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Artículo de método

Análisis basado en citometría de flujo de la activación de células dendríticas mediante complejos inmunitarios

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8 de julio de 2025

En este artículo

Resumen

Fuente: Santana-Magal, N., et al. Protocolo de aislamiento de células dendríticas derivadas de monocitos de ratón y su posterior activación in vitro con complejos inmunes tumorales.J. Vis. Exp. (2018)

Este video muestra un protocolo para evaluar la activación de células dendríticas utilizando células tumorales recubiertas de inmunoglobulina G (IgG). Las células dendríticas internalizan las células tumorales recubiertas de IgG, procesan los antígenos tumorales y los presentan en la superficie a través de moléculas MHC-II, junto con la coexpresión de la molécula coestimuladora CD86. A continuación, estas células dendríticas se someten a inmunotinción dirigida a MHC-II y CD86 y a un análisis de citometría de flujo para identificar su estado de activación.

Protocolo

Todos los procedimientos relacionados con la recolección de muestras se han realizado de acuerdo con las directrices del IRB del instituto.

>1. Aislamiento de células dendríticas derivadas de monocitos asociadas a tumores

  1. En una campana de flujo laminar, extirpe los tumores de ratones sacrificados con CO2 y coloque los tumores en medio RPMI sin suero fetal bovino (FBS).
    nota: Se recomienda encarecidamente afeitar a los ratones y rociarlos con etanol al 70% antes de extirpar los tumores para minimizar las posibles contaminaciones del pelaje. Asegúrese de que el tumor no supere l....

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Divulgaciones

No se han declarado conflictos de interés.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Ficoll-Paque PREMIUMGE-Cuidado de la salud17-5442-02
OptiPrepTecnologías StemCell7820
Microperlas CD45MiltenyiTeléfono 130-052-301
Kit de aislamiento de monocitos EasySepTecnologías StemCellAño 19861
Colagenasa IVsigmaC9697-50MGAnalice cada lote en busca de endotoxinas
DNasa IsigmaDN25-10MG
HBSSThermoFisher14025092
FBSThermoFisher16140071Analice cada lote en busca de endotoxinas
PE-CD11cBioleyenda117307
APC-CD11bBioleyenda101211
Violeta Brillante 650 MHCIIBioleyenda107641
AF48- CD86Bioleyenda105017
APC/Cy7-LY-C6Bioleyenda108423
PE/Cy7-CD15Bioleyenda135523

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