Los modelos experimentales de ratón de asma alérgica ofrecen nuevas posibilidades para el estudio de patogénesis de la enfermedad y el desarrollo de nuevas terapias. Estos modelos se adaptan bien a los factores de medición que regulan la respuesta inmune alérgica, inflamación de las vías, y la fisiopatología pulmonar.
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Artículo de método
Modelo murino de asma inducida por alergenos
En este artículo
Resumen
Resumen
El asma es una causa importante de morbilidad y mortalidad, que afecta a unos 300 millones de personas en todo el mundo. 1 Más de un 8% de la población de EE.UU. tiene asma, con la creciente prevalencia. 2 Al igual que con otras enfermedades, los modelos animales de enfermedad de las vías respiratorias alérgicas facilitan en gran medida comprensión de la fisiopatología subyacente, ayudan a identificar posibles dianas terapéuticas, y permitir que las pruebas preclínicas de posibles nuevas terapias. Los modelos de la enfermedad de las vías respiratorias alérgicas se han desarrollado en varias especies animales, pero los modelos murinos son particularmente atractivas debido al bajo costo, disponibilidad, y bien caracterizados sistema inmunológico de estos animales. 3 Disponibilidad de una gran variedad de cepas transgénicas aumenta aún más el atractivo de estos modelos. 4 A continuación se describen dos modelos murinos de enfermedad de las vías respiratorias alérgicas, tanto en el empleo de la ovoalbúmina como antígeno. Después de sensibilización inicial por inyección intraperitoneal, un modelo Delivres la exposición al antígeno por nebulización, el otro por la entrega intratraqueal. Estos dos modelos ofrecen ventajas complementarias, con cada imitando las características principales de asma humano. 5
Las principales características de asma aguda incluyen una respuesta exagerada a los estímulos vía aérea, tales como la metacolina (hiperreactividad de las vías respiratorias; AHR) y eosinófilos rica inflamación de las vías. Estos son también efectos importantes de la exposición al alérgeno en los modelos murinos, 5,6, y se describen las técnicas para su medición y por lo tanto la evaluación de los efectos de la manipulación experimental. En concreto, se describen ambos invasivos y no invasivos 7-8 técnicas para la medición de la hiperreactividad de las vías respiratorias, así como los métodos para evaluar la infiltración de células inflamatorias en las vías respiratorias y el pulmón. Las vías respiratorias células inflamatorias son recogidos por lavado broncoalveolar, mientras que la histopatología de pulmón se utiliza para evaluar los marcadores de inflamación en todo el órgano. Estostécnicas proporcionan herramientas poderosas para el estudio del asma en formas que no serían posibles en los seres humanos.
Protocolo
I. La sensibilización alérgica y el desafío (ver Figura 1)
A. Para Challenge intratraqueal
- Por sensibilización inicial, inyectar macho o hembra C57BL / 6 o ratones BALB / c (6-8 semanas de edad) por vía intraperitoneal el día 0 y de nuevo el día 7 con 20 mg de ovoalbúmina (OVA; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) emulsionado en 0,2 ml de fosfato de solución salina estéril tamponada (PBS) que contenía 2 mg de hidróxido de aluminio (Sigma-Aldrich) o con 2 mg de hidróxido de aluminio en 0,2 ml de PBS estéril como control.
- Desafío con el antígeno como apropiado (por ejemplo, en los días 14, 16, 18 y 20). Desafío p....
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Discusión
Los modelos animales de enfermedad de las vías respiratorias alérgicas constituyen instrumentos importantes para los estudios pertinentes para el asma clínica. Una serie de modelos diferentes, que emplean diferentes especies y antígenos, se han desarrollado. El ratón, una especie de laboratorio atractivas y de uso frecuente, también ofrece una serie de ventajas para los modelos de la enfermedad de las vías respiratorias alérgicas. 9,10 Aunque estos modelos no asemejar al asma en todos los aspectos, 11
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Divulgaciones
Los experimentos en animales se realizaron de conformidad con las directrices y regulaciones establecidas por el Comité Atlanta VAMC IACUC bajo el protocolo # V010-10.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por el NIH Grant HL093196 (RCR) y el Centro de Atlanta y la Fundación de Educación (AREF).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Nombre del Material | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
| Ovoalbúmina | Sigma-Aldrich St. Louis, MO | A5503 | |
| Hidróxido de aluminio | Sigma-Aldrich | 239186 | |
| Acetil-β-methylcholine cloruro de | Sigma-Aldrich | A2251 | |
| Sal de sodio pentobarbital | Sigma-Aldrich | P3761 | |
| Pletismografía de cuerpo entero (WBP) del sistema | Buxco de Investigación de Sistemas Wilmington, Carolina del Norte | http://www.buxco.com | |
| FlexiVent | SCIREQ, Inc. Montreal, Canadá | http://www.scireq.com | |
| Microscopio de luz | Leica Microsystems, Inc. Buffalo Grove, IL | ||
| Cytospin 4 | Thermo Scientific Asheville, Carolina del Norte | ||
| Diff-Quick mancha | Siemens Newark, DE | B4132-1A | |
| Pipeta repetitiva | Tridak Torrington, CT | STP4001-0025 |
Referencias
- Braman, S. S. The global burden of asthma. Chest. 130, 4S-12S (2006).
- Akinbami, L. J., Mooman, J. E., Liu, X. Asthma Prevalence, Health Care Use, and Mortality: 2005-2009. National Health Statistics Reports. 32, National Center for Health Statistics. Hyattsville, MD. 2005-2009 (2011).
- Bates, J. H., Rincon, M., Irvin, C. G.
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Reimpresiones y permisos
