El artículo describe una técnica simplificada para extirpar la córnea y la retina para destripar los tejidos del globo ocular de donantes cadavéricos humanos. La técnica descrita aquí ayudará a tejidos especiales de buena calidad para ser utilizadas para el trasplante, con fines quirúrgicos o de investigación, sin dañar otros tejidos del globo ocular.
La enucleación es el proceso de recuperar el globo ocular de un donante cadáver, dejando el resto del mundo sin ser molestados. La escisión se refiere a la recuperación de los tejidos oculares, especialmente la córnea, cortándolo separado del globo ocular. La evisceración es el proceso de eliminación de los órganos internos a que se refiere aquí como la retina. El globo ocular está formado por la córnea, la esclera, el cuerpo vítreo, el cristalino, el iris, la retina, la coroides, etc músculos (Figura Suplemento 1). Cuando un paciente sufre de daños en la córnea, la córnea debe ser eliminado y una sana debe ser trasplantados por cirugías queratoplástico. Los trastornos genéticos o defectos en la función retiniana puede comprometer la visión. Globos oculares humanos puede ser utilizado para diversos procedimientos quirúrgicos, como la banca del ojo, el trasplante de córnea humana o de la esclerótica y la investigación sobre los tejidos oculares. Sin embargo, existe poca información disponible sobre la escisión humana la córnea y la retina, probablemente debido a la laccesibilidad imited a los tejidos humanos. La mayoría de los estudios que describen procedimientos similares se realizan en modelos animales. Los investigadores científicos se basan en la disponibilidad de los tejidos oculares correctamente disecados y bien conservada con el fin de ampliar el conocimiento sobre el desarrollo humano los ojos, la homeostasis y la función. Al recibir gran cantidad de globos oculares fuera de las cuales aproximadamente el 40% (Tabla 1) de ellos se utilizan con fines de investigación, que son capaces de realizar gran cantidad de experimentos en estos tejidos, la definición de las técnicas de los impuestos especiales y preservar de forma regular.
La córnea es un tejido avascular que permite la transmisión de luz en la retina y para este propósito debe mantener siempre un buen grado de transparencia. Dentro de la córnea, la región limbo, que es un depósito de las células madre, ayuda a la reconstrucción de las células epiteliales y restringe el sobrecrecimiento de la conjuntiva mantener la transparencia corneal y la claridad. El tamaño y TH ickness de la córnea son fundamentales para la visión clara, como los cambios en cualquiera de ellos podría dar lugar a distraerse, visión borrosa. La córnea comprende de 5 capas; una) epitelio, b) la membrana de Bowman, c), estroma, d), la membrana de Descemet y e) endotelio. Todas las capas deben funcionar adecuadamente para garantizar una visión clara 4,5,6. La coroides es la túnica intermedia entre la esclerótica y la retina, limita al interior por la membrana de Bruch y es responsable del flujo de sangre en el ojo. El coroides también ayuda a regular la temperatura alimento y suministros a las capas externas de la retina 5,6. La retina es una capa de tejido nervioso que cubre la parte posterior del globo ocular (Figura Supl. 1) y consta de dos partes: una parte fotorreceptora y una parte no receptiva. La retina ayuda a recibir la luz de la córnea y el cristalino y la convierte en la energía química eventualmente en el cerebro con la ayuda del nervio óptico 5,6. ove_content "> El objetivo de este documento es proporcionar un protocolo para la disección de los tejidos de la córnea y la retina de los globos oculares humanos. Evitar la contaminación cruzada con los tejidos adyacentes y la preservación de la integridad del ARN es de una importancia fundamental como tales tejidos son indispensables para fines de investigación dirigidos en (i) la caracterización del transcriptoma de los tejidos oculares, (ii) el aislamiento de células madre para los proyectos de medicina regenerativa, y (iii) la evaluación de las diferencias histológicas entre los tejidos normales del / los sujetos afectados. En este trabajo se describe la técnica que actualmente se utiliza para eliminar la córnea, la coroides, la retina y los tejidos de un globo ocular. A continuación presentamos un protocolo detallado para la disección del globo ocular humano y la escisión de tejidos de la córnea y la retina. El vídeo que acompaña ayudará a los investigadores a aprender una técnica apropiada para la recuperación de preciosos tejidos humanos que son difíciles de encontrar regularmente.
1. En escisión in situ de la córnea a partir de globos oculares
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Ambos, la escisión correcta y adecuada conservación de los tejidos de la córnea y la retina son críticos, como los defectos de menor importancia tales como el daño endotelial o elevado número de pliegues de Descemet puede conducir al fracaso del injerto de córnea, mientras que las alteraciones de temperatura o mal manejo puede poner en peligro la integridad de los tejidos retina. El objetivo de este trabajo es mostrar cómo los tejidos corneales y retinianas se pueden aislar de manera óptima, sin provocar daños o alterac.......
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Los autores no tienen conflicto de intereses.
Este trabajo fue apoyado en parte por subvenciones de la Regione Veneto (Ricerca Sanitaria Finalizzata n.292/2008 y Ricerca Sanitaria Finalizzata 2009). Los autores agradecen al Dr. C. Griffoni para los datos de 2009/2010 de resumen sobre el uso de globos oculares humanos.
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Materiales para la escisión de la córnea y la retina.
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Descripción del producto | Dimensiones | Empresa / Instituto | |
| Vigilado bisturí desechable | Hoja tamaño 15 | Swann-Morton | |
| Vendajes estériles | 5 cm x 5 cm, 8 capas, 5 piezas | Artsana | |
| Estéril toalla médica desechable | 35 X 50 cm | U.Jet | |
| Tijeras estériles | Hojas de 24 mm / longitud total. 95 mm de curvas, romas | e.janach | |
| Pinzas estériles | De acero inoxidable de 11 mm -100 x 2 gobernado por los dientes de 0.70 mm | e.janach | |
| Corneal garras - de dispositivos médicos desechables | NIIOS (Hippocratech) | ||
| Preparativos | |||
| PBS | 100 ml de PBS [10x] en 900 ml de D / W (agua destilada) | Sigma-Aldrich | |
| Na-tiosulfato | 1 g de Na-tiosulfato en 1 litro de PBS [1x] | Sigma-Aldrich | |
| I-PVP | 5 g de PVP-I en 1 litro D / W | Sigma-Aldrich |
Tabla 2. La tabla se describen los materiales utilizados para la escisión de la córnea y la retina y la compañía son recibidos desde.
Materiales para medio de almacenamiento (2000 ml).
| Componentes | Proveedor | Número de catálogo | Concentración | Cantidad |
|---|---|---|---|---|
| MEM(1X) líquida | Invitrogen | 32360-034 | 1900 ml | |
| Piruvato de sodio | Invitrogen | 11360-039 | 1mM (10 ml / l) | 20 ml |
| L-glutamina | Invitrogen | 25030-032 | 2 mM (10 ml / l) | 20 ml |
| Antibiótico / antimicótico | Sigma-Aldrich | A5955-20ML | 10ml / l | 20 ml |
| Suero de ternero recién nacido | Invitrogen | 26010-74 | 2% (20 ml / l) | 40 ml |
Tabla 3. Materiales para soporte de almacenamiento.
Preparación del medio de almacenamiento
Añadir todos los ingredientes que utilizan las concentraciones específicas dadas anteriormente en un frasco y mezcle bien. Filtrarlosusando tamaño de poro de 0,2 micras (Millipore, Milán, Italia) con ayuda de una bomba peristáltica. Preservar el medio en las botellas a temperatura ambiente.
Materiales para el medio de transporte (2000 ml).
| Componentes | Proveedor | Número de catálogo | Concentración | Cantidad |
|---|---|---|---|---|
| MEM (1X) líquida | Invitrogen | 32360-034 | 1800 ml | |
| Piruvato de sodio | Invitrogen | 11360-039 | 1mM (10 ml / l) | 20 ml |
| L-glutamina | Invitrogen | 25030-032 | 2 mM (10 ml / l) | 20 ml |
| Suero de ternero recién nacido | Invitrogen | 26010-74 | 2% (20 ml / l) | 40 ml |
| El dextrano T500 | Pharmacosmos | 551005004007 | 6% (60 g / litro) | 120 g / l |
Tabla 4. El material para el medio de transporte.
Preparación del medio de transporte
Añadir dextrano al 6% en alrededor de 1,5 litro de MEM y deja toda la noche. Añadir el resto de ingredientes en los medios de comunicación y filtrar con filtro de 0,2 micras (Millipore, Milán, Italia), utilizando una bomba de vacío. Preservar el medio en las botellas a temperatura ambiente.
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