функции. Таким образом, использование увековечены клеточных линий и моделей животных тканей обычно заняты из-за их изобилия. Хотя оба эти источники являются информативными, они ограничены плохой функции, виды изменчивости и / или нестабильности в культуре (Dalgetty и др. 2009). Плюрипотентные стволовые клетки (ЭСК) являются привлекательной альтернативой источником человеческих гепатоцитов, как клетки (КГ) (Медина и др. 2010). ЭСК способны самообновления и дифференцировки для всех соматических клеток типов из взрослых, и тем самым представляютпотенциально неисчерпаемым источником дифференцированных клеток. Мы разработали процедуру, которая является простой, очень эффективный, поддается автоматизации и дает функциональную человека КГ (Hay и др. 2008; Флетчер и др. 2008; Hannoun и др. 2010; Пейн и др. 2011 и сена и др. 2011). Мы считаем, что наша технология приведет к масштабируемой производства КГ для открытия новых лекарств, болезнь моделирования, строительства дополнительных устройств-телесной и, возможно, клетка терапии на основе трансплантации.
Мы разработали простой, однородной и высокой воспроизводимостью в пробирке модель для создания масштабируемого уровня человеческого КГ. Наша модель была проверена на количество внешних сотрудничающих лабораторий. Мы регулярно характеризуют стволовых клеток производных КГ исп?…
The authors have nothing to disclose.
Доктор Сено было поддержано RCUK стипендий, д-р Запада была поддержана кафедрой хирургии, доктор Медина была поддержана грантом Фонда Основные BHF, г-н Бальтасар Lucendo-Villarin была поддержана MRC кандидат Studenship. Д-р Чжоу был поддержан стипендию китайского правительства.
Matrigel coating plates and flasks
hESC Maintenance
Passaging hESCs with collagenase
Differentiation of hESCs to hepatic endoderm
Characterisation of hESC derived Hepatic Endoderm
Immunostaining
Primary antibodies | |||
Antigen* | Tipo | Supplier | Dilution |
ALB | Mouse Monoclonal | Sigma Aldrich | 1/500 |
E-Cadherin | Mouse Monoclonal | Millipore | 1/100 |
α-fetoprotein | Mouse Monoclonal | Sigma | 1/500 |
SSEA-4 FITC | Mouse Monoclonal | Biolegend | 1/100 |
IgG | Mouse Monoclonal | DAKO | 1/500 |
Secondary antibodies | |||
Anti-mouse FITC conjugate | Goat Monoclonal | Invitrogen | 1/400 |
Table 2. The antibodies used for hESC derived hepatic endoderm immunostaining, the concentrations used, the species developed in and the companies they are purchased from.
Functional Analysis of Hepatic Endoderm and Normalisation (per mg protein)
Cytochrome P450 Assays