Colección Protocolo de páncreas humano

Summary

Este video muestra la disección de un procedimiento para la tramitación de páncreas humano en los formatos de almacenamiento. Orientación anatómica se mantiene a lo largo de las regiones pancreáticas para permitir la definición de la composición islote regional y densidad.

Abstract

Esta disección y el procedimiento de muestreo fue desarrollado para la Red de Donantes de Órganos de páncreas con diabetes (nPOD) programa para estandarizar la preparación de páncreas se recuperó de los donantes de órganos cadavéricos. El páncreas se divide en 3 grandes regiones (cabeza, cuerpo, cola), seguidos de las secciones transversales de serie en toda la medial al eje lateral. Secciones alternas se utilizan para parafina fijo y frescas bloques congelados y muestras remanentes se pican para complemento preparaciones de muestras congeladas, ya sea con o sin inhibidores de RNAsa, para el ADN, ARN, o aislamiento de las proteínas. El objetivo general del procedimiento de disección de páncreas es de probar todo el páncreas, mientras que el mantenimiento de la orientación anatómica.

Endocrino heterogeneidad celular en términos de composición islote, tamaño, y los números se informó de islotes humanos en comparación con ¹ islotes de roedores. La mayoría de los islotes humanos de la cabeza del páncreas, regiones del cuerpo y la cola están compuestos de insulina-containing células beta seguido por las menores proporciones de glucagón que contiene alfa-células y que contienen somatostatina-delta-células. Polipéptido pancreático que contienen las células del PP y la grelina que contienen células épsilon, pero también están presentes en pequeñas cantidades. En contraste, la región uncinado contiene islotes que están compuestos principalmente de pancreáticos polipéptido que contienen células PP ^2. Estas variaciones de los islotes regionales surgen de las diferencias de desarrollo. El páncreas se desarrolla a partir de las yemas de páncreas ventral y dorsal del intestino anterior y después de la rotación del estómago y el duodeno, se mueve el lóbulo ventral y se fusiona con el dorsal ^3. El lóbulo ventral forma la parte posterior de la cabeza incluyendo el proceso uncinado mientras que el lóbulo dorsal da lugar a que el resto del órgano. La variación de páncreas Regional se informó también a la región de la cola que tiene una mayor densidad de islotes en comparación con otras regiones y los componentes derivados del lóbulo dorsal-se someten a una atrofia selectiva de la diabetes tipo 1 Órganos y tejidos adicionales a menudo son recuperados de los donantes de órganos y son los ganglios linfáticos, el bazo páncreas y páncreas no los ganglios linfáticos. Estas muestras se recuperaron con formatos similares como para el páncreas con la adición de aislamiento de células crioconservados. Cuando el duodeno proximal se incluye con el páncreas, la mucosa duodenal puede ser coleccionada para los bloques de parafina y congeladas y preparaciones picadas se congelaron.

Protocol

1. Set-up

1. Casetes de etiquetas para los bloques de parafina de forma manual con un lápiz, o automáticamente con una impresora de cartucho. Incluye el identificador de los donantes (CaseID), el tipo de muestra, número de parte alícuota, y cualquier otro documento de identidad única (la hoja de Caso, el Apéndice 1 ).
2. Etiqueta OCT moldes como para cassettes con un marcador permanente. Cortar rectángulos de 5-10 cm de papel de aluminio.
3. Imprimir etiquetas o de forma manual con marcador permanente todos los viales y tubos. Incluya viales suficientes para mu....

Discussion

El objetivo de este procedimiento es definir un proceso estándar de páncreas que puede ser armonizado en los distintos sitios de recolección de varios, para poder comparar los resultados obtenidos con los diferentes grupos. El método se basa en la disección estándar de prácticas de patología quirúrgica con medidas adicionales para la anotación de las regiones más importantes del páncreas seguido de intra-regionales subdivisiones. La estandarización de los métodos de procesamiento de especímenes biológicos se requiere pa.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Nombre del reactivo	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Incluidos los instrumentos de disección con 22 hojas de bisturí	Varios	Varios
Tubos de centrífuga (15 y 50 ml)	Fisher Scientific	05-539-5, 430828	Estéril
Criotubos (1,8 ml)	VWR América del Norte	89004-300	Estériles, los códigos de barras opcionales
RNAlater	Ambion	AM7021
Tinta Patología Quirúrgica
Casetes	Mercedes Médico	CAS ECO109
10% formalina tamponada neutra	Fisher Scientific	23-245-685
OCT medio de congelación	TissueTek	4583
Moldes	ThermoScientific	58952	Varios tamaños
Isopentano	Fisher Scientific	O3551-4	Escalofriante baño de octubre
El hielo seco			Escalofriante baño de octubre
El nitrógeno líquido en el vaso Dewar			Coloque los crioviales de congelación
Placa de cultivo celular (100 mm)	Corning	430167	Estéril
Hyclone DMEF	ThermoScientific	SH30023.01	Almacén estéril, refrigerados, incluidos glutamina
suero bovino fetal	Cellgro	35 a 010 CV	Alícuotas estériles, congelados tienda
La penicilina / estreptomicina / antifúngico	GIBCO	15240-062	Alícuotas estériles, congelados tienda
Escriba 9 de parafina	Richard Allan-Científico	8337
D-PBS 1X	GIBCO	14190-144	Estéril
16% de paraformaldehído	EM Ciencias	15710	Haga tienda fresca, refrigerada
8% de glutaraldehído	EM Ciencias	16019	Haga tienda fresca, refrigerada
Nivel de Bioseguridad 2 campana	Varios
Ultra-bajo el congelador	Varios
Impresora Casete Sakura	Sakura
Sakura VIP300	Sakura		Procesador automático de parafina
Estación de parafina incrustación	ThermoFisher