Evaluación ex vivo de la contractilidad, fatigabilidad y alternancia en aislados músculos esqueléticos

Resumen

Se describe un método para medir directamente la fuerza muscular, la fuerza muscular, la cinética de contracción y fatigabilidad de los músculos esqueléticos aislados en un In vitro Sistema mediante la estimulación del campo. Información valiosa sobre Ca ^{2 +} Propiedades de manipulación y la maquinaria contráctil del músculo se puede obtener utilizando diferentes protocolos de estimulación.

Resumen

A continuación se describe un método para medir la contractilidad de los músculos esqueléticos aisladas. Parámetros como la fuerza muscular, la fuerza muscular, la cinética de contracción, fatigabilidad y la recuperación después de la fatiga puede ser obtenida para evaluar aspectos específicos del acoplamiento excitación-contracción (ECC) de proceso, tales como excitabilidad, maquinaria contráctil y Ca ^{2 +} capacidad de manipulación. Este método elimina la inervación y de la sangre y se centra en el músculo esquelético aislado en sí. En forma rutinaria utilizar este método para identificar los componentes genéticos que alteran la propiedad contráctil del músculo esquelético, aunque la modulación de Ca ^{2 +} vías de señalización. A continuación, describimos un fenotipo recién identificado el músculo esquelético, es decir, alternans mecánico, como un ejemplo de las diversas informaciones y rica que se puede obtener utilizando el ensayo in vitro de la contractilidad del músculo. Combinación de este ensayo con ensayos de células individuales, los enfoques genéticos y bioquímicosstrY ensayos pueden proporcionar importantes conocimientos sobre los mecanismos de la ECC en el músculo esquelético.

Introducción

Los músculos del esqueleto unen a los huesos del esqueleto y generar fuerzas contráctiles bajo el control del sistema nervioso central. Acoplamiento excitación-contracción (ECC) se refiere al proceso de convertir un estímulo eléctrico a una respuesta mecánica. Ca ^{2 +} de señalización es un componente esencial de la función contráctil en el músculo esquelético. Efectiva movilización de Ca ^{2 +} del retículo sarcoplásmico (SR) es un componente importante para la ECC en células musculares ^{1, 2,} y los cambios en la concentración intracelular de Ca ^{2 +} señalización subyacen a la disfunción contráctil cor....

Protocolo

Solución composición:

2,5 mM Ca ^{2 +} Tyrode solución: 140 mM NaCl, 5 mM KCl, 10 mM HEPES, 2,5 mM CaCl _2, 2 mM de MgCl ₂ y 10 mM de glucosa

0 mM Ca ^{2 +} Tyrode solución: 140 mM NaCl, 5 mM KCl, 10 mM HEPES, 2 mM de MgCl _2, 0,1 mM de etileno glicol tetraacético (EGTA) y 10 mM de glucosa

Nota: La solución de baño debe ser saturado con 100% de O ₂ si se utiliza la solución anterior, pero con 95% de O ₂ con 5% de CO ₂ si se utiliza basadas en bicarbonato tampones para mantener el pH constante. 2,5 mM Ca

Discusión

Medición de la fuerza contráctil y la tendencia a la fatiga es importante para la evaluación global de la función del músculo esquelético. El objetivo principal de este ensayo es determinar los cambios en la fuerza muscular y las propiedades fatigantes bajo ciertas condiciones patológicas, como la sarcopenia y la fatiga muscular, y para evaluar el efecto de las drogas / reactivos sobre la contractilidad muscular. Puesto que la fuerza muscular está muy relacionada con la concentración de Ca ^{2 +} liberación extr.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Nombre del reactivo	Empresa	Número de catálogo	Comentarios (opcional)
2-APB	Tocris	1224	Bloqueador de una serie de Ca 2 + canales de entrada incluyen SOC y TRP, etc
SKF96365	Sigma	SKF-96365	Bloqueador de un número de Ca 2 + canales de entrada incluyendo SOC y mediada por el receptor de Ca 2 + entrada etc
BTP-2	Millipore	203890-5MG	Relativamente específico SOC bloqueador
CPA	Sigma	C1530	Reversible bloqueador SERCA
cafeína	Sigma	C0750	Rápida acción agonista RyR
Radnoti Cuatro Tissue Unidad de Órganos del Sistema Bath	Radnoti	159920
Combinación de soporte de tejido / electrodo de estimulación	Radnoti	160151	Vertical Tipo Zig Zag con soporte de tejido
Quad Bridge Amp	ADInstruments	FE224
PowerLab/400	ADInstruments		Este producto ya no se encuentra disponible. Elige otra versión del sistema de adquisición de datos.
Transductores de fuerza (5 mg - 25 g)	ADInstruments	MLT0201/RAD
Tabla 4.02	ADInstruments		LabChart 7.3 es la última versión del software para gráficos.
S8800 Dual Pulso Digital Estimulador	TECNOLOGÍAS DE LA HIERBA		Este producto ya no se encuentra disponible. S88X de salida dual de la Plaza de pulso estimulador es un estimulador más reciente.
Transformador RF Unidad de Aislamiento	TECNOLOGÍAS DE LA HIERBA	Modelo SIU5