La arteria cerebral media (MCA) ligadura es una técnica para estudiar la isquemia cerebral focal en modelos animales. En este método, la arteria cerebral media se expone mediante craneotomía y se liga con cauterización. Este método da volumen del infarto altamente reproducible y el aumento de post-operatorio las tasas de supervivencia en comparación con otros métodos disponibles.
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Artículo de método
La aplicación de la Permanente Ligadura arteria cerebral media en el ratón
En este artículo
Resumen
Resumen
Isquemia cerebral focal se encuentra entre el tipo más común de accidente cerebrovascular en los pacientes. Debido a la importancia clínica no ha habido un esfuerzo prolongado para desarrollar modelos animales para estudiar los acontecimientos que se desarrollan durante la lesión isquémica. Estas técnicas incluyen transitoria o permanente, los modelos de isquemia focal o global con muchos diferentes modelos animales, con los roedores más comunes son.
El método permanente MCA ligadura que también se conoce como pMCAo en la literatura se utiliza ampliamente como un modelo de isquemia focal en los roedores 1-6. Este método fue descrito originalmente para las ratas por Tamura et al. en 1981 7. En este protocolo se utilizó una craneotomía para acceder a la MCA y de las regiones proximal se ocluye por electrocoagulación. Los infartos a regiones corticales y sobre todo del estriado a veces dependiendo de la localización de la oclusión. Esta técnica está bien establecido y utilizado en muchos laboratorios de 8.13. El uso precoz de esta técnica condujo a la definición y descripción del "núcleo del infarto" y "penumbra", 14-16, y es a menudo utilizado para evaluar el potencial de compuestos neuroprotectores 10, 12, 13, 17. Aunque los estudios iniciales se realizaron en ratas, la ligadura permanente MCA ha sido utilizado con éxito en ratones con ligeras modificaciones, 18-20.
Este modelo produce infartos reproducible y el aumento de las tasas de supervivencia después. Aproximadamente el 80% de los accidentes cerebrovasculares isquémicos en los humanos ocurren en el área de MCA 21 y por lo tanto este es un modelo muy importante para los estudios de tiempos. En la actualidad, hay una escasez de tratamientos eficaces para los pacientes con ictus, y por lo tanto hay una necesidad de un buen modelo para evaluar el potencial compuestos farmacológicos y evaluar los resultados fisiológicos. Este método también puede ser utilizado para el estudio de los mecanismos de respuesta a la hipoxia intracelular in vivo.
A continuación, presentamos la cirugía de ligadura de MCA en un ratón C57/BL6. Se describe la preparación pre-quirúrgica, la cirugía de ligadura de MCA y 2,3,5 cloruro de trifenil tetrazolio (TTC) tinción para la cuantificación de los volúmenes de infarto.
Protocolo
Este protocolo fue aprobado por la Universidad de Rochester comité dedicado a la ética del uso de animales en la investigación (UCAR). Técnicas de asepsia deben ser seguidas durante el protocolo. El uso de guantes estériles y mascarilla es necesario.
Todos los equipos, materiales, productos químicos y herramientas que se utilizan en el protocolo se describen en la Tabla 1.
1. La preparación pre-quirúrgica
- Se inyecta por vía subcutánea ratones con buprenorfina (0.05mg/kg) 2 h antes de la cirugía, inmediatamente después de la cirugía y luego cada 3-5 h durante las primeras 24 horas post-operatorio.
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Discusión
El método permanente MCA ligadura da volumen del infarto altamente reproducible y el aumento de post-operatorio las tasas de supervivencia en comparación con otros métodos disponibles. La facilidad y la corta duración (~ 30 min) del procedimiento que sea aún más práctico. El método es ampliamente utilizado tanto en ratones y ratas.
Esta técnica requiere una cirugía invasiva bajo un microscopio estereoscópico. Por lo tanto, la experiencia en la operación bajo el microscopio y el perfeccionami.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
La técnica quirúrgica fue adquirido originalmente en el laboratorio del doctor William D. Hill, en el Colegio Médico de Georgia. Los autores también desean agradecer al Dr. David A. Rempe y Prifti Landa para el uso de la cámara de disección. Esta investigación fue financiada por el NIH NS041744, NS051279, NS064700 F31 y 30815697D AHA.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| NOMBRE | Empresa y el número CATÁLOGO | ||
| A. Soluciones y Productos Químicos | |||
| Solución de povidona yodada, el lavado quirúrgico | Aplicare, 82-209 | ||
| 70% de etanol | Koptec, V1001 | ||
| 2,3,5 cloruro de trifenil tetrazolio (TTC) | Sigma, T8877 | ||
| Paraformaldehído al 4% | Microscopía electrónica de Ciencias, 159SP | ||
| Tampón fosfato pH Saline,: 7.4 | Hecho y se esterilizan en el laboratorio. | ||
| Aceite mineral | PML microbiológicos, R6570 | ||
| Isofluorano | La Compañía Butler, 029405 | ||
| La buprenorfina (0.3mg/ml) | Hospira, NDC 0409-2012-32 | ||
| Las lágrimas artificiales | La Compañía Butler, 007312 | ||
| Recuperación de Gel | Claro H 2 O, 72-01-5022 | ||
| B. Materiales y equipo quirúrgico | |||
| C57/BL6 ratón, 10-12 semanas de edad | La colonia fue criado en el vivero universitario | ||
| 100% tanque de oxígeno | Airgas | ||
| Vaporizador anestésico y un medidor de flujo | Surgivet, Modelo 100 | ||
| Almohadilla eléctrica con sonda rectal | Herramientas de Bellas Ciencia, TR200 | ||
| Microscopio de disección | Zeiss, Stemi 2000 | ||
| Calefacción de | Petco Services Ltd. 0307-013 | ||
| Embarcación pequeña Set cauterizador | Herramientas de Bellas Ciencia, 18000-00 | ||
| Mini bomba peristáltica | Harvard Apparatus, GP II | ||
| 1 ml jeringa | BD, 329650 | ||
| 18G aguja | Becton Dickinson, 305196 | ||
| Quirúrgico 5,0 sutura de nylon | Ethilon, 698H | ||
| Bloque de seccionamiento | Kent Científico, 1mm | ||
| Hojas de un solo filo de la navaja | Microscopía electrónica de Ciencias, 71962 | ||
| Etiqueta de la cinta | Scienceware, Bel-Art Productos F13463-2075 | ||
| Esponjas de gasa | Kendall Curity 2252, Johnson y Johnson 6415 | ||
| Aplicadores con punta de algodón | Puritana 806-CMT | ||
| C. Cirugía Herramientas | |||
| Tijeras quirúrgicas primavera | Herramientas de Bellas Ciencia 15003-08 | ||
| Pinza en ángulo Microdissecting | Herramientas de Bellas Ciencia 5 / 45 | ||
| Pinzas curvas Microdissecting | Bellas Ciencia Herramientas 5 Ti | ||
| Bellas tijeras rectas | Herramientas de Bellas Ciencia 14568-12 | ||
| Gubia hueso curvo | Herramientas de Bellas Ciencia 16021-14 | ||
| Pinzas hemostáticas curvas Hartman | Herramientas de Bellas Ciencia 13003-10 |
Tabla 1. La lista de materiales, herramientas y productos químicos utilizados para el procedimiento de ligadura de MCA. A. Las soluciones y productos químicos, materiales quirúrgicos y B. Equipos, Herramientas C. Cirugía.
Referencias
- Britton, M., Rafols, J., Alousi, S., Dunbar, J. C. The effects of middle cerebral artery occlusion on central nervous system apoptotic events in normal and diabetic rats. Int J Exp Diabesity Res. 4, 13-20 (2003).
- Ciceri, P., Rabuffetti, M., Monopoli, A., Nicosia, S.
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Reimpresiones y permisos
